張中超 李林鵬 郭德洋

作為最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥，甲狀腺癌根據(jù)病理表現(xiàn)主要分為4種：甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carinoma，PTC)、甲狀腺濾泡狀癌(follicular thyroid cancer，F(xiàn)TC)、甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid cancer，MTC)、甲狀腺間變性癌(anaplastic thyroid cancer，ATC)[1]，PTC屬于其中最常見且惡性程度最低的癌癥，在女性、兒童中發(fā)病率相對較高[2]。全球性調(diào)查顯示，PTC發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長趨勢[3]；另一方面，大部分PTC患者雖然取得了很好療效，但仍有少數(shù)患者存在預(yù)后差，諸如癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等問題。國內(nèi)外研究證明PTC的發(fā)生發(fā)展與多種分子蛋白相關(guān)，例如，Wnt3a和Wnt5a高表達于PTC病灶組織，與TNM分期、腫瘤分化、轉(zhuǎn)移等相關(guān)[4]；miR-155低表達于PTC病灶組織，上調(diào)其表達可有效抑制腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移[5]。因此，研究PTC發(fā)生、發(fā)展分子標志物十分必要，有利于為PTC的早期診斷、靶向治療以及預(yù)后提供參考價值。本研究采用免疫組化技術(shù)檢測PTC患者叉頭框蛋白Q1(forkhead box1 Q1，F(xiàn)OXQ1)和間皮瘤抗原-1 (HBME-1)的表達水平，同時研究兩者與其臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年5月于我院行手術(shù)切除的PTC組織114例及其配對癌旁正常甲狀腺組織114例，另選取結(jié)節(jié)性甲狀腺瘤組織78例作為對照，分別歸為A、B、C 3組。PTC患者中男性41例，女性73例；年齡16～74歲，平均年齡(43.55±2.97)歲；TNM分期[6]：Ⅰ～Ⅱ期70例，Ⅲ～Ⅳ期44例；病灶直徑≤1 cm 47例，>1～4 cm 59例，>4 cm 8例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例。C組男、女各39例；年齡18～74歲，平均年齡(44.02±1.86)歲。PTC患者納入標準：①符合中華醫(yī)學(xué)會確定的PTC相關(guān)診斷標準[6]；②首發(fā)PTC；③均接受手術(shù)治療，取得癌組織標本和癌旁組織標本，且對應(yīng)臨床病歷資料齊全；④自愿參與并簽署知情同意書。排除標準：①抗腫瘤治療史；②合并其他惡性腫瘤史；③其他內(nèi)分泌系統(tǒng)功能障礙。

1.2 實驗試劑與設(shè)備

FOXQ1鼠抗人抗體、HBME-1鼠抗人抗體購自美國Abcam公司，通用型IgG、二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine，DAB)顯色試劑盒均購自上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司。光學(xué)顯微鏡、石蠟包埋機以及石蠟切片機均購自德國萊卡公司，烘片機、漂片機均購自常州郝思琳公司。

1.3 方法

(1)檢測各組FOXQ1、HBME-1表達水平，方法如下：將上述3組甲狀腺組織按照如下常規(guī)方法進行免疫組化染色，包括組織處理、切片、脫蠟、水化、阻斷內(nèi)源性酶活性、PBS清洗、抗原修復(fù)、PBS再清洗，一抗孵育，二抗孵育，DAB顯色、脫水、干燥、封片、顯微觀察等。表達水平評估方法采用Carcangiu半定量評分方法[7]：FOXQ1定位于細胞核和細胞質(zhì)，HBME-1定位于細胞膜，根據(jù)染色強度、著色細胞比例計分，其中無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色依次記為0～3分，定位著色為棕黃色或棕褐色即計分≥2分視為陽性細胞，統(tǒng)計5個視野陽性細胞比例，將陽性細胞占比超出71%視為陽性表達，其余情況均視為陰性表達。

(2)通過單因素分析結(jié)合多因素Logistic回歸分析法分析FOXQ1、HBME-1陽性表達與PTC患者年齡、性別、TNM分期、病灶直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜侵犯等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

(3)通過隨訪患者預(yù)后不良事件發(fā)生率分析FOXQ1、HBME-1陽性表達與預(yù)后不良的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

利用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS21.0對研究數(shù)據(jù)統(tǒng)一進行分析和處理，計數(shù)資料一律采取率(%)表示，單因素分析采用χ2檢驗法，多因素分析采用Logistic回歸分析法，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組FOXQ1、HBME-1表達對比

A組FOXQ1陽性表達共72例，HBME-1陽性表達共76例。A組FOXQ1、HBME-1陽性表達率均顯著高于B組、C組，差異比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。詳見表1。

表1 各組FOXQ1、HBME-1表達對比(例，%)

2.2 PTC組織中FOXQ1、HBME-1表達與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

單因素分析結(jié)果顯示，PTC組織中FOXQ1、HBME-1陽性表達在性別、年齡、TNM分期、病灶直徑參數(shù)下差異比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜參數(shù)下差異比較顯著(P均<0.05)。見表2。

表2 FOXQ1、HBME-1表達與PTC臨床病理參數(shù)的單因素分析(例，%)

篩選出上述具有統(tǒng)計學(xué)意義的臨床病理參數(shù)進行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，PTC組織中FOXQ1、HBME-1陽性表達是影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜的獨立因素(P均<0.05)。見表3。

表3 FOXQ1、HBME-1表達與PTC臨床病理參數(shù)的多因素Logistic回歸分析

2.3 FOXQ1、HBME-1表達與PTC患者預(yù)后的相關(guān)性

FOXQ1、HBME-1陽性表達組預(yù)后不良均顯著高于其陰性表達組(P均<0.05)。見表4。

表4 FOXQ1、HBME-1表達與PTC患者預(yù)后的關(guān)系(例，%)

3 討論

FOX是一類參與胚胎發(fā)育、細胞周期調(diào)控、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、腫瘤發(fā)生的轉(zhuǎn)錄家族蛋白，該家族成員均具有一個保守的叉頭框結(jié)構(gòu)域，由110個氨基酸DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成。作為FOX家族成員之一，F(xiàn)OXQ1被普遍證實在機體各種癌癥疾病中存在異常表達，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲性轉(zhuǎn)移等。例如，李建水等[8]發(fā)現(xiàn)抑制肝癌細胞系SMMC-7721細胞FOXQ1基因的表達，能夠?qū)⒓毎芷谧铚贕1期從而抑制其細胞增殖；吳瑋等[9]發(fā)現(xiàn)抑制宮頸鱗狀細胞癌細胞CsSki細胞系FOXQ1基因的表達，能夠影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而抑制其細胞增殖和侵襲；鐘燁等[10]發(fā)現(xiàn)使用FOXQ1-siRNA轉(zhuǎn)染PTC細胞系TPC-1能夠抑制其細胞侵襲、遷移。本研究結(jié)果顯示，A組FOXQ1陽性表達率顯著高于B、C組，臨床病理以及隨訪預(yù)后結(jié)果顯示，F(xiàn)OXQ1陽性表達是影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜的獨立因素，預(yù)后不良顯著高于其陰性表達組，這提示FOXQ1陽性表達與PTC密切相關(guān)，參與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜已被證實是PTC患者的獨立預(yù)后因素[11]。另有學(xué)者研究[12]揭示FOXQ1主要通過4種機制參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展調(diào)控，包括血管生成調(diào)控、腫瘤再啟動、改變腫瘤微環(huán)境、調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等。

HBME-1是一種酸性氨基酸多聚糖蛋白，其作為間皮細胞表面微絨毛的抗原成分，臨床上被普遍用于診斷間皮細胞癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等[13]。近幾年來，學(xué)者開始重視其對甲狀腺癌的診斷價值，常用于區(qū)分惡性甲狀腺癌和良性甲狀腺癌。另外，張開玲等[14]發(fā)現(xiàn)PTC患者組織HBME-1陽性表達率顯著高于其癌旁甲狀腺癌組織以及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織；周艷等[15]發(fā)現(xiàn)PTC患者甲狀腺過氧化物酶(TPO)、HBME-1、細胞角蛋白19 (CK19)、半乳糖凝素-3(Galectin-3)、細胞周期蛋白D1 (CyclinD1)蛋白水平顯著高于甲狀腺良性病變者。本研究結(jié)果顯示，A組HBME-1陽性表達率顯著高于B、C組，臨床病理以及隨訪預(yù)后結(jié)果顯示，HBME-1陽性表達是影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜的獨立因素，但與PTC患者性別、年齡、腫瘤分期以及病灶大小等因素?zé)o關(guān)，HBME-1陽性表達組預(yù)后不良顯著高于其陰性表達組，這不僅提示PTC患者中普遍存在HBME-1陽性表達，而良性或正常組織HBME-1表達相對低下，基本為陰性，且HBME-1參與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜，是PTC患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯包膜的獨立預(yù)后因素，與PTC患者病情進展直接相關(guān)，這與王瑾等[16]在甲狀腺癌淋巴轉(zhuǎn)移及預(yù)后研究中結(jié)果基本一致，但影響其疾病進展的具體機制有待深入探究。

綜上所述，F(xiàn)OXQ1、HBME-1在PTC患者腫瘤組織中均呈現(xiàn)異常高表達，兩者陽性表達均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜侵犯等發(fā)生密切相關(guān)，同時兩者水平的急劇上升可用于預(yù)測PTC患者預(yù)后不良事件，為日后PTC診斷及預(yù)后提供參考價值。