李國(guó)濤 朱豫萌 張 盼 張國(guó)強(qiáng)

原發(fā)性肝癌的發(fā)病率較高，在具有肝硬化或者病毒感染的患者中，原發(fā)性肝癌的發(fā)病率可持續(xù)上升[1]。臨床上原發(fā)性肝癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊哒w病死率的提高，增加了原發(fā)性肝癌患者遠(yuǎn)期病情惡化的風(fēng)險(xiǎn)[2]。96序列相似的家庭成員A(FAM96A)是腫瘤相關(guān)調(diào)控基因，其能夠通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞癌基因的激活，降低癌細(xì)胞內(nèi)下游效應(yīng)因子的釋放速度，最終影響到腫瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程[3]。部分研究者探討了FAM96A在消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中，F(xiàn)AM96A的表達(dá)濃度明顯下降[4-5]，但缺乏對(duì)于FAM96A的表達(dá)與肝癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系研究。為了揭示FAM96A的表達(dá)與肝癌患者臨床預(yù)后的病情關(guān)系，從而為臨床上原發(fā)性肝癌的診療提供參考，本次研究選取2017年2月至2019年3月我院保存的原發(fā)性肝癌組織標(biāo)本87例，探討了FAM96A的表達(dá)情況，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月至2019年3月我院保存的原發(fā)性肝癌組織標(biāo)本87例，同時(shí)選取癌旁組織(距癌邊緣>2 cm)作為對(duì)照，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)確診；②臨床資料保存完整；③術(shù)前未行放化療等治療；④患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②有內(nèi)分泌疾病、免疫系統(tǒng)疾病、HIV感染。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

搜集的標(biāo)本組織采用液氮保存，采用蛋白提取試劑盒進(jìn)行蛋白提取，BCA法調(diào)整蛋白濃度，提取的蛋白與SDS緩沖液混合10 min，SDS-PAGE電泳分離檢測(cè)蛋白，醋酸纖維膜進(jìn)行蛋白的轉(zhuǎn)移，清洗膜后采用5%的血清蛋白進(jìn)行封閉，TBST清洗3次，每次5 min，加入一抗(鼠抗人 濃度：1∶1000)5 ml，4 ℃冰箱過(guò)夜，TBST清洗3次，每次5 min，加入二抗(羊抗鼠 濃度：1∶2000)3 ml，TBST清洗3次，每次5 min，加入DAB顯影液(北京索萊寶科技有限公司)，以GADPH蛋白為內(nèi)參，采用GSG2000核酸/蛋白凝膠圖像分析管理軟件掃描分析蛋白條帶。

1.3 隨訪方法

采用電話隨訪的方式進(jìn)行出院后隨訪，其中隨訪時(shí)間節(jié)點(diǎn)為2020年5月，共有3例患者失訪，24例死亡，60例存活。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性肝癌和癌旁組織FAM96A蛋白表達(dá)比較

原發(fā)性肝癌組織FAM96A蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯低于癌旁組織，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 原發(fā)性肝癌和癌旁組織FAM96A蛋白表達(dá)比較

2.2 FAM96A蛋白表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤直徑≥5 cm、有門靜脈癌栓、Ⅲ～Ⅳ期患者FAM96A蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯低于腫瘤直徑<5 cm、無(wú)門靜脈癌栓，Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 FAM96A蛋白表達(dá)與臨床病理關(guān)系

2.3 FAM96A蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

截止2020年5月，共有患者24例死亡，60例存活；死亡患者FAM96A蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.610±0.100)明顯低于存活患者(0.709±0.097)(P<0.05)。

3 討論

在長(zhǎng)期肝臟上皮細(xì)胞損傷的過(guò)程中，部分癌細(xì)胞的早期形成，能夠誘導(dǎo)癌信號(hào)通路的激活，最終增加早期原位癌或者浸潤(rùn)癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[6]。在高齡、長(zhǎng)期吸煙或者過(guò)度飲酒的人群中，原發(fā)性肝癌的基礎(chǔ)發(fā)病率或者遠(yuǎn)期病死率均可顯著上升[7]。臨床上的觀察發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌患者的無(wú)瘤生存時(shí)間不超過(guò)40個(gè)月，其遠(yuǎn)期無(wú)進(jìn)展生存期也明顯的縮短[8-9]。而通過(guò)對(duì)于原發(fā)性肝癌臨床預(yù)后的評(píng)估，能夠在肝癌患者的早期治療方案的制定或者出院后隨訪方面發(fā)揮作用。甲胎蛋白能夠在原發(fā)性肝癌的診療及預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮作用，但單純依靠甲胎蛋白評(píng)估肝癌患者臨床預(yù)后的靈敏度及可靠性仍然存在一定的局限。影像學(xué)檢查能夠在原發(fā)性肝癌的診療中發(fā)揮作用，但CT或者肝臟超聲檢查對(duì)于肝癌患者臨床轉(zhuǎn)歸評(píng)估的符合率較低。本次研究通過(guò)對(duì)于肝癌患者體內(nèi)腫瘤調(diào)控因子或者腫瘤相關(guān)蛋白的分析，旨在為臨床上原發(fā)性肝癌的預(yù)后評(píng)估提供新的參考依據(jù)。

FAM96A主要存在于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核周邊，其蛋白結(jié)構(gòu)上包含有多個(gè)絲氨酸及巰基結(jié)構(gòu)。FAM96A是轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)序列因子，其能夠通過(guò)結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子，降低癌基因的激活程度，最終抑制腫瘤細(xì)胞的過(guò)度增殖。FAM96A作為腫瘤癌細(xì)胞周期的調(diào)控因子，其能夠通過(guò)干預(yù)癌細(xì)胞周期G1/S期的比例，降低癌細(xì)胞自我增殖的活性，從而降低腫瘤細(xì)胞復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)[10]。相關(guān)臨床方面的研究已經(jīng)證實(shí)，F(xiàn)AM96A能夠在肝癌的早期發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮作用[11]，但缺乏對(duì)于FAM96A的表達(dá)與肝癌臨床病理特征及臨床預(yù)后的分析。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在原發(fā)性肝癌患者病灶組織中，F(xiàn)AM96A蛋白的表達(dá)濃度水平明顯低于癌旁組織，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯，表明FAM96A蛋白的表達(dá)缺失能夠顯著影響到肝癌的病情進(jìn)展。之所以存在FAM96A蛋白的低表達(dá)，主要由于肝癌細(xì)胞內(nèi)癌細(xì)胞腫瘤微環(huán)境的改變，降低了正常上皮細(xì)胞對(duì)于FAM96A的分泌，抑制了FAM96A對(duì)于早期腫瘤發(fā)生的保護(hù)作用。有其他研究者也認(rèn)為，在肝癌患者病灶組織中，F(xiàn)AM96A蛋白的表達(dá)濃度可隨著患者腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生而下降，而具有腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者肺部轉(zhuǎn)移的患者中，F(xiàn)AM96A蛋白的表達(dá)濃度可持續(xù)下降，并能夠顯著影響到肝癌患的臨床結(jié)局[12]。在探討FAM96A蛋白的表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系過(guò)程中，可以發(fā)現(xiàn)在臨床分期較晚或者合并門靜脈轉(zhuǎn)移、腫瘤較大的患者中，F(xiàn)AM96A蛋白的表達(dá)濃度較低，提示FAM96A的表達(dá)缺失能夠顯著影響到肝癌患者臨床病理特征的進(jìn)展。FAM96A的表達(dá)下降，失去了其對(duì)于肝癌上皮細(xì)胞生物學(xué)特征的穩(wěn)定作用，導(dǎo)致癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力的上升，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)深度和范圍的增加，從而提高了臨床分期；而FAM96A對(duì)于腫瘤門靜脈血栓或者腫瘤大小的影響，主要在于其能夠影響到腫瘤細(xì)胞粘附能力，促進(jìn)了其對(duì)于鄰近正常組織及門靜脈內(nèi)皮組織的粘附。在不同臨床預(yù)后的患者中，可以發(fā)現(xiàn)在死亡組患者中，F(xiàn)AM96A蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于存活組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，表明FAM96A的低表達(dá)能夠影響到肝癌患者的臨床預(yù)后。這主要由于FAM96A的表達(dá)下降，影響到了肝癌細(xì)胞遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，從而影響到了臨床結(jié)局[13-15]。臨床上可以通過(guò)檢測(cè)FAM96A蛋白水平，進(jìn)而協(xié)助評(píng)估肝癌的臨床預(yù)后。

原發(fā)性肝癌組織FAM96A表達(dá)下調(diào)，與腫瘤直徑、門靜脈癌栓和TNM分期有一定關(guān)系，同時(shí)可能與患者預(yù)后有關(guān)，值得進(jìn)一步研究。