肖月梅 董錦華 于波

(1.榆林市第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科，陜西 榆林 719000；2.寶雞市陳倉(cāng)醫(yī)院內(nèi)科，陜西 寶雞 721300)

慢性肺源性心臟病簡(jiǎn)稱肺心病，患者由于病程長(zhǎng)，導(dǎo)致肺臟結(jié)構(gòu)和生理功能退行性改變，呼吸道免疫防御功能及機(jī)體抵抗力下降，易并發(fā)肺部感染[1]。近年來，由于抗生素的大范圍應(yīng)用，耐藥菌株逐年增多，增加肺部感染的治療難度。研究[2]發(fā)現(xiàn)，IL-6基因多態(tài)性影響血清IL-6水平，與慢性阻塞性肺疾病、肺結(jié)核等肺部感染性疾病以及全身炎性反應(yīng)綜合征的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。其中臨床上研究最多的是IL-6基因-572C/G多態(tài)性，但其在肺心病合并肺部感染患者中的研究鮮有發(fā)表。本研究主要探討肺心病患者肺部感染的病原菌分布特征，分析IL-6基因-572C/G多態(tài)性與肺部感染的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2018年1月至2019年4月我院收治的肺心病住院患者80例作為研究對(duì)象。根據(jù)是否合并肺部感染，將患者分為肺部感染組31例和非感染組49例。其中肺部感染組男20例、女11例，年齡42～83歲，平均(58.3±3.5)歲，病程7～24年，平均(10.6±3.4)年。非感染組男31例、女18例，年齡44～82歲，平均(58.1±3.7)歲，病程8～23年，平均(10.4±3.2)年。納入患者病情均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)(2011年)制定的肺心病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，肺部感染診斷參照美國(guó)胸科學(xué)會(huì)與感染病學(xué)會(huì)2005年制定的《醫(yī)院獲得性肺炎治療指南》[4]。已排除患有腫瘤、呼吸道以外部位感染、合并其他嚴(yán)重內(nèi)科疾病的患者。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性?；颊呒凹覍倬橥狻?/p>

1.2方法 兩組均抽取5 mL空腹外周靜脈血，置于含EDTA 的抗凝管中，置于-80℃保存待檢?；颊叱科鹗褂眉尤?%雙氧水的生理鹽水漱口后，用力咳痰，取痰液樣本置于無菌容器保存。取部分痰液樣本，行細(xì)菌接種及分離培養(yǎng)，操作按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)進(jìn)行，采用Phoenix TM全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)(BD公司)進(jìn)行細(xì)菌鑒定，采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)行藥敏試驗(yàn)，參照美國(guó)臨床試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)研究所(2016版)判定標(biāo)準(zhǔn)。取部分血液樣本，離心取上清，采用Elisa法檢測(cè)血清IL-6水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)RD工程有限公司。取部分血液樣本，使用人全血DNA 提取試劑盒提取全血基因組，試劑盒購(gòu)自無錫百泰克生物技術(shù)有限公司。IL-6基因-572C/G多態(tài)性采用PCR-RFLP檢測(cè)。取5μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，過柱純化，37℃MbiI內(nèi)切酶消化4 h，反應(yīng)結(jié)束后行2%瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)電泳結(jié)果判斷基因型。PCR擴(kuò)增條件見表1。

表1 PCR擴(kuò)增條件

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用WH0NET5.6軟件行細(xì)菌耐藥分析，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用(Mean±SD)表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用n，%，行χ2檢驗(yàn)，采用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)基因多態(tài)性頻率分布，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1肺部感染病原菌分布及構(gòu)成比 31例肺心病合并肺部感染患者共檢出病原菌46株，其中，革蘭陰性菌32株(69.57%)，主要為銅綠假單胞菌；革蘭陽(yáng)性菌14株(30.43%)，主要為金黃色葡萄球菌。見表2。

表2 肺部感染病原菌分布及構(gòu)成比[n(%)]

2.2主要病原菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性分析銅綠假單胞菌對(duì)左氧氟沙星最耐藥、對(duì)亞胺培南最敏感，金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素G最耐藥、對(duì)萬(wàn)古霉素最敏感。見表3。

表3 主要病原菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性分析(n,%)

2.3血清IL-6水平比較 肺部感染組的血清IL-6水平(291.35±86.42)ng/L顯著高于非感染組的(106.28±61.89)ng/L(t=11.152，P<0.05)。

2.4IL-6基因-572C/G位點(diǎn)基因型分布比較 經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，兩組群體基因遺傳平衡，樣本資料具有群體代表性(P=0.734、0.691)。兩組的CC、CG、GG基因型頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 IL-6基因-572C/G位點(diǎn)基因型分布比較[n(%)]

2.5IL-6基因-572C/G位點(diǎn)基因型頻率分布比較 的C/G等位基因頻率分別66.13%(41例)、33.87%(21例)，與非感染組的65.31%(64例)、34.69%(34例)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.011，P>0.05)。

3 討 論

肺心病患者由于病程持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，呼吸道黏膜防御功能下降，導(dǎo)致全身系統(tǒng)發(fā)生退行性病變，機(jī)體抵抗力下降，易發(fā)生肺部感染[5]。本研究中，31例肺部感染組共檢出病原菌46株，其中，革蘭陰性菌32株(69.57%)，主要為銅綠假單胞菌；革蘭陽(yáng)性菌14株(30.43%)，主要為金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌對(duì)左氧氟沙星最耐藥、對(duì)亞胺培南最敏感，金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素G最耐藥、對(duì)萬(wàn)古霉素最敏感。細(xì)菌產(chǎn)生抗生素耐藥性的主要機(jī)理為誘導(dǎo)產(chǎn)生修飾酶，改變抗生素靶位及胞漿膜通透性，傳播耐藥基因等?？股厥褂妙l率增加是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因[6]。肺心病患者由于自身抵抗力下降，易發(fā)反復(fù)感染，抗生素使用頻繁，容易產(chǎn)生耐藥菌。因此，肺心病患者并發(fā)肺部感染時(shí)，盡快進(jìn)行病原學(xué)診斷，根據(jù)藥敏結(jié)果選擇敏感抗生素治療，不僅能保證療效，還有助于減少耐藥菌的產(chǎn)生幾率。

IL-6是由活化的單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等分泌的一類細(xì)胞因子，具有刺激淋巴細(xì)胞增殖、巨核細(xì)胞分化，促進(jìn)B細(xì)胞分泌免疫球蛋白的功能[7]。IL-6在炎癥急性期作為非特異性炎癥因子參與肺部炎癥反應(yīng)過程。細(xì)菌進(jìn)入肺部后，其分泌的內(nèi)毒素激活肺部上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，使IL-1β、IL-6、TNF-α分泌增加[8]。本研究中，肺部感染組的血清IL-6水平顯著高于非感染組(P<0.05)，提示IL-6在肺炎感染的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

研究單個(gè)基因多態(tài)性對(duì)肺部感染的影響，易受外界環(huán)境、樣本納入方式及數(shù)量、基因突變頻率低等外界因素影響[9]。此外，位于第7號(hào)染色體上的IL-6基因，全長(zhǎng)5kb，具有5個(gè)外顯子及4個(gè)內(nèi)含子，IL-6基因多態(tài)性存在區(qū)域主要集中于啟動(dòng)子區(qū)，包括-174 G/C、-373 AnTn、-572 G/C、-597 G/A[10]。上述4個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)都可能是基因結(jié)合序列，一旦發(fā)生基因突變，均會(huì)影響IL-6基因調(diào)控和表達(dá)，與多種疾病患者體內(nèi)的IL-6水平特征性升高有關(guān)[11]。本研究中，肺部感染組的CC、CG、GG基因型頻率和C/G等位基因頻率與非感染組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示IL-6水平上升可能與IL-6 基因啟動(dòng)子區(qū)其他位點(diǎn)，以及肺部感染加劇患者體內(nèi)水平炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致IL-6大量分泌有關(guān)。研究[12]發(fā)現(xiàn)，除了IL-6基因-572位點(diǎn)C/G多態(tài)性之外，-174位點(diǎn)多態(tài)性也與炎癥性疾病易感性有關(guān)。因此，本研究具有一定局限性，下一步應(yīng)增加樣本量，聯(lián)合相關(guān)基因同時(shí)分析，進(jìn)一步驗(yàn)證研究。

綜上所述，本院肺心病合并肺部感染以革蘭陰性菌為主，對(duì)抗菌藥物表現(xiàn)不同程度耐藥性，應(yīng)結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇抗菌藥物治療。IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)-572C/G基因多態(tài)性可能與肺心病患者肺部感染易感性無關(guān)。