安 蕊，吳實權(quán)，劉 章，周常喜，趙一帆，姜代勛，李 佳，陳 武

（1.北京農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102206；2.獸醫(yī)學(xué)中醫(yī)藥北京市重點實驗室，北京 102206）

貓傳染性腹膜炎（feline infectious peritonitis，F(xiàn)IP）是由貓傳染性腹膜炎型冠狀病毒引起的臨床常見寵物傳染病，死亡率高，嚴(yán)重危害貓的健康。貓冠狀病毒（feline coronavirus，F(xiàn)CoV）分為胃腸炎型（FECV）和傳染性腹膜炎型（FIPV）兩種。因此，F(xiàn)IP 的診斷需要通過病毒核酸和基因突變位點檢測，并結(jié)合臨床多項檢查指標(biāo)進(jìn)行綜合評估[1-3]。目前尚未有對京津冀地區(qū)FIP 病例進(jìn)行系統(tǒng)流行病學(xué)調(diào)查的報道。本研究選取京津冀地區(qū)2018—2020 年數(shù)十家寵物醫(yī)院臨床疑似FCoV 感染病例725 例，分別從性別、年齡、品種、絕育情況、發(fā)病季節(jié)以及臨床特征（干濕類型）等方面進(jìn)行統(tǒng)計分析，了解近年來京津冀地區(qū)FIP 的發(fā)生發(fā)展及流行規(guī)律，豐富和更新FIP 流行病學(xué)數(shù)據(jù)，以期為FIP 的預(yù)防及控制提供參考。

1 材料和方法

1.1 病例信息和樣本來源

收集2018—2020 年京津冀地區(qū)73 家動物醫(yī)院725 例疑似貓F(tuán)CoV 感染病例臨床數(shù)據(jù)，以及對應(yīng)的腹水（406 份）、胸水（96 份）、糞便/血漿（221份）、心包穿刺液（2 份）等樣本。其中：北京市525 例（72.41%）、天津市101 例（13.93%）、河北省99 例（13.66%），年齡范圍在2 個月以上9歲以下，包含絕育貓143 例、未絕育貓582 例，雄性483 例、雌性242 例，品種包括中華田園貓、英國短毛貓、美國短毛貓、暹羅、布偶、波斯、喜馬拉雅貓、俄羅斯藍(lán)貓、無毛貓以及其他混合品種。樣本及臨床數(shù)據(jù)，由北京拓瑞檢測技術(shù)有限公司提供，但部分病例無法獲得精確的預(yù)后信息。

1.2 主要儀器

PCR 儀和電泳儀，BIO-RAD 公司；移液槍，Eppendorf 公司；凝膠成像儀，上海天能科技有限公司；超微量分光光度計NANO，賽默飛科技有限公司。

1.3 主要試劑

DL 2 000 DNA Marker、2×ProTaqMaster Mix（dye plus）、Evo M-MLV 一步法RT-PCR 試劑盒、AG-CelRed 核酸凝膠染料、SteadyPure 病毒DNA/RNA 提取試劑盒、膠回收試劑盒，均購自湖南艾科瑞生物工程有限公司；無水乙醇、DEPC 水、50×電泳液、瓊脂糖（Agarose），購自北京愛普銳晟科技有限公司。

1.4 病原檢測

使用RT-PCR 方法對725 份樣本進(jìn)行病原檢測，對陽性樣本使用chromas 軟件進(jìn)行測序分析。首先使用冠狀病毒（CoV）通用引物（表1）檢測，對篩選出的陽性樣本，再使用Chang 等[1]和Licitra 等[2]使用的引物S1、S2（巢式）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測突變位點。引物均由上海生工生物工程有限公司合成。涉及的檢測位點包含S 蛋白的幾個特殊氨基酸殘基。檢測出突變表明該病例罹患FIP風(fēng)險顯著升高，未檢測出則表明風(fēng)險一般，但不能排除罹患FIP 及發(fā)展為FIP 的可能。

表1 本試驗涉及的引物序列

1.5 數(shù)據(jù)分析

對病例的基本信息、臨床表現(xiàn)和發(fā)病情況進(jìn)行回顧性調(diào)查，使用Excel、SPSS 22.0 軟件，統(tǒng)計分析病例的臨床特征分布、時間分布、地理分布、群間分布等流行病學(xué)特征。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

收集的725 例疑似FCoV 感染病例均有FIP臨床常見癥狀，包括反復(fù)性發(fā)熱、體腔積液等。對FCoV 疑似感染病例樣本，使用RT-PCR 方法進(jìn)行FCoV 核酸檢測，將1 對檢測FCoV 感染和2 對檢測S 基因突變位點的引物同時擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增的基因片段與預(yù)期結(jié)果[1-2]相符。核酸檢測結(jié)果顯示，75.0%（544/725）的樣本呈FCoV 核酸陽性。對陽性樣本進(jìn)行測序分析，結(jié)合臨床表現(xiàn)進(jìn)行FCoV 分型。結(jié)果顯示，F(xiàn)ECV 陽性率為32.6%（236/725），F(xiàn)IPV 為42.5%（308/725）。

2.2 臨床特征分布

308 例FIP 確診病例中，298 例（96.7%）出現(xiàn)了厭食、消瘦、長期反復(fù)發(fā)燒、腹腔或胸腔積液等臨床癥狀，48 例（15.6%）出現(xiàn)了貧血、黃疸以及慢性嘔吐腹瀉、腸道淋巴結(jié)腫大等消化道癥狀，14 例（4.5%）出現(xiàn)了口炎、流膿性鼻炎、自發(fā)性膀胱炎、大小眼、腎周積液、共濟(jì)失調(diào)、陰囊外陰腫大或流膿以及全身出現(xiàn)紅斑、皮膚脫毛、真菌感染等皮膚疾病癥狀，4 例并發(fā)心臟病、高血壓、胰腺炎、腫瘤（腸系膜、腹膜）。另外發(fā)現(xiàn)4 個確診病例存在與其他病毒的混合感染，其中與貓艾滋病毒共感染1 例、與貓杯狀病毒共感染1 例、與貓瘟病毒共感染2 例（表2）。

表2 2018—2020 年京津冀地區(qū)308 例FIP 確診病例的臨床癥狀分布 單位：例

2.3 時間分布

2018 年FIP 陽性檢出率為53.3%（48/90），2019年為37.9%（195/515），2020年為54.2%（65/120）。經(jīng)卡方檢驗，各年份FIP 陽性檢出率分布不均勻，呈波浪狀變化，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=15.537，P＜0.01）。7—9 月FIP陽性檢出率最高，8 月最高達(dá)到16.6%（51/308）。將病例數(shù)按照季節(jié)進(jìn)行分類統(tǒng)計，結(jié)果春、夏、秋、冬四季FIP 陽性檢出率分別為37.4%（34/91）、40.1%（129/322）、52.8%（121/229）和37.3%（24/83），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=18.051，P＜0.01），夏、秋兩季較春、冬季高發(fā)。

圖1 2018—2020 年京津冀地區(qū)不同月份FIP 陽性檢出率分布

2.4 地區(qū)分布

河北省FIP 陽性檢出率最高，為55.6%（55/99）；其次是天津市，為42.6%（43/101）；北京市最低，為40.0%（210/525）。經(jīng)卡方檢驗，三個地區(qū)的FIP 陽性檢出率有顯著差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.249，P＜0.05）。

2.5 群間分布

2.5.1 不同品種 各品種貓均可發(fā)病，其中英國短毛貓（36.0%）、中華田園貓（15.9%）和美國短毛貓（26.0%）FIP 陽性檢出率較高，而暹羅、布偶、加菲、曼基康、德文卷毛貓等常見純種貓以及混血貓相對較低（圖2）。

圖2 2018—2020 年京津冀地區(qū)FIP 陽性檢出率品種分布

2.5.2 不同性別和絕育情況 性別統(tǒng)計結(jié)果（表3）顯示：雄貓和雌貓均可發(fā)生FIP，其中雌貓的陽性檢出率為36.8%（89/242），雄貓為45.3%（219/483），二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.840，P＜0.05）。308 例FIP 確診病例中，未絕育貓（251例）明顯高于絕育貓（57 例），其中未絕育公貓的FIP 陽性檢出率最高（59.4%，183/308）。

表3 2018—2020 年京津冀地區(qū)FIP 確診病例的性別統(tǒng)計結(jié)果

2.5.3 不同年齡 統(tǒng)計結(jié)果（圖3）顯示，各個年齡段貓均可感染FCoV 甚至發(fā)展為FIP，但以2月齡到1 歲的感染率最高，1 歲以后感染率逐漸下降。經(jīng)卡方檢驗，各年齡段陽性檢出率存在差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

圖3 2018—2020 年京津冀地區(qū)FIP 陽性檢出率年齡段分布

3 討論

對2018—2020 年京津冀地區(qū)部分動物醫(yī)院的貓F(tuán)CoV 疑似感染病例資料進(jìn)行回顧性調(diào)查，對收集的積液、糞便等樣本，采用RT-PCR 技術(shù)進(jìn)行FCoV 檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FCoV 陽性檢出率較高。其中，在FCoV 感染病例中，有32.6%為FECV 陽性。FECV 陽性病例也有轉(zhuǎn)變FIP 的可能，需時刻關(guān)注，提前介入治療。

FIP 在臨床上可分為濕性、干性兩種形式。前者以出現(xiàn)體腔積液為主，后者以出現(xiàn)多器官肉芽腫及眼部或神經(jīng)性病變?yōu)橹?。本研究發(fā)現(xiàn)，京津冀地區(qū)流行的FIP 臨床表現(xiàn)形式以濕性為主，主要表現(xiàn)為持續(xù)性且退熱藥物難以起效的反復(fù)發(fā)燒，以及厭食、迅速消瘦、貧血，大量液體滲出積聚于體腔，后常引起多器官受損、全身性炎癥，甚至出現(xiàn)眼部或神經(jīng)癥狀，或與其他病毒共感染，這一結(jié)果與先前報道相符合[4-5]。這可能是因為干性FIP 發(fā)展相對較緩，且臨床癥狀多表現(xiàn)為肉芽腫，并不像體腔積液引起的腹圍明顯增大或呼吸困難明顯易于發(fā)現(xiàn)，一般在動物身上發(fā)現(xiàn)有明顯積液時，才會采集滲出液樣本送檢[6]；同時，干性FIP 因臨床上很難在早期被診斷，被發(fā)現(xiàn)時往往已發(fā)展為濕性FIP，這也是濕性FIP 病例較多的原因之一[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，涉及的FIP 貓大多數(shù)為濕性表現(xiàn)，僅少數(shù)出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，這驗證了其他研究[5，8]的觀點，即相較于干性FIP（無積液）來說，僅少部分濕性FIP 患貓會出現(xiàn)神經(jīng)異常癥狀。Séverine 等[9]表示多次進(jìn)行臨床檢查對于早期診斷FIP 非常重要，例如積液的形成或眼部病變等，因為FIP 的臨床體征會隨著時間而改變。本研究發(fā)現(xiàn)部分FIP 確診病例存在口鼻眼炎癥，因此不可忽視這些早期臨床癥狀及變化對FIP 的提示意義，這些變化提示可能與FIP 有關(guān)。對FIP 來說，早期診斷早期介入治療，對FIP 預(yù)后十分重要。

結(jié)合時間及群間分布現(xiàn)狀及流行病學(xué)特點，總體上顯示出FIP 主要發(fā)生于夏秋（6—9 月）高溫季節(jié)，以8 月病例數(shù)最多。這可能是因為該時期京津冀地區(qū)氣溫升高，貓活動比較活躍密集，生育率較高，導(dǎo)致低月齡幼貓數(shù)量較多，而低月齡幼貓對FIP 較易感。這與張智文等[10]在大連市貓群中FIP 的研究結(jié)果相符，但與唐小娟等[11]在武漢市貓群中FIP 的研究結(jié)果存在差異。

FIP 多發(fā)于幼齡及青壯年（2 月齡至3 歲）、未絕育的雄性貓，尤以異國短毛貓、中華田園貓或一些暹羅、布偶等受人喜愛的流行純種貓為多，這也驗證了Pesteanu 等[12]的觀點。但也有人認(rèn)為，F(xiàn)IP 的發(fā)生與絕育狀態(tài)無關(guān)。Grossman 等[13]推測，雄性貓感染率相對較高可能與雄性激素對免疫系統(tǒng)有抑制作用有關(guān)。由于本研究涉及的FIP 病例樣本尚少，無法得出動物品種與FIP 之間的確切相關(guān)性，但Pesteanu 等[12]認(rèn)為，受人喜愛的昂貴的純種貓主人可能會更頻繁將動物帶到寵物診所等多貓環(huán)境，且純種貓由于繁殖需求多處于多貓環(huán)境中，從而增加了FCoV 感染風(fēng)險。因此，探求品種與FIP發(fā)生之間的相關(guān)性需要進(jìn)行更有針對性和更系統(tǒng)的調(diào)查。在年齡上，幼齡貓易感可能由于其免疫力相對較弱，且容易對環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)激，易受病毒侵害從而發(fā)病，亦或是經(jīng)產(chǎn)母貓或許已經(jīng)處于FCoV 感染的潛伏期從而感染。而青壯年貓可能由于FCoV 感染后，機(jī)體產(chǎn)生的細(xì)胞免疫或體液免疫應(yīng)答較強(qiáng)，產(chǎn)生抗體依賴增強(qiáng)（ADE）現(xiàn)象，促使了濕性FIP的發(fā)生，從而加速疾病進(jìn)程[14]。

本次檢測樣本均為臨床上已經(jīng)出現(xiàn)癥狀的疑似FCoV 感染貓，又缺乏京津冀地區(qū)整體的貓數(shù)量基數(shù)統(tǒng)計，因此本研究統(tǒng)計分析的FCoV 感染率和FIP 陽性檢出率較高。研究[15]表明，流浪貓感染FCoV 的概率并不高于家庭、貓舍或救助站等多貓環(huán)境的貓。本項研究并不清楚被調(diào)查貓的飼養(yǎng)環(huán)境及來源，因而無法證明這一點，也無法對患病動物的預(yù)后結(jié)果進(jìn)行追蹤。對于FIP 的預(yù)防，應(yīng)盡量減少貓接觸多貓環(huán)境，例如將FCoV 陽性貓的幼崽盡早斷奶，同時盡量防止貓發(fā)生應(yīng)激[15]。此外，減少貓糞便和受污染環(huán)境的暴露以及定期進(jìn)行衛(wèi)生消毒管理和健康飼養(yǎng)習(xí)慣培養(yǎng)可能會有效降低FCoV的感染概率[15]。若家庭中已有FIP 病貓出現(xiàn)，不建議再引進(jìn)其他貓，避免再次感染環(huán)境中的FCoV而引發(fā)FIP。

目前該病在國內(nèi)外都沒有成熟疫苗，因此應(yīng)該深入了解病原毒力或致病力變化規(guī)律。本研究對京津冀地區(qū)的FIP 確診貓進(jìn)行統(tǒng)計分析，或許可為FIP 的分子流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

在京津冀地區(qū)FCoV 感染及FIP 發(fā)生較普遍；FIP 的發(fā)生與年齡、性別、品種、絕育情況和發(fā)病季節(jié)相關(guān)性較高，主要多發(fā)于幼齡、青壯年（2 月齡至3 歲）以及純種、未絕育的雄性貓，夏秋季多發(fā)，多表現(xiàn)濕性臨床癥狀。因此，應(yīng)重視FIP 預(yù)防，密切關(guān)注貓的反復(fù)持續(xù)發(fā)熱、體腔積液、肉芽腫等常見癥狀，針對其流行特點制定相應(yīng)措施，盡早診斷并介入治療。