莫單丹,唐炳蘭,龔小妹,歐春麗,王碩,周小雷,趙以民*(1.廣西藥用植物園,廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南寧 530023;2.廣西藥用植物園,廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心,南寧 530023)
串連珠為茜草科植物短刺虎刺Damnacanthus giganteus(Mak.)Nakai 的干燥根,別名巖石羊(灌陽(yáng))、半球蓮(恭城)、樹(shù)蓮藕(臨桂)、大黃沙[1-5]。短刺虎刺生于山地疏林或密林下和灌木叢中,主要分布于安徽、浙江、江西、福建、湖南、廣東、廣西、貴州、云南等省區(qū)[6-7],在廣西主要分布在恭城、陽(yáng)朔、灌陽(yáng)、羅城、環(huán)江、桂林、臨桂、龍勝、那坡等地[2,8]。串連珠為瑤族民間習(xí)用藥材,具有補(bǔ)氣收斂止血、舒筋活血、補(bǔ)養(yǎng)氣血、祛風(fēng)除濕、安神止咳的功效,主要用于腎虛腰疼、遺精、貧血萎黃、瘰疬、骨結(jié)核、咳嗽、肝脾腫大、體弱血虛、月經(jīng)不調(diào)、崩漏、白帶、小兒疳積、風(fēng)濕痹痛、黃疸、腸風(fēng)下血、肝炎、腫瘤、神經(jīng)衰弱、跌打損傷等癥[2,7]。目前研究表明,串連珠主要化學(xué)成分是茜根定-1-甲醚、短刺虎刺素、8-羥基短刺虎刺素、5-羥基虎刺素-ω-乙基醚、8-羥基虎刺素-ω-乙基醚(1-甲氧基-2-乙氧甲基-3,8-二羥基蒽醌)[3,9]?,F(xiàn)代藥理研究表明串連珠具有抗腫瘤作用[3]。桂林灌陽(yáng)縣當(dāng)?shù)孛耖g用串連珠治療頸淋巴結(jié)核,對(duì)鼻咽癌、頸轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)有一定的療效,且具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)咳的作用[10]。串連珠為瑤族民間習(xí)用藥材,但國(guó)家和地方標(biāo)準(zhǔn)均未收載,《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(第二卷)》擬收載該品種。因此,本研究通過(guò)對(duì)串連珠性狀、顯微及薄層色譜(TLC)進(jìn)行鑒別,并對(duì)水分、總灰分、浸出物含量測(cè)定等項(xiàng)目進(jìn)行研究,為該藥材的質(zhì)量控制提供參考。
石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leica RM2255);HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋[邦西儀器科技(上海)有限公司];FA2004 電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司);電子分析天平(CP2250D,Sartorius); 超純水儀(美國(guó)Millipore Milli-Q Academic);DZTW 調(diào)溫電熱套(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司);LEICA 生物顯微(DM2000 LEICA/Germany)。
硅膠GF254 薄層板(青島海洋化工有限公司),甲醇、石油醚(60~90℃)、三氯甲烷等均為分析純。串連珠10 個(gè)樣品分別采于廣西桂林市恭城瑤族自治縣、灌陽(yáng)縣等地,經(jīng)韋松基教授和黃云峰副研究員鑒定為茜草科植物短刺虎刺Damnacanthus giganteus(Mak.)Nakai,10 批樣品的詳細(xì)信息見(jiàn)表1。以CLZ-3 樣品作為串連株的對(duì)照藥材與其他樣品進(jìn)行對(duì)比;將樣品干燥、粉碎處理,過(guò)40 目篩,備用。
表1 串連株樣品信息Tab 1 Sample source information of Damnacanthus giganteus
2.1.1 方法 藥材性狀通過(guò)對(duì)藥材的形狀、大小、顏色、斷面、氣、味等進(jìn)行觀察并描述分析。顯微特征分別取藥材根按石蠟切片法制作切片,取藥材粉末按粉末制片法制作粉末片,在顯微鏡下觀察拍照并描述。
2.1.2 藥材性狀 本品呈圓柱形,略彎曲,自然縊縮而呈念珠狀,縊縮處常有表皮包被而不露出木部,直徑4~9 mm。表面棕褐色,有不規(guī)則縱皺紋,橫裂紋明顯。質(zhì)堅(jiān)脆,易折斷,斷面皮部淡紫色或黃白色,木部黃白色。氣微臭,味微甘,嚼之稍發(fā)黏(見(jiàn)圖1)。
圖1 串連株藥材Fig 1 Crude drug of Damnacanthus giganteus
2.1.3 根橫切面 木栓層為數(shù)列木栓細(xì)胞;皮層寬廣,內(nèi)外兩側(cè)均有石細(xì)胞單個(gè)或多個(gè)成群散在,直徑30~80 μm,薄壁細(xì)胞可見(jiàn)草酸鈣針晶束,長(zhǎng)達(dá)150 μm;韌皮部窄,有的細(xì)胞含細(xì)小草酸鈣針晶束,長(zhǎng)30~50 μm;形成層呈環(huán)狀;木質(zhì)部導(dǎo)管呈放射狀排列。(見(jiàn)圖2)。
圖2 串連珠根橫切面顯微圖Fig 2 Cross section of Damnacanthus giganteus root
2.1.4 粉末特征 本品粉末灰棕褐色。草酸鈣針晶束散在或存在于薄壁細(xì)胞中,針晶長(zhǎng)30~150μm;石細(xì)胞棕黃色,類(lèi)長(zhǎng)方形、類(lèi)橢圓形、或不規(guī)則形,長(zhǎng)50~200 μm,寬15~50 μm,壁較厚,紋孔及孔溝明顯;木纖維單個(gè)散離或成束,比較薄,可見(jiàn)點(diǎn)狀紋孔;多見(jiàn)孔紋導(dǎo)管。木薄壁細(xì)胞類(lèi)長(zhǎng)方形、類(lèi)橢圓形,木化,長(zhǎng)47~200μm,寬29~34 μm,見(jiàn)圖3。
圖3 串連株粉末顯微圖Fig 3 Powder of Damnacanthus giganteus
2.2.1 溶液的制備 取本品粉末2 g,加乙醇50 mL,超聲處理(功率200 W,頻率40 kHz)30 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0 mL 使溶解,用三氯甲烷萃取兩次,每次10 mL,合并三氯甲烷提取液,蒸干,殘?jiān)蛹状? mL 使溶解,作為供試品溶液。另取串連株對(duì)照藥材2 g,同法制成對(duì)照藥材溶液。
2.2.2 薄層色譜條件及結(jié)果 照薄層色譜法[《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502]試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各2~5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254 薄層板上,以石油醚(60~90℃)-三氯甲烷-甲醇-水(8∶17∶2∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品,在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見(jiàn)圖4)。
圖4 串連株樣品TLC 圖Fig 4 TLC chromatogram of Damnacanthus giganteus
2.3.1 測(cè)定方法 水分測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0832 水分測(cè)定法測(cè)定;總灰分、酸不溶性灰分測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2302 灰分測(cè)定法測(cè)定;浸出物參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2201 項(xiàng)下的冷浸法進(jìn)行測(cè)定。
2.3.2 測(cè)定結(jié)果 10 批樣品的水分、總灰分、酸不溶性灰分和浸出物的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。10批樣品水分含量在7.91%~12.85%,總灰分含量在3.33%~5.58%,酸不溶性灰分含量在0.16%~0.76%,70%乙醇浸出物(冷浸法)含量在5.77%~11.08%。
表2 串連珠樣品水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物測(cè)定結(jié)果(n =3,%)Tab 2 Determination of moiture,ash,acid insoluble ash and extract of Damnacanthus giganteus (n =3,%)
目前,關(guān)于串連珠的化學(xué)成分、藥理作用研究較少,其主要化學(xué)成分為蒽醌類(lèi),有抗腫瘤、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)咳的作用。串連珠為瑤族民間習(xí)用藥材,其物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究還未見(jiàn)報(bào)道。經(jīng)查閱文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn),本研究未找到合適的指標(biāo)成分用于薄層鑒別和含量測(cè)定,因此采用經(jīng)專(zhuān)家鑒定的串連珠作為對(duì)照藥材用于薄層鑒別。
薄層色譜鑒別比較了三氯甲烷-石油醚-甲醇-水(10∶5∶2∶1)、三氯甲烷-石油醚-甲醇-水(10∶5∶1∶1)、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水(20∶2∶1∶1)、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水(7∶2∶1∶1)等展開(kāi)系統(tǒng),經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)確定以石油醚(60~90℃)-三氯甲烷-甲醇-水(8∶17∶2∶1)為展開(kāi)劑,得到的薄層色譜斑點(diǎn)分離度較好。同時(shí)考察了不同廠(chǎng)家、不同類(lèi)型預(yù)制板,不同展開(kāi)溫度和濕度,結(jié)果均表明本法的耐用性良好。
根據(jù)測(cè)定結(jié)果,考慮到串連珠藥材為南方所產(chǎn),而南方氣候較為濕潤(rùn),因此擬訂水分不得過(guò)13.0%,總灰分不得過(guò)6.0%,酸不溶性灰分不得過(guò)1.0%;采用冷浸法和熱浸法來(lái)進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果兩者提取率相當(dāng),浸出溶劑的選擇方面,采用不同濃度的乙醇和水作為溶劑來(lái)提取,結(jié)果不同濃度其浸出物含量不同,水溶性大于醇溶性浸出物含量,低濃度的乙醇浸出物含量較大,為了降低藥材無(wú)效成分的溶出度,重點(diǎn)富集瑤藥串連株蒽醌類(lèi)和部分水溶性成分等主要活性成分,因此浸出物測(cè)定采用以70%乙醇作為溶劑的冷浸法,含量不得少于5.0%。本研究所建立的方法準(zhǔn)確可靠,可為瑤藥串連珠的質(zhì)量評(píng)估、監(jiān)管等提供參考。