嚴(yán)欣亮

（江陰市第三人民醫(yī)院，江蘇 江陰 214400）

我院引進(jìn)了日本希森美康公司推出的Sysmex XE-2100 全自動五分類血細(xì)胞分析儀，本研究旨在檢測Sysmex XE-2100 全自動血細(xì)胞分析儀的全血細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)性能指標(biāo)，并與Sysmex XS-1000i、邁瑞B(yǎng)C-6800 血細(xì)胞分析儀比較，了解它們之間的相關(guān)性。同時，以血涂片顯微鏡白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)為“金標(biāo)準(zhǔn)”，評價Sysmex XE-2100 白細(xì)胞分類準(zhǔn)確程度。

1 資料與方法

1.1 儀器 希森美康公司生產(chǎn)的Sysmex XE-2100 和Sysmex XS-1000i 全自動血細(xì)胞分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的邁瑞 BC-6800 全自動血細(xì)胞分析儀，OLYMPUS 多頭顯微鏡購自日本奧林巴斯公司。

1.2 試劑 三臺儀器均使用與儀器配套的原裝試劑、校準(zhǔn)液，質(zhì)控品由伯樂實(shí)驗(yàn)有限公司提供（批號77872），江蘇康健醫(yī)療用品有限公司提供的EDTAK2 抗凝管。

1.3 樣本 采集本院體檢或住院患者新鮮血液50例，抽取受試者靜脈全血2 毫升（部分實(shí)驗(yàn)在患者知情同意的條件下抽取靜脈血20 毫升），以乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝，取血后迅速混勻。

2 方法

2.1 儀器本底測試 實(shí)驗(yàn)前分別對三臺儀器進(jìn)行保養(yǎng)，使儀器處于正常工作狀態(tài)，且所處工作環(huán)境保持一致，用各儀器配套的原裝標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行校準(zhǔn)，再進(jìn)行本底測試[1]。本底測試結(jié)果應(yīng)在儀器標(biāo)定的范圍內(nèi)。

2.2 批內(nèi)精密度測試 按美國國家臨床實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）EP15-A 文件要求，取高、中、低三個水平新鮮血液標(biāo)本，連續(xù)重復(fù)測定10 次，計(jì)數(shù)他們的變異系數(shù)（CV）和標(biāo)準(zhǔn)差（S）。CV 要求在儀器標(biāo)定的范圍內(nèi)。

2.3 日間精密度測定 每天在儀器保養(yǎng)完畢后進(jìn)行一次質(zhì)控測試，連續(xù)測試20 天，計(jì)數(shù)變異系數(shù)（CV）及標(biāo)準(zhǔn)差（S）。室內(nèi)質(zhì)控遵循多規(guī)則判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 攜帶污染率測定 參照國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會（ICSH）《血細(xì)胞分析儀評價指南》[2]推薦的方法，取低濃度血液標(biāo)本混勻后連續(xù)測試3 次，測定值分別為L1、L2、L3，然后再取高濃度血液樣本混勻后連續(xù)測定3 次，測定值分別為H1、H2、H3。攜帶污染率（%）計(jì)算方法為（L1-L3）/（H3-L3）×100%。檢測要求HCT、MCV、PLT、WBC、RBC、HGB 的CV 均小于1%。

2.5 線性測定：取高濃度標(biāo)本或者采用20 毫升患者血液濃集的方法，將其與自身乏血小板血漿作80%、50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.5625%比例稀釋，對不同濃度樣品測定其白細(xì)胞（WBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞比積（HCT）、紅細(xì)胞（RBC）及血小板（PLT），各測兩次取平均值，將理論值與實(shí)測值進(jìn)行回歸分析，計(jì)算r 值，要求a=1±0.05，r≥0.975。

2.6 結(jié)果比對分析：隨機(jī)抽取本院住院及體檢標(biāo)本50份，分別在Sysmex XE-2100；Sysmex XS-1000i；及邁瑞B(yǎng)C-6800 上檢測，兩小時內(nèi)檢測完畢，參考CLSI EP09-A2 中比對試驗(yàn)方法計(jì)算三臺儀器血細(xì)胞計(jì)數(shù)的差異百分率和相關(guān)，進(jìn)行配對t 檢驗(yàn)，觀察差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)算公式：差值=測定值-基準(zhǔn)值；差異百分率（%）=（測定值-基準(zhǔn)值）/基準(zhǔn)值×100%。

2.7 Sysmex XE-2100 血細(xì)胞分析儀準(zhǔn)確性評估：在比對試驗(yàn)抽取的50 份標(biāo)本中抽取所有體檢標(biāo)本14例及6例住院患者共20 份標(biāo)本，以顯微鏡檢查結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析Sysmex XE-2100 血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)與顯微鏡鏡檢結(jié)果的相關(guān)性。20 份標(biāo)本，每份標(biāo)本推4 張血涂片，由科室兩位有經(jīng)驗(yàn)的中級及副高級職稱技師，每人每份標(biāo)本兩張，選擇血涂片體尾部分進(jìn)行分類，每張血涂片用油鏡分類200 個細(xì)胞，每份標(biāo)本分類800 個細(xì)胞，與機(jī)器分類的血細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)性分析。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 軟件處理數(shù)據(jù)，t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)及相關(guān)回歸分析。

3 結(jié)果

3.1 本底實(shí)驗(yàn)、批內(nèi)精密度（CV）、儀器穩(wěn)定性（質(zhì)控）、攜帶污染率、線性測定，結(jié)果均已達(dá)到儀器要求。

3.2 結(jié)果比對分析：Sysmex XE-2100 與Sysmex XS-1000i、邁瑞B(yǎng)C-6800 血細(xì)胞分析儀比對分析的差異百分率或差值均在允許范圍內(nèi)，WBC、RBC、HB、HCT、PLT、NEUO%、LYM%、MONO%數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，方差齊，用t 檢驗(yàn)比對，EO%、BASO 數(shù)據(jù)不呈正態(tài)分布，用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比對分析。經(jīng)檢驗(yàn)，兩組對比的BASO 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）其他項(xiàng)目差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）.相關(guān)性除Sysmex XE-2100 與Sysmex XS-1000i 比較BASO 相關(guān)性不佳外（r=0.5982），其余各項(xiàng)相關(guān)性良好。見表1

表1 Sysmex XE-2100 與XS-1000i、邁瑞B(yǎng)C-6800 結(jié)果比對分析（配對t 檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)）

續(xù)表1 Sysmex XE-2100 與XS-1000i、邁瑞B(yǎng)C-6800 比對分析（配對T 檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)）

3.3 20例標(biāo)本Sysmex XE-2100 血細(xì)胞分析儀與顯微鏡鏡檢白細(xì)胞分類結(jié)果的相關(guān)性除嗜堿性粒細(xì)胞不佳外，其余良好，基本能滿足臨床要求。見表2

表2 Sysmex XE-2100 血細(xì)胞分析儀與顯微鏡計(jì)數(shù)法白細(xì)胞分類測試結(jié)果比較（n=20 份，%）

4 討論

Sysmex XE-2100 應(yīng)用了流式細(xì)胞檢測技術(shù)進(jìn)行人體細(xì)胞分析，同時結(jié)合了細(xì)胞化學(xué)熒光染色的技術(shù)，從而提高了細(xì)胞分析的準(zhǔn)確度與靈敏度不僅能滿足檢測大批量樣本的需求，還可以為臨床提供包括造血祖細(xì)胞、有核紅細(xì)胞（NRBC）、幼稚型網(wǎng)織紅細(xì)胞、光學(xué)法血小板等新參數(shù)檢測信息。該儀器紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)分析仍然沿用了經(jīng)典的電阻抗法，血紅蛋白測定上采用了無劇毒的物質(zhì)SIS 溶血劑比色法，所產(chǎn)生的廢物也無需特殊處理，有利于環(huán)境保護(hù)。Sysmex XE-2100 五分類血細(xì)胞分析儀應(yīng)用了半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測技術(shù)原理結(jié)合細(xì)胞化學(xué)熒光染色的技術(shù)，以及專用的WBC/BASO 和WBC DIEF 檢測通道，對血細(xì)胞進(jìn)行檢測分析。通過半導(dǎo)體激光照射被檢測細(xì)胞，根據(jù)每個細(xì)胞所產(chǎn)生的3 種信號來分辨細(xì)胞。側(cè)向散射光反應(yīng)細(xì)胞的內(nèi)容物，如細(xì)胞核和顆粒等；前向散射光反應(yīng)血細(xì)胞的體積；側(cè)向熒光反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)的RNA 和DNA 含量；從而得到了細(xì)胞散點(diǎn)圖和用細(xì)胞直方圖直觀表示，進(jìn)而使白細(xì)胞分類的質(zhì)量得到保證。WBC/BASO 通道采用了表面活性劑技術(shù)，使嗜堿性粒細(xì)胞以外的白細(xì)胞破碎變成了裸核，而嗜堿性粒細(xì)胞則可以抵抗表面活性劑的溶解，二者之間由于體積差異，表現(xiàn)為散射光信號不同，從而實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確區(qū)分[3]；DIEF 通道則是根據(jù)不同類型及不同成熟度的白細(xì)胞對熒光染料的著色能力存在差異，檢測散射光信號和熒光信號可以區(qū)分出單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性/嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。XS-1000i 卻沒有WBC/BASO 通道，它的WBC 分類主要依靠DIEF 通道和添置的一個計(jì)算軟件將白細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分。所以XE-2100 與XS-1000i 相比，嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)性不佳。XE-2100 白細(xì)胞分類與手工法分類相比，嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)性不佳，這與它們所占比例較少有關(guān)?？傊?，Sysmex XE-2100 五分類血細(xì)胞分析儀是一臺性能優(yōu)良、自動化程度高、檢測速度快、計(jì)數(shù)分類準(zhǔn)確可靠值得信賴和推薦的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。到目前為止，還沒有任何一種血細(xì)胞分析儀可以完全取代人工鏡檢，只能做為一種過篩工具，對血液病患者還需末梢血染色鏡檢[4]。