郭興婧，陳少宗，常曉麗，王正文

（山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸研究院，濟(jì)南 250355）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是臨床常見的功能性胃腸?。╢unctional gastrointestinal disorders，F(xiàn)GIDs）之一，給患者日常工作、生活、心理健康帶來極大負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[1]。針灸療法對于IBS 具有較好的治療作用[2]。本實(shí)驗(yàn)以IBS 模型大鼠為對象，以結(jié)腸擴(kuò)張耐壓性和心率變異性為指標(biāo)，觀察單純電針天樞對其內(nèi)臟高敏與心率頻域的調(diào)控作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用體質(zhì)量200～250 g 的雄性清潔級Wistar 大鼠36 只，于清潔級實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)[（22±2）℃，12/12 h 晝夜循環(huán)]，黑夜時(shí)間水和食物均可自由攝取，隨機(jī)分為對照組、模型組與天樞組。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，大鼠在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采用深度麻醉法使動(dòng)物死亡，動(dòng)物尸體送交山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心統(tǒng)一處理。實(shí)驗(yàn)方案符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)福利、倫理要求，批號：SDUTCM20200620001。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 戊巴比妥鈉，甘油，自制擴(kuò)張球囊，自制鉑金絲電極，恒溫手術(shù)臺，華佗牌針灸針，華佗牌電針儀，手術(shù)器械，Powerlab 數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)（AD Instruments，澳大利亞）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 除對照組外，其他2 組均按照同一方法進(jìn)行造模，采用避水應(yīng)急法造模[3-4]。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，在45 cm×25 cm×25 cm 的透明水箱正中置于一10 cm×8 cm×8 cm 立柱，向箱中注水[水溫（25±2）℃]，保證水面在平臺表面下1 cm，將大鼠放于平臺上進(jìn)行1 h避水應(yīng)激，并且連續(xù)造模干預(yù)10 d，對照組置于不盛水的相同容器內(nèi)。為消除生物節(jié)律的影響，造模時(shí)間于每天9～10 時(shí)進(jìn)行。

1.2.2 模型評價(jià) 大鼠造模結(jié)束后運(yùn)用腹壁撤回反射（AWR）半定量評分對模型進(jìn)行評價(jià)[5-6]。實(shí)驗(yàn)前，禁食不禁水8～12 h，并于實(shí)驗(yàn)前輕觸肛門，使其排出殘余糞便。自大鼠肛門內(nèi)置入誘發(fā)刺激的擴(kuò)張球囊，深度為6 cm，并將擴(kuò)張球囊縛在大鼠尾端以防止其滑出。置大鼠于平臺上，并限制其于20 cm×8 cm×8 cm透明塑料盒內(nèi)，讓大鼠適應(yīng)15～20 min 后進(jìn)行結(jié)直腸擴(kuò)張刺激和AWR 評分。擴(kuò)張壓力為40 mm Hg（1 mm Hg ≈0.133 kPa）。AWR 評分標(biāo)準(zhǔn)具體如下：對結(jié)腸擴(kuò)張刺激無行為反應(yīng)，評為0 分；給予刺激大鼠有動(dòng)作停頓后并見短暫的頭部運(yùn)動(dòng)行為，評為1 分；刺激期間見有腹部肌肉收縮，評為2 分；如有腹部抬起行為，評為3 分；身體拱起，并抬起盆腔和陰囊者，評為4 分。每次結(jié)直腸擴(kuò)張刺激持續(xù)20 s，間隔5 min后給下一次刺激，每個(gè)刺激強(qiáng)度重復(fù)3 次，取平均值作為最后的評分值。經(jīng)評估，每組各成模7 只。

1.2.3 電針治療 根據(jù)中國針灸學(xué)會實(shí)驗(yàn)針灸分會制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》，參照人體經(jīng)穴定位取“天樞”，毫針直刺0.3 cm 后接電針診療儀，參數(shù)為連續(xù)波，頻率2 Hz、強(qiáng)度1 mA，連續(xù)20 min，每日1 次，連續(xù)14 d。對照組和模型組每天與天樞組相同時(shí)間相同方法進(jìn)行抓取、固定，但不給予電針干預(yù)。

1.2.4 心電記錄 治療結(jié)束后次日開始記錄各組大鼠心電圖。實(shí)驗(yàn)之前，為了減少糞便的形成，對各組大鼠禁食不禁水18～24 h。并于實(shí)驗(yàn)前提大鼠尾部，使其排出腸內(nèi)殘余糞便。大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，麻醉后大鼠取仰臥位，固定于手術(shù)臺，用針灸針分別插入大鼠的雙下肢和右上肢皮下，再用心電圖電極固定在雙下肢和右上肢，參考電極固定在右下肢，正極固定在左下肢，負(fù)極固定在右上肢，待心電圖穩(wěn)定后，使用Powerlab 數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)的心電圖20 min，分析心率低頻信號（low frequency，LF）、高頻信號（high frequency，HF）特征。

1.2.5 結(jié)腸敏感性測定 心電記錄完成后，在麻醉狀態(tài)下將甘油潤滑后的氣囊經(jīng)肛門緩緩插入6～7 cm，使氣囊的末端距離肛門約1 cm，用膠帶把導(dǎo)管和大鼠尾巴根部纏在一起，通過大鼠尾根部依托固定住球囊，以防滑脫。氣囊連接壓力感受器，可即時(shí)檢測氣囊壓力。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體溫控制系統(tǒng)使大鼠體溫保持在37 ℃左右。沿腹正中線與髂前上棘的中點(diǎn)，在潔凈條件下行外科無菌操作下行縱向切口，剪開皮膚和皮下脂肪，暴露腹直肌，將電極插入肌肉，記錄同時(shí)給氣囊緩慢注氣，肌電信號通過置于雙側(cè)腹直肌的電極引出，肌電信號通過放大器、AD 信號轉(zhuǎn)換器進(jìn)入計(jì)算機(jī)，采用Powerlab 數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)，記錄大鼠在不同擴(kuò)張壓力下對應(yīng)的腹直肌的放電活動(dòng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 組間比較用單因素方差分析，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用GraphPad Prism 5.0軟件分析作圖，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 電針天樞對IBS大鼠腸道敏感性的影響 見表1、圖1。

表1 電針天樞對IBS 模型大鼠內(nèi)臟疼痛閾值及心率頻域的影響（n =7）

圖1 電針天樞對IBS 大鼠模型內(nèi)臟疼痛閾值影響

2.2 電針天樞對IBS 大鼠心率頻域的影響 截取15 min 的標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，對LF、HF、LF/HF 進(jìn)行分析。見表1、圖2、圖3、圖4。

圖2 電針天樞對IBS 模型大鼠LF 的影響

圖3 電針天樞對IBS 模型大鼠HF 的影響

圖4 電針天樞對IBS 模型大鼠LF/HF 的變化情況

3 討論

IBS 的發(fā)病機(jī)制尚未明了，但許多研究證實(shí)，精神心理因素的影響在臨床和基礎(chǔ)研究中參與IBS 的內(nèi)臟高敏感（visceral hypersensitivity，VHS）發(fā)生，母嬰分離、應(yīng)激等多種應(yīng)激模型可成功模擬IBS 的VHS 癥狀[7-9]。本實(shí)驗(yàn)采用避水應(yīng)急法造模，以VHS 為標(biāo)志的IBS 成模率均穩(wěn)定在60%以上，表明不良精神刺激在IBS的發(fā)病中的確具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，單獨(dú)電針天樞能夠顯著提升IBS 模型大鼠的內(nèi)臟疼痛閾值，這與既往文獻(xiàn)結(jié)果相吻合[10-12]，表明單獨(dú)電針天樞也能夠?qū)BS 模型大鼠VHS 產(chǎn)生一定的調(diào)控作用。

雖然內(nèi)臟高敏感是本病發(fā)病的重要病理生理機(jī)制之一，但神經(jīng)調(diào)控又在VHS 發(fā)生中起關(guān)鍵作用[13-15]，研究[16-17]表明，多數(shù)IBS 患者伴有自主神經(jīng)功能異常，心率變異性分析是盡早發(fā)現(xiàn)IBS 自主神經(jīng)功能異常的一個(gè)重要方法[18]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠的頻域指標(biāo)（LF、HF、LF/HF）發(fā)生嚴(yán)重紊亂，LF、LF/HF 顯著高于正常對照組（P＜0.001），HF 顯著低于正常對照組（P＜0.05），表明IBS 模型大鼠的自主神經(jīng)系統(tǒng)平衡性受到破壞。電針天樞后，發(fā)生嚴(yán)重異常的頻域指標(biāo)得到較好修復(fù)，電針組LF、LF/HF 顯著低于模型組（P＜0.01、P＜0.001），表明單獨(dú)電針天樞能夠顯著改善IBS 模型大鼠自主神經(jīng)系統(tǒng)的平衡性，據(jù)此推測，電針天樞對IBS 模型大鼠VHS 的調(diào)控作用可能與其自主神經(jīng)系統(tǒng)平衡性得到修復(fù)有密切關(guān)系。

綜上所述，單獨(dú)電針天樞對IBS 模型大鼠VHS 有明顯調(diào)控作用，可能與電針天樞對自主神經(jīng)系統(tǒng)平衡功能的調(diào)節(jié)有密切關(guān)系。