黨永富，曹麗茹，魯曉民，黨尊，邱天，段恩忠，邱軍政，田云峰

（1.河南遠(yuǎn)東生物工程有限公司，河南 周口 466000；2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 糧食作物研究所，河南 鄭州 450002；3.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 科研管理處，河南 鄭州 450002）

玉米具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，是重要的糧、飼兼用作物和工業(yè)原料。近年來，我國(guó)玉米年種植面積平均為4 000 萬hm2，總產(chǎn)量占全球玉米總產(chǎn)量的比例僅次于美國(guó)[1]。干旱是重要的非生物脅迫之一，影響植物生理生化特性，進(jìn)而影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致作物產(chǎn)量和品質(zhì)下降。干旱導(dǎo)致玉米減產(chǎn)20%～50%，是影響玉米產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因素之一[2]。因此，提高玉米抗旱性對(duì)保障國(guó)家糧食安全具有重要作用。

近年來，借助外部手段提高作物抗旱性的研究受到重視。耿楊陽[3]研究發(fā)現(xiàn)，噴施光碳核肥可以提高黃瓜的抗氧化酶活性，從而增強(qiáng)黃瓜的抗逆性。彭凌馨[4]研究發(fā)現(xiàn)，葉面噴鋅可以通過提高玉米的過氧化氫酶(Catalase，CAT)活性及葉綠素含量，進(jìn)而提高玉米的抗旱性。王泳超等[5]研究發(fā)現(xiàn)，噴施γ-氨基丁酸保護(hù)了干旱脅迫下玉米幼苗的光合系統(tǒng)，從而增強(qiáng)了玉米的抗旱性。賈艷萍等[6]研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)聚谷氨酸菌株發(fā)酵液增強(qiáng)了土壤的保水能力，提高了干旱脅迫下土壤的含水量，從而提高了玉米幼苗的抗旱性。炭吸附聚谷氨酸是在聚谷氨酸的基礎(chǔ)上經(jīng)生物炭處理得到的新型材料。研究發(fā)現(xiàn)，噴施炭吸附聚谷氨酸可以改善土壤環(huán)境，提高小麥、玉米的產(chǎn)量[7-9]。目前，炭吸附聚谷氨酸在玉米上的研究多集中于其對(duì)產(chǎn)量的影響方面，對(duì)非生物脅迫下玉米形態(tài)和生理生化特性的影響鮮見報(bào)道，尤其是對(duì)干旱脅迫下多個(gè)玉米品種的生長(zhǎng)緩解效應(yīng)研究。為此，研究炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下3 個(gè)玉米品種幼苗生長(zhǎng)及生理生化特性的影響，以期為玉米抗旱高產(chǎn)栽培奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試玉米品種為鄭單958、鄭單6122 和鄭單819，均由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所玉米遺傳育種室提供。供試炭吸附聚谷氨酸有機(jī)物葉面肥（簡(jiǎn)稱炭吸附聚谷氨酸）由河南遠(yuǎn)東生物工程有限公司生產(chǎn)，其主要成分為有機(jī)質(zhì)（≥80.0 g/L）、聚谷氨酸（≥10.0 g/L）、水不溶物（≤10.0 g/L）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用盆栽試驗(yàn)（盆子直徑為9 cm，高度為12 cm），在河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院溫室中進(jìn)行，環(huán)境設(shè)置：30 ℃光照16 h、26 ℃黑暗8 h，相對(duì)濕度為30%～50%。選擇籽粒飽滿的玉米種子播種于營(yíng)養(yǎng)土中，每個(gè)玉米品種種植6 盆，出苗后，每個(gè)盆中保留5 株生長(zhǎng)一致、健壯的玉米苗。三葉期進(jìn)行干旱處理5 d，然后每個(gè)品種(6 盆)分別噴施清水(對(duì)照)和炭吸附聚谷氨酸(250 g炭吸附聚谷氨酸+30 kg水)。鄭單958 噴施清水處理為T1，噴施炭吸附聚谷氨酸處理為T2；鄭單6122 噴施清水處理為T3，噴施炭吸附聚谷氨酸處理為T4；鄭單819 噴施清水處理為T5，噴施炭吸附聚谷氨酸處理為T6。噴施5 d 后，測(cè)定每個(gè)處理玉米幼苗的生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)，每個(gè)樣品3次生物學(xué)重復(fù)。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo) 每個(gè)處理選取3 株幼苗，根系洗凈后用根系掃描儀測(cè)定根表面積、根體積和根長(zhǎng)，用精度為毫米的尺子測(cè)量株高，采用CI-203型葉面積儀(美國(guó)，CID 公司)測(cè)定單株的葉面積，采用烘干稱質(zhì)量法測(cè)定地上部、地下部及總干質(zhì)量，并計(jì)算根冠比。

1.3.2 生理生化指標(biāo) 葉片相對(duì)含水量(Relative water content of leaves，RWC)采用稱質(zhì)量法測(cè)定；葉片熒光參數(shù)Fv/Fm 用FMS-2 脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒鈨x測(cè)定；葉綠素含量采用80%丙酮提取—分光光度法測(cè)定；超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性采用氮藍(lán)四唑光化還原法測(cè)定[10]，過氧化物酶（Peroxidase，POD）活性采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定[11]，CAT 活性參照文獻(xiàn)[12]測(cè)定；可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測(cè)定[13]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010 處理數(shù)據(jù)并作圖，使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行方差及主成分分析。

恢復(fù)系數(shù)=（炭吸附聚谷氨酸處理指標(biāo)值-對(duì)照指標(biāo)值）/對(duì)照指標(biāo)值。

2 結(jié)果與分析

2.1 炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下玉米幼苗生長(zhǎng)的影響

由表1 可知，與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸提高了干旱脅迫下玉米幼苗的根長(zhǎng)、根表面積、根體積、株高、葉面積、地上部干質(zhì)量、地下部干質(zhì)量、總干質(zhì)量及根冠比，除鄭單6122 的株高、根冠比及鄭單819 的根冠比不顯著外，其余均達(dá)到顯著水平。其中，鄭單958 噴施炭吸附聚谷氨酸處理葉面積、株高和總干質(zhì)量分別顯著提高了34.89%、29.92%和23.00%；鄭單6122 噴施炭吸附聚谷氨酸處理的葉面積、根長(zhǎng)和根體積分別顯著提高了51.62%、40.14%和25.70%；鄭單819 噴施炭吸附聚谷氨酸處理葉面積、地下部干質(zhì)量和株高分別顯著提高了53.30%、21.74%和13.62%。

綜上，噴施炭吸附聚谷氨酸后，3 個(gè)玉米品種的生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)均有所提高，尤其是葉面積，表明炭吸附聚谷氨酸緩解了干旱對(duì)玉米生長(zhǎng)的抑制作用。

2.2 炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下玉米葉片相對(duì)含水量的影響

干旱脅迫下，植物吸收不到充足的水分導(dǎo)致體內(nèi)的含水量下降，影響植物的正常生長(zhǎng)。由圖1 可知，干旱脅迫后噴施清水，鄭單958、鄭單6122 和鄭單819葉片相對(duì)含水量無顯著差異。與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后鄭單958、鄭單6122和鄭單819 的葉片相對(duì)含水量分別顯著提高了11.86%、10.17%和18.10%；鄭單819 的相對(duì)含水量顯著高于鄭單6122，而與鄭單958 無顯著差異。綜上，炭吸附聚谷氨酸可顯著提高干旱脅迫下玉米葉片的相對(duì)含水量，但對(duì)不同基因型玉米的作用效果存在差異。

2.3 炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下玉米葉片葉綠素含量的影響

由圖2可知，與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，鄭單958、鄭單6122 和鄭單819 葉片的葉綠素含量分別顯著提高了18.90%、15.70%和19.30%。品種間比較發(fā)現(xiàn)，干旱脅迫后，無論噴施清水還是炭吸附聚谷氨酸，3 個(gè)玉米品種的葉綠素含量均無顯著差異。

2.4 炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下玉米葉片F(xiàn)v/Fm的影響

Fv/Fm 是PSⅡ最大光化學(xué)量子產(chǎn)量，反映PSⅡ反應(yīng)中心光能轉(zhuǎn)換效率。圖3 顯示，干旱脅迫后噴施清水，鄭819葉片的Fv/Fm顯著低于鄭單958和鄭單6122，表明鄭單819 對(duì)干旱脅迫相對(duì)敏感。與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，鄭單958、鄭單6122和鄭單819的Fv/Fm分別顯著提高了5.01%、7.02%和10.05%；鄭單6122 葉片的Fv/Fm 顯著高于鄭單958，而與鄭819無顯著差異。

2.5 炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下玉米葉片抗氧化酶活性的影響

由圖4 可知，干旱脅迫后噴施清水，鄭單958 和鄭單6122 的SOD 活性顯著高于鄭單819。與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，鄭單958、鄭單6122 和鄭單819 葉片的SOD 活性分別顯著提高了17.21%、26.61%和23.42%；鄭單6122 的SOD活性最高，顯著高于其他2個(gè)品種。

由圖4 可知，干旱脅迫后噴施清水，3 個(gè)玉米品種的POD 活性無顯著差異。與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，3 個(gè)玉米品種的POD 活性均顯著升高，而品種間無顯著差異。

由圖4 可知，干旱脅迫后噴施清水，鄭單958 葉片的CAT 活性顯著高于鄭單819，而與鄭單6122 無顯著差異。與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，鄭單958、鄭單6122 和鄭單819 葉片的CAT活性分別顯著提高了7.14%、9.86%和14.29%；鄭單819 葉片的CAT 活性最高，顯著高于鄭單958，與鄭單6122無顯著差異。

綜上，炭吸附聚谷氨酸可以增強(qiáng)干旱脅迫下玉米抗氧化酶活性，進(jìn)而緩解干旱脅迫對(duì)細(xì)胞膜造成的損傷。

2.6 炭吸附聚谷氨酸對(duì)干旱脅迫下玉米可溶性蛋白含量的影響

細(xì)胞缺水時(shí)，細(xì)胞內(nèi)滲透勢(shì)降低，吸水能力下降，此時(shí)植物會(huì)產(chǎn)生大量滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)以提升滲透勢(shì)，增強(qiáng)細(xì)胞的吸水能力?？扇苄缘鞍资且环N重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。由圖5 可知，干旱脅迫后噴施清水，3個(gè)玉米品種的可溶性蛋白含量差異顯著，從大到小依次為鄭單6122、鄭單958、鄭單819。與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，鄭單958、鄭單6122 和鄭單819 葉片的可溶性蛋白含量分別顯著提高了52.11%、38.41%和76.05%；3 個(gè)品種葉片可溶性蛋白含量差異顯著，以鄭單819最高，鄭單958次之。

2.7 玉米生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)恢復(fù)系數(shù)間的相關(guān)性分析

由表2 可知，玉米根長(zhǎng)恢復(fù)系數(shù)與POD 活性恢復(fù)系數(shù)呈顯著正相關(guān)，株高恢復(fù)系數(shù)與地上部干質(zhì)量恢復(fù)系數(shù)呈顯著正相關(guān)，葉綠素含量恢復(fù)系數(shù)與可溶性蛋白恢復(fù)系數(shù)呈極顯著正相關(guān)，總干質(zhì)量恢復(fù)系數(shù)與地上部干質(zhì)量恢復(fù)系數(shù)、地下部干質(zhì)量恢復(fù)系數(shù)均呈顯著正相關(guān)，可溶性蛋白恢復(fù)系數(shù)與葉片相對(duì)含水量恢復(fù)系數(shù)呈極顯著正相關(guān)，表明玉米的個(gè)體生長(zhǎng)是多個(gè)生理生化反應(yīng)協(xié)同的結(jié)果，各指標(biāo)間存在密切的關(guān)系。

2.8 玉米生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)恢復(fù)系數(shù)的主成分分析

為了確定炭吸附聚谷氨酸緩解玉米干旱的關(guān)鍵指標(biāo)，依據(jù)各指標(biāo)的恢復(fù)系數(shù)進(jìn)行主成分分析（圖6），發(fā)現(xiàn)第一主成分和第二主成分對(duì)總方差的貢獻(xiàn)率分別為55.58%和44.42%。其中，葉片相對(duì)含水量、葉綠素含量和可溶性蛋白含量恢復(fù)系數(shù)具有較高的特征向量和特征值，表明這3 個(gè)指標(biāo)是噴施炭吸附聚谷氨酸緩解玉米干旱的關(guān)鍵指標(biāo)。

2.9 玉米幼苗生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)與總干質(zhì)量的關(guān)聯(lián)分析

玉米總干質(zhì)量是玉米生長(zhǎng)狀態(tài)的一個(gè)重要指標(biāo)。對(duì)玉米總干質(zhì)量與生長(zhǎng)形態(tài)和生理生化指標(biāo)進(jìn)行灰色關(guān)聯(lián)分析（表3），發(fā)現(xiàn)玉米總干質(zhì)量與葉綠素含量、根冠比、Fv/Fm 關(guān)聯(lián)度較高，關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.566 4、0.454 9、0.449 1；與抗氧化酶POD、SOD 和CAT 活性的關(guān)聯(lián)系數(shù)較高，分別為0.429 9、0.418 2和0.400 1。

表3 玉米生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)與總干質(zhì)量的灰色關(guān)聯(lián)分析Tab.3 Grey correlation analysis between growth，physiological and biochemical indexes and total dry weight of maize

3 結(jié)論與討論

干旱是影響玉米產(chǎn)量與品質(zhì)的重要因素之一，缺水時(shí)，玉米通過生理生化的改變積極響應(yīng)干旱脅迫，從而減輕干旱脅迫對(duì)自身生長(zhǎng)帶來的不良影響。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)植物體內(nèi)缺少水分時(shí)，會(huì)影響植物的細(xì)胞分裂，導(dǎo)致植株矮小，甚至降低產(chǎn)量[14-16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸顯著提高了干旱脅迫下玉米幼苗的株高、根長(zhǎng)、根表面積、根體積、根冠比、地上部和地下部及總干質(zhì)量，表明炭吸附聚谷氨酸可以增強(qiáng)玉米對(duì)干旱脅迫的適應(yīng)能力，與陳東義等[9]在小麥上的研究結(jié)果相似。

植物缺少水分時(shí)，其生理反應(yīng)會(huì)受到嚴(yán)重的影響。干旱脅迫下，玉米葉片的相對(duì)含水量較正常生長(zhǎng)條件下明顯下降[17-19]。張富國(guó)等[20]研究發(fā)現(xiàn)，干旱脅迫下，玉米自交系葉片葉綠素含量明顯下降，但抗旱性較強(qiáng)玉米自交系的葉綠素含量高于對(duì)水分敏感的玉米自交系。本研究發(fā)現(xiàn)，與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸后，鄭單819、鄭單958和鄭單6122 的葉片相對(duì)含水量、葉綠素含量和Fv/Fm 值均顯著升高，這與王泳超等[5]在干旱脅迫下噴施γ-氨基丁酸提高了玉米葉片相對(duì)含水量、葉綠素含量和Fv/Fm 的研究結(jié)果類似，但是兩者的作用原理尚有待進(jìn)一步研究。

水分缺失會(huì)造成植物體內(nèi)活性氧的增加，進(jìn)而對(duì)氨基酸殘基造成破壞，形成羰基衍生物，還會(huì)使一些含有金屬的酶失活[21-22]，此時(shí)植物細(xì)胞內(nèi)清除活性氧的酶促體系SOD、CAT、POD活性和抗氧化物質(zhì)含量上升，清除植物體內(nèi)多余的活性氧，以維持植物的正常生理生化狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)，干旱脅迫后，與噴施清水處理相比，噴施炭吸附聚谷氨酸顯著提高了玉米葉片的SOD、POD、CAT 活性，有效緩解了干旱脅迫對(duì)玉米細(xì)胞膜的損害。楊麗文等[23]研究發(fā)現(xiàn)，外源施加γ-氨基丁酸能提高番茄幼苗SOD、POD、CAT 活性，進(jìn)而有效緩解脅迫帶來的損傷。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，噴施炭吸附聚谷氨酸對(duì)3個(gè)玉米品種的抗氧化酶活性的增強(qiáng)幅度不同，推測(cè)與玉米基因型有關(guān)。

滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)在植物缺水狀態(tài)下對(duì)維持細(xì)胞吸水起著重要的作用，可以改變細(xì)胞內(nèi)的滲透壓，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)外的滲透勢(shì)差，維持細(xì)胞內(nèi)各項(xiàng)生命活動(dòng)的有序進(jìn)行[24]。可溶性蛋白作為植物重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)之一，常被用作評(píng)價(jià)作物抗逆性的重要指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，噴施炭吸附聚谷氨酸可顯著提高干旱脅迫下玉米幼苗葉片的可溶性蛋白含量，有效緩解干旱脅迫造成的細(xì)胞內(nèi)外滲透勢(shì)失衡，維持玉米的吸水能力和保水能力，與周靜云等[25]聚谷氨酸可提高水稻秧苗可溶性物質(zhì)含量的研究結(jié)果類似。

玉米作為一個(gè)有機(jī)生命體，其體內(nèi)的各項(xiàng)生理生化活動(dòng)具有緊密的關(guān)聯(lián)性，研究相關(guān)指標(biāo)間的關(guān)聯(lián)度及關(guān)鍵指標(biāo)，對(duì)調(diào)控玉米的生長(zhǎng)具有重要意義。張春宵等[26]通過相關(guān)性分析及主成分分析明確了玉米萌發(fā)期抗旱鑒定的關(guān)鍵指標(biāo)。崔靜宇等[27]通過主成分分析等統(tǒng)計(jì)方法對(duì)10 個(gè)玉米品種苗期抗旱性進(jìn)行了綜合評(píng)定。本研究結(jié)果顯示，噴施炭吸附聚谷氨酸后玉米生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)的恢復(fù)系數(shù)間具有緊密的聯(lián)系，其中葉片相對(duì)含水量、葉綠素含量和可溶性蛋白含量是炭吸附聚谷氨酸提高玉米苗期耐旱性的關(guān)鍵指標(biāo)，為玉米抗旱栽培及培育抗旱新品種提供了參考。

玉米總干質(zhì)量是對(duì)光合產(chǎn)物進(jìn)行消耗、運(yùn)輸和分配的結(jié)果，是玉米生長(zhǎng)狀態(tài)和潛在產(chǎn)量的一個(gè)重要參考指標(biāo)。韓學(xué)坤等[28]利用灰色關(guān)聯(lián)分析得出，單穗粒質(zhì)量、百粒質(zhì)量、穗長(zhǎng)等是提高玉米產(chǎn)量的主要因素。本研究發(fā)現(xiàn)，玉米總干質(zhì)量與葉綠素含量、根冠比、Fv/Fm 關(guān)聯(lián)度較高，與抗氧化酶活性也存在著較高的關(guān)聯(lián)度。張秀偉等[29]研究發(fā)現(xiàn)，SOD活性、葉綠素含量與玉米自交系產(chǎn)量存在較大的關(guān)聯(lián)度，與本研究結(jié)果相似。本研究結(jié)果為生產(chǎn)上使用炭吸附聚谷氨酸提供理論依據(jù)，為抗旱栽培提供技術(shù)支持，后期將系統(tǒng)地探究炭吸附聚谷氨酸緩解干旱脅迫對(duì)玉米生長(zhǎng)抑制的分子機(jī)制。