喻書誠(chéng)，王思龍，張 林，王有寧，李長(zhǎng)春，湯亞芳，斯琴朝克圖，劉 牛，鄭 操,2, ，姚國(guó)新,

（1.湖北工程學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北省植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖北孝感 432000；2.湖北工程學(xué)院特色果蔬質(zhì)量安全控制湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北孝感 432000）

野菊花（Chrysanthemum indicumL.）又名苦薏，味苦、辛，性涼,具有廣譜抗菌、抗病毒、降壓、疏散風(fēng)熱、解毒護(hù)肝的藥用效力[1?3]。野菊花喜涼爽濕潤(rùn)氣候，耐寒，在我國(guó)分布較為廣泛。孝感市大悟縣地處東北部鄂豫邊界，大別山西南段[4]，為典型的亞熱帶季風(fēng)氣候，四季分明、雨水充沛，適宜野菊花的生長(zhǎng)，野菊花也因此成為了當(dāng)?shù)刂奶厣Y源?！笆奈濉睍r(shí)期以來(lái)，鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略全面進(jìn)入發(fā)力期，大力發(fā)展農(nóng)村經(jīng)濟(jì)、建設(shè)高水平的農(nóng)村全面小康、全面提高脫貧質(zhì)量已刻不容緩[5]。孝感市大悟縣作為革命老區(qū)和擁有諸多全國(guó)著名紅色旅游景點(diǎn)[6]，地處偏僻山區(qū)[7]，旅游業(yè)難以發(fā)展，亟待尋求其他方式以促進(jìn)當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)高速、高質(zhì)量發(fā)展。野菊花作為一種藥食兩用的植物，自古以來(lái)即得到廣泛應(yīng)用。在食品材料方面，由于其顏色鮮艷、氣味物質(zhì)復(fù)雜，氣味獨(dú)特芬芳[8]，因而常被作為茶飲、食品色素添加劑以及風(fēng)味調(diào)節(jié)劑等。黃芳等[9]在野菊花黃色素的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，野菊花黃色素作為食品添加劑不僅具有較好的穩(wěn)定性，還具有較好的抗氧化能力，是一種優(yōu)良的植物色素。

據(jù)報(bào)道，野菊花含有的主要活性成分包括黃酮類物質(zhì)、揮發(fā)油類以及多種微量元素[10]。蒙花苷就是野菊花中一種重要的黃酮類化合物，具有顯著的抗菌消炎[11?14]、抗衰老[15]、抗腫瘤[16]、降糖降壓[17?18]功效。研究表明，酶預(yù)處理技術(shù)[19?22]與微波輔助等[23]技術(shù)能夠有效提取植物中活性組分，提升了目標(biāo)產(chǎn)物得率。例如，孫平等在微波輔助新型溶劑提取野菊花總黃酮的研究中，采用響應(yīng)面法對(duì)溶劑含水量、料液比、溫度、提取時(shí)間、超聲功率進(jìn)行優(yōu)化，確定出最佳條件為溶劑含水量28%、料液比1:25（g:mL）、微波功率450 W、提取時(shí)間38 min的微波提取法，對(duì)野菊花總黃酮的提取率達(dá)到了62.16 mg/g[24]；張明等采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法，優(yōu)化了野菊花中蒙花苷回流提取過(guò)程，確定出80%乙醇、液料比1:8、提取3次，每次提取2 h的最優(yōu)回流提取方案[25]。目前，相關(guān)研究主要集中于對(duì)野菊花蒙花苷含量測(cè)定方法的建立[26?27]或是采用正交試驗(yàn)的方式優(yōu)化提取工藝參數(shù)，且提取次數(shù)較多，時(shí)間較長(zhǎng)[2,28]，尚且缺乏對(duì)于最優(yōu)工藝能否用于測(cè)定蒙花苷絕對(duì)含量的可行性驗(yàn)證，和用于真實(shí)樣本中蒙花苷定量的系統(tǒng)研究。

本試驗(yàn)以常規(guī)的溶劑回流提取法為基礎(chǔ)，采用Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)，以蒙花苷的得率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)能夠影響蒙花苷得率的主要因素（溶劑種類、溶質(zhì)質(zhì)量百分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、提取溫度、液料比）進(jìn)行優(yōu)化，以獲得最優(yōu)的工藝參數(shù)，為蒙花苷提取工藝的制定提供理論依據(jù)。同時(shí)，以最優(yōu)的工藝條件，對(duì)孝感市大悟縣各地區(qū)采集的野菊花樣品進(jìn)行蒙花苷含量測(cè)定，以期在優(yōu)化提取工藝的同時(shí)，找到最有利于野菊花合成蒙花苷的種植區(qū)域，為大悟縣種植富含蒙花苷的野菊花提供指導(dǎo)，為該地蒙花苷提取分離的產(chǎn)業(yè)化提供理論支撐。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

野菊花樣品 于2020年11月1~5日（野菊花盛花期），采自孝感市大悟縣全縣內(nèi)不同區(qū)域，共計(jì)121份樣品；色譜級(jí)甲醇 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水乙醇 中天化工有限責(zé)任公司；蒙花苷標(biāo)準(zhǔn)品 上海源葉生物科技有限公司。

DZKW-S-6型恒溫水浴鍋 北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司；HITACHI高效液相色譜儀 日本日立公司；超純水儀 成都滲源科技有限公司；離心機(jī)

北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司；超聲儀 上海之信儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 野菊花采樣及樣本的預(yù)處理 孝感市大悟縣野菊花樣本采樣工作，按4 km×4 km方格網(wǎng)布置采樣區(qū)，全縣共設(shè)121個(gè)采樣區(qū)（圖1），覆蓋全縣17個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)。野菊花樣本按規(guī)范采集，同時(shí)借助手機(jī)奧維地圖選點(diǎn)定點(diǎn)定位各采樣點(diǎn)。篩選品質(zhì)好的野菊花，沖洗干凈去掉葉梗，花序105 ℃殺青5 min，80 ℃烘至恒重，以粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，粉末置于干燥器中備用。

1.2.2 野菊花蒙花苷的提取 精密稱取一定量經(jīng)過(guò)預(yù)處理的野菊花樣品，置于100 mL具塞三角瓶中，加入一定量的溶劑，設(shè)定溫度及提取時(shí)間，采取回流法進(jìn)行野菊花蒙花苷的提取[29]。將回流提取后的樣品置于離心管離心，測(cè)量上清液體積，并取少量樣液過(guò)0.22 μm微孔濾膜,濾液稀釋10或20倍，以備后續(xù)進(jìn)行HPLC分析。

1.3 提取工藝優(yōu)化

工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)均以第27號(hào)采集樣本為材料，進(jìn)行蒙花苷的提取和含量測(cè)定。

1.3.1 單因素實(shí)驗(yàn) 稱取一定量的野菊花粉末，在其他條件保持不變的情況下，進(jìn)行回流提取，分別考察溶劑種類、溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、液料比、提取溫度等因素對(duì)蒙花苷得率的影響。

1.3.1.1 溶劑種類對(duì)蒙花苷得率的影響 稱取野菊花干粉樣品0.05 g，選擇甲醇、乙醇兩種溶劑提取，確定溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%、液料比為200:1（mL/g），在60 ℃下回流提取30 min，提取液處理后測(cè)量蒙花苷濃度并通過(guò)計(jì)算得出蒙花苷得率，以確定較優(yōu)溶劑種類。

1.3.1.2 溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)蒙花苷得率的影響 稱取野菊花干粉樣品0.05 g，設(shè)置溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度為30%、40%、50%、60%、70%，確定溶劑為乙醇，在提取溫度為60 ℃、液料比為200:1（mL/g）、回流提取時(shí)間為30 min的條件下，進(jìn)行回流提取，提取液處理后測(cè)量蒙花苷濃度，計(jì)算得出蒙花苷得率，以確定較優(yōu)溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.3.1.3 提取時(shí)間對(duì)蒙花苷得率的影響 稱取野菊花干粉樣品0.05 g，設(shè)置提取時(shí)間梯度為15、30、45、60、75 min，確定溶劑為60%的乙醇，在提取溫度為60 ℃、液料比為200:1（mL/g）的條件下，回流提取，提取液處理后測(cè)量蒙花苷濃度，計(jì)算得出蒙花苷得率，以確定較優(yōu)提取時(shí)間。

1.3.1.4 液料比對(duì)蒙花苷得率的影響 稱取野菊花干粉樣品0.2 g，設(shè)置液料比梯度為50:1、100:1、150:1、200:1、250:1（mL/g），確定溶劑為60%的乙醇，在提取溫度為60 ℃的條件下，回流提取30 min，提取液處理后測(cè)量蒙花苷濃度，計(jì)算得出蒙花苷得率，以確定較優(yōu)液料比。

1.3.1.5 提取溫度對(duì)蒙花苷得率的影響 稱取野菊花干粉樣品0.2 g，設(shè)置溫度梯度為40、50、60、70、80 ℃，確定溶劑為60%的乙醇，在液料比為200:1（mL/g）的條件下，回流提取30 min，提取液處理后測(cè)量蒙花苷濃度，計(jì)算得出蒙花苷得率，以確定較優(yōu)提取溫度。

1.3.2 響應(yīng)面試驗(yàn) 基于單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的結(jié)果，采用Design Expert 8，進(jìn)行Box-Behnken方法設(shè)計(jì)4因素3水平響應(yīng)面試驗(yàn)，因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。根據(jù)響應(yīng)面構(gòu)建的數(shù)據(jù)模型確定最優(yōu)的提取工藝參數(shù)。

1.4 蒙花苷含量測(cè)定

1.4.1 色譜條件 C18反向色譜柱（Agilent TC-C18250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（體積比為57:43:0.04）；檢測(cè)波長(zhǎng)：326 nm[30]；柱溫箱：25 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)時(shí)間：15 min。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密量取蒙花苷標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解制成10、5、2.5、1、0.5、0.25、0.1 mg/L系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積（y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度（x）進(jìn)行回歸分析，得到方程：y=24109.86x+460.47，其決定系數(shù)R2=0.99996，用此方程可以精確計(jì)算出野菊花樣本中蒙花苷的濃度與含量。

1.4.3 蒙花苷得率的計(jì)算 以HPLC分析，積分計(jì)算樣品溶液蒙花苷吸收峰面積，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算蒙花苷濃度。

式中：c：樣品蒙花苷濃度（mg/mL）；V：樣品溶液總體積（mL）；n：稀釋倍數(shù)；m：野菊花粉末質(zhì)量（g）。

1.5 孝感市大悟縣不同地區(qū)野菊化蒙花苷含量測(cè)定

采用1.3.2響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的工藝參數(shù)，對(duì)大悟縣各地121份野菊花樣品進(jìn)行蒙花苷含量測(cè)定，以確定最有利于大悟縣野菊花蒙花苷生成并積累的種植區(qū)域。

1.6 數(shù)據(jù)分析

所有樣品測(cè)量數(shù)據(jù)至少3個(gè)平行樣，以算術(shù)平均值表示，方差分析（ANOVA）采用IBM SPSS Statistics 24進(jìn)行Duncan檢驗(yàn)，P值小于0.05表示數(shù)據(jù)之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 溶劑種類對(duì)蒙花苷得率的影響 野菊花蒙花苷得率受溶劑種類影響的結(jié)果如圖2所示。3次平行實(shí)驗(yàn)平均得率分別為甲醇：1.921%；乙醇：1.804%，經(jīng)單因素方差分析，兩者差異并不顯著（P>0.05）。因此將價(jià)格更低的乙醇作為最優(yōu)提取溶劑。

圖 2 溶劑種類對(duì)蒙花苷得率的影響Fig.2 Effect of solvent type on the yield of buddleoside

2.1.2 溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)蒙花苷得率的影響 野菊花蒙花苷得率受溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)影響的結(jié)果如圖3所示。當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)處于30%~60%時(shí)，野菊花樣本蒙花苷的得率隨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大而提高；當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于60%時(shí)，蒙花苷得率隨乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的提升反而下降。推測(cè)原因可能是過(guò)高的乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)使得蒙花苷的溶出率已趨近飽和，同時(shí)使得其他醇溶性物質(zhì)的溶出增多，導(dǎo)致蒙花苷得率反而下降的情況出現(xiàn)。綜合考慮，40%~60%為較優(yōu)的溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

圖 3 溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)蒙花苷得率的影響Fig.3 Effect of solute mass fraction on the yield of buddleoside

2.1.3 提取時(shí)間對(duì)蒙花苷得率的影響 野菊花蒙花苷得率受提取時(shí)間影響的結(jié)果如圖4所示。在45 min以前，樣本中蒙花苷的得率隨提取時(shí)間的增加而增加，并在45 min處達(dá)到峰值，而在45 min之后，得率反而會(huì)隨提取時(shí)間的增加而下降，推測(cè)可能是蒙花苷的溫度穩(wěn)定性不強(qiáng)[30]，長(zhǎng)時(shí)間的回流提取導(dǎo)致了蒙花苷的降解，或長(zhǎng)時(shí)間的提取導(dǎo)致樣品中其余成分大量溶出，使蒙花苷得率降低。由此可見(jiàn)，45 min為較優(yōu)提取時(shí)間。

圖 4 提取時(shí)間對(duì)蒙花苷得率的影響Fig.4 Effect of extraction time on the yield of buddleoside

2.1.4 液料比對(duì)蒙花苷得率的影響 野菊花蒙花苷得率受液料比影響的結(jié)果如圖5所示。隨著溶劑體積的上升，得率逐漸增大，并當(dāng)溶劑與干粉的比值為200:1（mL/g）時(shí)，得率達(dá)到最高點(diǎn)。隨后，蒙花苷得率隨液料比的進(jìn)一步增大而開(kāi)始下降，可能原因是蒙花苷的溶出已達(dá)到飽和，溶劑體積的進(jìn)一步增加，促進(jìn)了樣品中其他成分的溶出。因此，200:1（mL/g）是較為優(yōu)異的液料比。

圖 5 液料比對(duì)蒙花苷得率的影響Fig.5 Effect of liquid-solid ratio on the yield of buddleoside

2.1.5 提取溫度對(duì)蒙花苷得率的影響 野菊花蒙花苷得率受提取溫度影響的結(jié)果如圖6所示。當(dāng)提取溫度低于60 ℃時(shí)，蒙花苷的得率隨溫度上升而增加，在60 ℃時(shí)達(dá)到峰值，并會(huì)隨溫度的進(jìn)一步提升而下降。分析原因可能是，蒙花苷屬于熱敏感性化合物[31?32]，較高的提取溫度會(huì)破壞蒙花苷結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致降解。因此，60 ℃為較優(yōu)提取溫度，后續(xù)考察60~80 ℃。

圖 6 提取溫度對(duì)蒙花苷得率的影響Fig.6 Effect of extraction temperature on the yield of buddleoside

2.2 響應(yīng)面分析

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果 采用Design Expert 8軟件進(jìn)行分析，將表2中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元方程擬合，得到野菊化蒙花苷得率Y方程如下：

由表3可知，回歸模型F=48.06，P<0.0001，差異達(dá)到極顯著水平。模型的決定系數(shù)R2=0.9796，調(diào)整決定系數(shù)R2adj=0.9592，說(shuō)明該模型可以應(yīng)用于解釋95.92%的因變量變化情況，擬合度較高，實(shí)驗(yàn)誤差較小。失擬項(xiàng)P=0.5875，大于0.05，差異不顯著，說(shuō)明未知因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響較小，表明模型選擇合適，可以應(yīng)用于對(duì)野菊花蒙花苷提取工藝優(yōu)化進(jìn)行分析?；貧w方程中一次項(xiàng)A（溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、B（提取時(shí)間）、C（液料比）、D（提取溫度）對(duì)樣品中蒙花苷得率的影響均達(dá)到了極顯著水平（P<0.01），其中影響主次因素為D>B>C>A；交互項(xiàng)AD（溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)與提取溫度）、BC（提取時(shí)間與液料比）、BD（提取時(shí)間與提取溫度）三項(xiàng)對(duì)得率的影響均達(dá)到極顯著水平（P<0.01），其中影響效果BC>AD>BD；交互項(xiàng)AC（溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)與液料比）為顯著水平（P<0.05）；二次項(xiàng)A2、D2均達(dá)到極顯著水平（P<0.01），其中A2>D2。

表 2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果Table 2 Experimental design and results of the response surface experiment

表 3 響應(yīng)面回歸方程方差分析Table 3 Variance analysis of response surface regression equation

2.2.2 工藝優(yōu)化及結(jié)果驗(yàn)證 在其他試驗(yàn)因素不變的情況下，考察A、B、C、D各試驗(yàn)因素之間的交互項(xiàng)對(duì)得率的影響，結(jié)果如圖7所示。響應(yīng)面圖坡度越陡表示響應(yīng)值受該因素的影響越大[33]。在交互項(xiàng)對(duì)得率的影響中，當(dāng)其他因素保持在零水平時(shí)，溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的改變并不能顯著影響提取時(shí)間（AB）對(duì)得率的影響，反之也成立；液料比的改變也不能顯著影響到提取溫度（CD）對(duì)得率的影響，反之也成立。這說(shuō)明溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)與提取時(shí)間、液料比與提取溫度之間的交互作用并不明顯，但其他因素之間交互作用顯著，這與方差分析結(jié)果一致。

圖 7 各因素之間交互作用對(duì)蒙花苷得率的影響Fig.7 Response surface graphs showing the effect of extraction conditions on the yield of buddleoside

通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化得出最優(yōu)提取條件為：回流溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)54.13%、提取時(shí)間60 min、液料比為150:1（mL/g）、提取溫度為80 ℃，得率預(yù)測(cè)值為2.80%。根據(jù)實(shí)際情況將最優(yōu)處理?xiàng)l件中溶質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)由54.13%調(diào)整為54%，在此最優(yōu)條件下進(jìn)行3次水平實(shí)驗(yàn)，平均得率為2.75%±0.03%，實(shí)際結(jié)果與預(yù)測(cè)結(jié)果相對(duì)誤差為1.82%（<5%），說(shuō)明實(shí)際值與預(yù)測(cè)值之間無(wú)顯著差異。證明了該模型與實(shí)際情況擬合度高，能夠指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)。

2.3 方法可行性分析

2.3.1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一樣品野菊花干粉0.1 g，按上述最優(yōu)工藝參數(shù)進(jìn)行回流提取，提取液取6份供HPLC分析，蒙花苷得率經(jīng)計(jì)算結(jié)果為2.75%±0.03%，表明重復(fù)性較好。

2.3.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 以最優(yōu)工藝參數(shù)制作供試品溶液，置于室溫保存，分別于0、3、6、9、12 h進(jìn)樣檢測(cè)，記錄蒙花苷色譜峰峰面積，通過(guò)色譜峰面積計(jì)算各樣品間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，所得結(jié)果RSD=3.7615%（<5%），表明供試提取液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.3 加標(biāo)回收率驗(yàn)證 精密稱取0.1 g野菊花粉末置于三角燒瓶中，分別加入4、2、1 mg蒙花苷標(biāo)準(zhǔn)品。樣品在上述最優(yōu)處理參數(shù)下進(jìn)行回流提取，提取液經(jīng)HPLC分析，計(jì)算其得率及加標(biāo)回收率。結(jié)果如表4所示，不同濃度的3個(gè)水平樣品加標(biāo)回收率均達(dá)到80%以上，證明該最優(yōu)方案能夠有效地將樣品中的大部分蒙花苷提取出來(lái)，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

表 4 蒙花苷的加標(biāo)回收結(jié)果Table 4 Results of standard recoveries of buddleoside

2.4 孝感市大悟縣不同地區(qū)野菊花蒙花苷含量測(cè)定

通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)大悟縣不同區(qū)域?qū)嵉厝拥囊熬栈颖具M(jìn)行蒙花苷提取測(cè)定，具有代表性的野菊花提取液的高效液相色譜圖如圖8所示。

圖 8 蒙花苷的高效液相色譜圖Fig.8 Liquid chromatograms of buddleoside

表 5 大悟縣不同區(qū)域野菊花樣品中的蒙花苷含量結(jié)果Table 5 Content of buddleoside in C. indicum L. from different regions of Dawu County

各區(qū)域野菊花樣本中蒙花苷的提取測(cè)定結(jié)果如表5所示。由表5可知，不同區(qū)域的野菊花蒙花苷含量差異較為明顯，取樣地027、037、060、094蒙花苷含量最高，均超過(guò)了2.5%（分別為2.75%、2.54%、2.52%、2.51%），為野菊花積累蒙花苷的最優(yōu)種植區(qū)域。此外，取樣點(diǎn)015、036、038、040、041、042、049、061、067、068、069、073、111野菊花樣品蒙花苷含量均達(dá)到了2.00%以上，為較優(yōu)種植區(qū)域。

3 結(jié)論

本研究在單因素實(shí)驗(yàn)分析的基礎(chǔ)上，通過(guò)Box-Behnken設(shè)計(jì)了響應(yīng)面試驗(yàn)，建立了野菊花蒙花苷成分提取的多元回歸模型，以此確定野菊花蒙花苷最優(yōu)提取工藝條件為乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)54%、液料比150:1（mL/g）、回流溫度80 ℃、回流提取時(shí)間60 min，在此工藝條件下，野菊花蒙花苷得率為2.75%±0.03%，與模型預(yù)測(cè)最大值2.80%無(wú)顯著性差異。且模型調(diào)整決定系數(shù)R2adj=0.9592，證明此優(yōu)化方案可應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。

在加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中，3個(gè)不同濃度水平下的回收率均達(dá)到80%以上，結(jié)合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)證明了該優(yōu)化方案具有可行性。以優(yōu)化方案測(cè)定孝感市大悟縣不同地區(qū)野菊花樣品蒙花苷含量，結(jié)果顯示：027、037、060、094號(hào)取樣地蒙花苷含量最高，均達(dá)到2.5%以上，為積累蒙花苷的最優(yōu)種植區(qū)域，015、036、038、040、041、042、049、061、067、068、069、073、111號(hào)區(qū)域樣品蒙花苷含量達(dá)到了2.0%以上，為較優(yōu)種植區(qū)域。本研究成果對(duì)大悟縣種植富含蒙花苷的野菊花具有重要指導(dǎo)意義，同時(shí)為該地區(qū)野菊花生產(chǎn)加工、蒙花苷提取工業(yè)化制備提供有力參考。