付凌燕，聶姍姍，李夢瑤

（吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132000）

0 引言

胡蘆巴為豆科植物胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟種子。夏季果實成熟時采割植株，曬干，打下種子，除去雜質(zhì)。性溫，味苦，歸腎經(jīng)，具有溫腎、祛寒、止痛等功效[1]。臨床主要用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳氣，是我國傳統(tǒng)的溫腎補陽藥物。由于胡蘆巴生品質(zhì)堅硬，不易破碎。酒炙后易于粉碎，利于有效成分溶出，并且能增強溫腎作用。

1 炮制歷史沿革

1.1 古代炮制方法

胡蘆巴始載于《嘉祐本草》，別名苦豆、香草、蘆巴子，為豆科植物胡蘆巴（Trigonella Foenum-graecum Linn.）的干燥成熟種子。性溫，味苦，歸腎經(jīng)，具有溫腎、祛寒、止痛等功效，臨床主要用于腎臟虛冷，小腹冷痛，小腸疝氣，寒濕腳氣，是我國傳統(tǒng)的溫腎補陽藥物。胡蘆巴自宋代應(yīng)用于臨床至今已有近千年的歷史，具有多種不同的炮制方法。在胡蘆巴漫長的應(yīng)用過程中，有關(guān)胡蘆巴炮制的方法也得到了不斷地發(fā)展和豐富。

1.2 現(xiàn)代炮制方法

胡蘆巴現(xiàn)代多采用鹽炙法，通過對歷版《中國藥典》《全國中藥炮制規(guī)范》、各省、市等地方炮制規(guī)范收載的有關(guān)胡蘆巴的炮制方法進行歸納整理可知，胡蘆巴的炮制方法比較一致，全國各地的炮制方法主要為鹽胡蘆巴。

2 炮制工藝研究

胡蘆巴藥材現(xiàn)代的炮制方法中酒炒比較少見，《浙江省中藥炮制規(guī)范2015年版》中收載的炮制方法為“取胡蘆巴飲片，照酒炙法炒至表面深黃棕色時，取出，攤涼。用時搗碎”[2]?！陡＝ㄊ≈兴庯嬈谥埔?guī)范2012年版》中收載的炮制方法為“取凈胡蘆巴，照酒炙法炒干”[3]?！陡拭C省中藥炮制規(guī)范2009年版》中收載的炮制方法為“取凈胡蘆巴，用黃酒拌勻，稍悶潤，置鍋內(nèi)，用文火加熱，炒至表面深黃棕色，出鍋，放涼，用時搗碎”[4]?！稄V東省中藥材飲片加工炮制手冊1977年版》中收載的炮制方法為“取凈胡蘆巴，每10斤加入酒2斤，拌勻，稍悶，使吸盡酒液，蒸2 h曬干或用文火炒至身干轉(zhuǎn)黃色有香氣時取出放冷，用時打碎”[5]。上述工藝火候僅表述為文火炒干，依靠主觀判斷，人為影響因素較大，易使飲片質(zhì)量參差不齊。

2.1 評價指標的選擇

胡蘆巴原藥材標準中收載了性狀、鑒別、檢查、浸出物及含量測定項，其中含量測定項以胡蘆巴堿為測定指標?；诖耍覀冞x擇以胡蘆巴的外觀性狀、浸出物和胡蘆巴堿含量作為評價指標來篩選酒炒工藝參數(shù)，通過正交試驗來確定最佳的黃酒加入量、黃酒悶潤時間、炒制時間。

2.2 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Waters e2695，四元低壓梯度泵，自動進樣器、紫外檢測器），色譜柱：Apollo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），超聲波清洗器（JCX-400Z型，山東省濟寧市超聲電子儀器廠）。胡蘆巴堿對照品（純度78.4%，中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110883-201604 20 mg）。甲醇[色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司]，純凈水（吉林娃哈哈食品有限公司），冰醋酸（色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。CY-2型炒藥機（河北安國東方制藥機械廠）。

2.3 評價指標的測定方法

采用高效液相色譜法（《中國藥典》2015年版，四部，通則0512）測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.05%十二烷基磺酸鈉溶液-冰醋酸（20:80:0.1）為流動相；檢測波長為265 nm。理論板數(shù)按胡蘆巴堿峰計算應(yīng)不低于4000。按外標法以峰面積計算其含量（方法學(xué)考察見【含量測定】項下研究）。

2.4 炮制工藝的優(yōu)化

2.4.1 藥材凈制

根據(jù)《中國藥典》2015年版一部中胡蘆巴標準要求，該藥材凈制的方法為除去雜質(zhì)，洗凈，干燥。故藥材炒制之前需除去雜質(zhì)，取凈胡蘆巴作為酒炒原材料。

2.4.2 單因素考察

根據(jù)查閱的文獻及現(xiàn)有飲片質(zhì)量標準記載，胡蘆巴的酒炒制方法多為“加黃酒拌勻，悶透，文火加熱，炒至有香氣逸出”，故先以外觀性狀及氣味為指標，選取黃酒加入量、黃酒悶潤時間、炒制時間進行單因素考察。

2.4.2.1 黃酒加入量

選取同一批次胡蘆巴藥材5份，分別加入黃酒5%、10%、20%、30%、40%悶潤4 h，記錄胡蘆巴的外觀和氣味。結(jié)果，黃酒加入5%時不能完全將樣品潤透，黃酒加入20%時樣品已能完全潤透。

2.4.2.2 黃酒悶潤時間

選取同一批次胡蘆巴藥材5份，分別加入黃酒10%，悶潤1 h、2 h、4 h、6 h、8 h記錄胡蘆巴的外觀和氣味。結(jié)果，悶潤1 h樣品不能完全潤透，悶潤4 h樣品已能完全潤透。

2.4.2.3 炒制時間

選取同一批次胡蘆巴藥材5份，加入黃酒10%，悶潤4 h，置于適宜大小的炒鍋內(nèi)，于130 ℃溫度下，分別炒30 min、40 min、50 min、60 min、70 min，同一頻率翻炒均勻，取出后攤平，晾涼至室溫，記錄胡蘆巴的外觀和氣味。結(jié)果，在同一溫度下不同炒制時間飲片的外觀性狀及氣味有所不同，炒制30 min，基本無香味，炒制40 min，稍有香氣，炒制70 min以后，有炒糊的跡象，切開后斷面顏色加深，嘗之味苦，表明該溫度下炒制藥材明顯變糊。

2.4.3 工藝參數(shù)正交試驗考察

2.4.3.1 試驗設(shè)計

采用L9（34）正交試驗設(shè)計，用小型炒藥鍋開展酒炙胡蘆巴炮制工藝優(yōu)化研究，經(jīng)單因素考察，針對黃酒加入量、悶潤時間（h）、炒制時間（min）因素，以胡蘆巴堿的含量和浸出物為評價指標，優(yōu)選酒炙胡蘆巴的最佳炮制工藝，實驗結(jié)果如表1和表2。

表1 因素水平表

表2 正交試驗表

2.4.3.2 試驗結(jié)果分析

表2中，6號試驗含量最高，9號試驗浸出物量最高，可取用之，利用正交設(shè)計軟件進行表計算分析，分辨出主次因素，預(yù)測更好的水平組合。

通過正交表可知，各因素對試驗指標的影響主次順序：悶潤時間（h）>黃酒濃度（%）=炒制時間（min），根據(jù)方差分析數(shù)據(jù)顯示各因素對胡蘆巴堿含量無顯著影響，綜合極差和方差分析結(jié)果，以胡蘆巴堿含量為評價指標，所以優(yōu)水平組合A2B3C2即黃酒加入10%，悶潤6 h，炒制50 min。

通過正交表可知，各因素對試驗指標的影響主次順序：炒制時間（min）>黃酒濃度（%）>順悶潤時間（h），根據(jù)方差分析數(shù)據(jù)顯示各因素對胡蘆巴堿含量無顯著影響，綜合極差和方差分析結(jié)果，以浸出物為評價指標，所以優(yōu)水平組合A3B3C2即黃酒加入20%，悶潤6 h，炒制50 min。

2.4.4 最佳工藝的確定

2.4.4.1 初選最優(yōu)工藝條件

對胡蘆巴堿含量（%） A2B3C2 （胡蘆巴堿含量越高越好）。對浸出物含量（%） A3B3C2 （浸出物含量越高越好）。

2.4.4.2 綜合平衡確定最優(yōu)工藝

由于兩個指標單獨，分析出來的最優(yōu)條件不一致，所以必須根據(jù)因素對兩個指標影響的主次順序，綜合考慮確定出最優(yōu)條件。對胡蘆巴堿含量選A2為好，對浸出物量選A3為好，因為二者不一致，所以根據(jù)試驗結(jié)果確定，當取A2時胡蘆巴堿含量比選A3增加3.07%（有利），浸出物量比選A3下降1.19%（不利），當取A3時胡蘆巴堿含量比選A2下降3.17%（不利），浸出物量比選A2增加1.17%（有利）。對“有利”部分A2>A3，對“不利”部分A2

2.4.5 最佳工藝的驗證

根據(jù)確定的最佳炮制工藝，連續(xù)驗證十批，考察外觀、水分、灰分、浸出物、含量測定質(zhì)控指標。結(jié)果表明，炮制工藝穩(wěn)定，可進行下一步中試驗證。

2.5 炮制工藝驗證

將最終確定的酒炙胡蘆巴生產(chǎn)工藝在吉林市國安藥業(yè)飲片生產(chǎn)企業(yè)進行中試驗證，生產(chǎn)企業(yè)具備中藥飲片炮制工藝驗證資質(zhì)。經(jīng)驗證，本研究所確定的酒炙胡蘆巴炮制工藝重現(xiàn)性好、生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，可作為胡蘆巴藥材酒炒的合理工藝，驗證結(jié)論以及成品質(zhì)量檢驗結(jié)果見表3。

表3 企業(yè)工藝驗證結(jié)果（%）

3 結(jié)果與討論

正交試驗所用樣品為1公斤，小試所用樣品為2.5公斤，中試所用樣品為30公斤，因為中試為模擬藥廠實際生產(chǎn)情況，炮制樣品數(shù)量增加12倍，炒制時間由正交試驗的40 min增加到70 min左右，所以在進行酒炙胡蘆巴時應(yīng)以性狀顏色為主要參照指標，以炒制到深黃棕色為最佳。

定性研究不能確定炮制對胡蘆巴化學(xué)成分的研究，但是通過定量研究發(fā)現(xiàn)炮制前后胡蘆巴堿含量略有降低。

胡蘆巴的應(yīng)用已經(jīng)突破了傳統(tǒng)的應(yīng)用范圍，但是胡蘆巴飲片，尤其是胡蘆巴炮制品，缺少必要的質(zhì)量標準和量化的加工工藝，給胡蘆巴的合理應(yīng)用帶來困難。中國藥典雖然確定了胡蘆巴的質(zhì)量控制指標，但是胡蘆巴堿僅能代表水溶性成分在加工過程中受到的影響，因為胡蘆巴應(yīng)用的另一個主要方向是提取甾體皂苷元，所以在考察胡蘆巴的質(zhì)量時還應(yīng)該從脂溶性成分方面考慮，以更加合理全面的控制胡蘆巴的質(zhì)量，保證綜合利用有穩(wěn)定可靠的原料來源。