韓浩蕾，姜長(zhǎng)嶺，王 晨，劉 新，魯成銀，陳紅平,*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，浙江 杭州 310008；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京 100081；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部茶葉產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310008）

茶是世界上最受歡迎的無(wú)酒精飲料之一，茶葉具有田間生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、加工過(guò)程復(fù)雜、貯存時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，易受到農(nóng)業(yè)投入品、生物毒素、環(huán)境污染物、重金屬等有毒物質(zhì)的污染[1]，這些有害物質(zhì)已成為茶葉質(zhì)量安全潛在危害因子。茶葉中有害物質(zhì)污染途徑主要來(lái)源于種植與加工階段（圖1）。其中種植階段產(chǎn)地環(huán)境產(chǎn)生的污染物可經(jīng)大氣沉降、土壤吸收以及隨水傳播等途徑，造成茶葉（葉片、根系）被有害物質(zhì)如高氯酸鹽、多環(huán)芳烴等環(huán)境污染物[1-2]污染，產(chǎn)地和周邊環(huán)境中的農(nóng)藥殘留（甲胺磷、乙酰甲胺磷等）[3]以及工業(yè)排放、金屬礦山開(kāi)采等活動(dòng)形成的重金屬，均會(huì)在大氣、土壤、水和植物之間相互擴(kuò)散后，隨著空氣沉降、土壤吸收以及污水灌溉造成茶葉污染[4-5]。近些年環(huán)境中的植物毒素、真菌毒素等污染物及其污染茶葉途徑也廣受關(guān)注[6]。

圖1 茶葉種植加工階段有害物質(zhì)污染途徑Fig.1 Pathways of harmful substance pollution in tea planting and processing

吡咯里西啶生物堿（pyrrolizidine alkaloids，PAs）是植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要分布于遠(yuǎn)緣相關(guān)的被子植物科，涉及菊科、紫草科和豆科等13 個(gè)科，通常集中在植物的種子和開(kāi)花部位，其葉、莖和根中的含量較低。不同植物種類(lèi)中PAs的質(zhì)量分?jǐn)?shù)相差較大，從痕量到高達(dá)19%（以干質(zhì)量計(jì)）[7-8]。PAs具有化學(xué)防衛(wèi)的功能，在一定程度上可抵御草食動(dòng)物、昆蟲(chóng)和植物病原對(duì)植物的侵害。一些含PAs的植物常被用作地被植物、土壤改良劑（豆科）、觀賞植物和動(dòng)物飼料。目前已經(jīng)在超過(guò)6 000 種植物（可能占所有開(kāi)花植物的3%～5%）中鑒定出660多種PAs及其氮氧化物（pyrrolizidine alkaloidN-oxides，PANOs）[9-10]。

PAs是一類(lèi)植物毒素，茶葉本不含有PAs，因茶園存在含PAs的植物（如一點(diǎn)紅、千里光等），其種植階段可能通過(guò)土壤、水等間接污染茶葉。前期研究證明茶園中的雜草——千里光屬植物根部PAs會(huì)污染土壤，博士茶根系會(huì)吸收PAs而受到污染[6,11]；茶葉采摘和加工階段可能混入含PAs的植物而形成污染。目前，在奧地利、德國(guó)、比利時(shí)等許多歐洲國(guó)家已經(jīng)對(duì)茶葉中PAs或PANOs的污染起源與途徑進(jìn)行了大量的研究，建立了較為完善的茶葉檢測(cè)與監(jiān)督體系[7]，同時(shí)將茶葉PAs含量列為出口到其他歐盟國(guó)家的重點(diǎn)關(guān)注參數(shù)，PAs成為近年來(lái)我國(guó)茶葉出口受陰的主要污染物之一。然而，我國(guó)目前針對(duì)茶葉中PAs的研究相對(duì)較少，缺乏茶葉中PAs污染水平基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，無(wú)法獲得茶葉中PAs污染來(lái)源，導(dǎo)致我國(guó)對(duì)茶葉PAs管控處于極度被動(dòng)狀態(tài)。

1 PAs的化學(xué)結(jié)構(gòu)與毒性

PAs化學(xué)結(jié)構(gòu)一般由千里光次堿和千里光次酸兩個(gè)基本部分組成（圖2）。千里光次堿的吡咯環(huán)結(jié)構(gòu)為PAs的母核，由兩個(gè)稠合的含氮五元環(huán)狀結(jié)構(gòu)組成，該部分可被雜酸酯化形成單酯、開(kāi)鏈雙酯或大環(huán)雙酯，當(dāng)C2、C6或C7上帶有一個(gè)或兩個(gè)羥基時(shí)，可導(dǎo)致其形成立體異構(gòu)體[9]。當(dāng)千里光次堿中N被氧化時(shí)，可形成相應(yīng)PANOs，與PAs同時(shí)存在于植物體內(nèi)[8,12]。PAs在植物體內(nèi)合成的相關(guān)研究有限，到目前為止，僅一種與PAs生物合成有關(guān)的酶被表征，即高精胺合酶，其參與催化PAs生物合成的第一步[13]，隨后經(jīng)過(guò)氧化、環(huán)化、還原、?；纫幌盗蟹磻?yīng)，先生成初級(jí)產(chǎn)物PANOs，繼而合成相應(yīng)PAs。圖3為千里光寧堿的生物合成過(guò)程[8,13]。

圖2 不同PAs及吡咯代謝物化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.2 Chemical structures of PAs and pyrrole metabolites

圖3 PAs合成途徑[8]Fig.3 PAs synthesis pathway[8]

根據(jù)千里光次堿在1、2位碳原子之間形成的鍵是否飽和，可將PAs分為飽和PAs和不飽和PAs兩大類(lèi)，飽和PAs一般無(wú)毒或毒性弱，而不飽和型PAs因其毒性和致病性成為關(guān)注熱點(diǎn)[9-11]。不飽和PAs被CYP 3A氧化成烯丙醇酯結(jié)構(gòu)的吡咯代謝物（圖4）后會(huì)引起肝毒害作用[8,14]。20世紀(jì)30年代，PAs引發(fā)人類(lèi)肝中毒的暴發(fā)性案例導(dǎo)致PAs的肝毒性受到世界各地的廣泛關(guān)注。PAs除具有肝毒性外，還有研究表明部分PAs具有肺毒性、致癌性、遺傳毒性及致畸胎作用等多種毒性[15-17]。除此之外，最新研究表明PANOs亦可產(chǎn)生毒性[18]。人體主要通過(guò)攝入含PAs的食品而引起健康風(fēng)險(xiǎn)[19]。因此，研究食品中的PAs類(lèi)物質(zhì)的污染水平及來(lái)源，并對(duì)其進(jìn)行合理監(jiān)測(cè)以及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估對(duì)于保障食品安全具有極其重要的作用。

圖4 PAs的代謝活化[14]Fig.4 Metabolic activation of PAs[14]

2 茶葉中的PAs檢測(cè)技術(shù)

復(fù)雜基質(zhì)中的PAs檢測(cè)技術(shù)從常量定性分析向痕量殘留定量分析的方向發(fā)展，植物源樣品中PAs檢測(cè)經(jīng)歷了分光光度法[20]、核磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR）法[21]、免疫學(xué)方法[22]等定性定量分析方法，逐漸發(fā)展到高靈敏色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（包括液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）與氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS））精準(zhǔn)分析技術(shù)[10]。分光光度法中的比色檢測(cè)僅能針對(duì)PAs進(jìn)行總量分析，無(wú)法量化單一PA，且對(duì)復(fù)雜基質(zhì)中PAs的痕量分析缺乏敏感性和選擇性[9-10,23]。NMR法主要用于PAs的結(jié)構(gòu)鑒定，具有快速、精密度好的特點(diǎn)，但NMR靈敏度較差，難以進(jìn)行痕量分析[10,21]。免疫學(xué)檢測(cè)過(guò)程中，PAs通過(guò)共價(jià)結(jié)合與蛋白質(zhì)快速反應(yīng)，形成吡咯-蛋白質(zhì)加合物，可以快速、靈敏地檢測(cè)復(fù)雜基質(zhì)中的分析物，更多用于PAs毒理方面的研究[22]，但其缺點(diǎn)是僅對(duì)與千里次光堿結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的PAs（如十二元大環(huán)酯，但沒(méi)有烯酮、開(kāi)鏈酯或十一元或十三元大環(huán)PAs）敏感，難以適用于所有PAs檢測(cè)，且容易受到復(fù)雜基質(zhì)干擾[7,10]。目前，色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在PAs分析中選擇性好、靈敏度高，且適用于同時(shí)檢測(cè)多種PAs，因而廣泛用于農(nóng)產(chǎn)品或食品中PAs的定性定量分析[7,9]。表1總結(jié)了近年來(lái)色譜-質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)在茶葉中PAs檢測(cè)的應(yīng)用，可以看出，在分析手段方面，相較于GC-MS/MS，LC-MS/MS依舊是目前PAs檢測(cè)方法中最主流的檢測(cè)手段；在前處理技術(shù)上，固相萃?。╯olid phase extraction，SPE）是最常用的凈化處理方式。

表1 茶葉PAs檢測(cè)前處理方法及檢測(cè)技術(shù)Table 1 Pretreatment methods and analytical techniques for the detection of PAs in tea samples

2.1 前處理技術(shù)

PAs是含有特征性堿性氮的還原性生物堿，通常使用半極性或極性有機(jī)溶劑或在酸化水條件下萃取PA，其氧化形式（PANOs）屬于極性分子，容易被極性溶劑（例如甲醇）或稀酸溶液萃取[30]。茶葉中PA前處理技術(shù)主要包括液液萃取法（liquid-liquid extraction，LLE）、SPE以及SLE（表1），也可開(kāi)發(fā)常用前處理方法如QuEChERS（quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe）法以及新型前處理方法如分散液-液微萃?。╠ispersive liquid-liquid microextraction，DLLME）法等對(duì)茶葉進(jìn)行提取及凈化。

2.1.1 液液萃取

LLE是一種傳統(tǒng)分離PAs的方法，其基于相似相溶原理，根據(jù)目標(biāo)分析物在液相之間的溶解度差異進(jìn)行分離[31]。PAs分離過(guò)程首先將提取液酸化，生物堿將以離子的形式存在于水相中，為除去葉綠素和其他弱極性物質(zhì)，用乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑萃取，再將水層堿化，釋放生物堿，再用相同或相似的有機(jī)溶劑（氯仿、二氯甲烷）萃取達(dá)到分離純化的目的[23]。但LLE操作過(guò)程繁瑣，不能同時(shí)分離純化PAs及PANOs，且因極易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，PAs損失較多，不符合對(duì)PAs進(jìn)行痕量分析的要求。該方法目前已經(jīng)使用極少，逐漸被SPE所取代[23,32]。

2.1.2 固相萃取

SPE是被廣泛用于提取包括農(nóng)藥化合物在內(nèi)的污染物的前處理方法。SPE基于吸附劑與分析物之間的相互作用將分析物吸附到固體吸附劑上，在去除雜質(zhì)的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)樣品的富集凈化，具有溶劑用量少、高效、快速的特點(diǎn)，是目前使用最廣泛的純化PAs的方法。其純化步驟通常為首先活化SPE柱，上樣后分別采用甲醇和去離子水淋洗，最后利用堿性溶液（如含有氨水的甲醇溶液）進(jìn)行洗脫。常用的SPE柱有C8柱、C18柱、陽(yáng)離子交換色譜柱（solid phase extraction column，SCX），其中SCX-SPE柱的使用可以有效去除弱極性與離子型極性干擾物質(zhì)，同時(shí)滿足PAs和PANOs回收率要求[7,32]。Kaltner等[24]利用SPE技術(shù)建立了一種定性定量茶葉中4 種PAs/PANOs的方法，比較了6 種不同型號(hào)SPE柱（Bekolut SCX、Discovery DSC-18、Chromabond SA、Strata-X-C、Bond Elut SCX、Bond Elut Plexa PCX）的凈化效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bond Elut Plexa PCX柱效果最佳，對(duì)茶葉中36 種PAs的回收率達(dá)到60%～120%。

Chung等[27]對(duì)食品（包括谷類(lèi)食品、乳制品、肉、蛋、蜂蜜、茶浸液和香料）中的15 種PAs和13 種PANOs進(jìn)行檢測(cè)。前處理方法采用C18柱SPE凈化、水/乙腈淋洗去除復(fù)雜基質(zhì)后，用甲醇洗脫大部分PAs/PANOs，奧索千里光裂堿型PAs因需要在堿性介質(zhì)中才能完全洗脫，用體積分?jǐn)?shù)2.5%氫氧化銨-甲醇溶液洗脫，最后混合洗脫液提取全部目標(biāo)PAs/PANOs。所有食品PAs和PANOs的回收率為50%～120%，茶浸提液中回收率達(dá)77%～116%。該方法成功地將SPE技術(shù)應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)中的多種PAs痕量檢測(cè)，為建立食品中多種PAs痕量分析方法提供了重要支撐。

SPE方法作為使用最普遍的前處理技術(shù)，可在其基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化凈化過(guò)程中影響清潔效果的參數(shù)，如溶劑組成、吸附劑、流量等，或是以串聯(lián)SPE柱的方式來(lái)提高凈化效果。

2.1.3 QuEChERS法

QuEChERS法是2003年美國(guó)Anastassiades等[33]提出的一種農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)殘檢測(cè)的前處理方法，發(fā)展迅速，已成為目前色譜及色譜質(zhì)譜分析前處理應(yīng)用最廣的前處理技術(shù)之一。QuEChERS法將提取與純化同步進(jìn)行，其核心是采用分散固相吸附劑去除干擾物質(zhì)，具有操作簡(jiǎn)單、快速、環(huán)境友好、兼容性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，且適用于高通量檢測(cè)與樣品前處理，因而在對(duì)植物源農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留、PAs等痕量分析中得到廣泛應(yīng)用[31]。

Martinello等[34]采用QuEChERS方法建立了一種簡(jiǎn)便快速定量檢測(cè)蜂蜜中PAs的方法。該QuEChERS方法采用10 mL乙腈和QuEChERS EN方法（檸檬酸鈉1 g、檸檬酸氫二鈉倍半水合物0.5 g、硫酸鎂4 g和氯化鈉1 g）進(jìn)行提取凈化，再結(jié)合適量的N-丙基乙二胺鍵合硅交（primary secondary amine，PSA）、硫酸鎂和碳進(jìn)行吸附凈化，離心過(guò)濾后結(jié)合UPLC-MS/MS檢測(cè)，結(jié)果的檢出限為0.21～1.39 mg/kg，回收率為73%～109%。Kaczyński等[35]采用一種超聲輔助QuEChERS方法提取和純化草藥中PAs，該研究表明使用PSA、C18、石墨化炭黑和MgSO4吸附劑會(huì)降低PAs回收率，可能是吸附了具有弱酸性的PAs所致，而將石墨烯用作吸附劑時(shí)，可以獲得好的凈化效果，且不會(huì)影響其回收率。

茶葉作為復(fù)雜的基質(zhì)，目前鮮見(jiàn)其相關(guān)的QuEChERS前處理方法，但QuEChERS作為使用廣泛的前處理技術(shù)，靈活性高、適用性強(qiáng)，可通過(guò)對(duì)不同吸附劑的組合、提取溶劑的選擇等進(jìn)行優(yōu)化[31,36]，形成高效的改進(jìn)QuEChERS方法，以對(duì)茶葉中PAs進(jìn)行檢測(cè)。

2.1.4 其他方法

基于LLE和SPE的新型技術(shù)如DLLME、SLE被應(yīng)用到PAs分析前處理中。DLLME是一種功能強(qiáng)大的預(yù)濃縮技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、成本低、萃取時(shí)間短、富集因子高、有機(jī)溶劑消耗適中等眾多優(yōu)點(diǎn)[37]。Celano等[38]利用DLLME結(jié)合UPLC-MS/MS檢測(cè)蜂蜜中PAs，相比于應(yīng)用SPE和QuEChERS，提高了PAs的富集效果；再與UPLC-MS/MS結(jié)合，得到了更低的檢出限（0.01～0.02 μg/kg），回收率為71%～102%。DLLME具有綠色環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)，且可通過(guò)結(jié)合其他技術(shù)進(jìn)一步提高方法的準(zhǔn)確度。因此，該技術(shù)可被逐漸應(yīng)用到茶葉、草藥等復(fù)雜基質(zhì)多種PAs痕量分析中。

SLE是對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行固相表面支撐的LLE，相對(duì)于SPE，有不需要進(jìn)行調(diào)節(jié)、平衡或者沖洗SPE柱等優(yōu)勢(shì)，可縮短處理時(shí)間。Mathon等[25]使用SLE結(jié)合HPLC-MS/MS檢測(cè)茶葉和草藥茶中的PAs和PANOs，得到的定量限為0.1～0.5 μg/kg，回收率為91%～114%。該方法雖然成功應(yīng)用于茶葉和草藥茶中PAs和PANOs的檢測(cè)，但這種方法不可直接用于不可電離的PAs如千里光寧堿氮氧化物，因此對(duì)于同時(shí)檢測(cè)多種PAs方法的建立具有一定局限性。

隨著前處理技術(shù)的不斷發(fā)展，目前一些新型前處理技術(shù)不斷應(yīng)用于生物堿的檢測(cè)分析[32]，如固相微萃取[39]、分子印跡法[40]等。新型前處理技術(shù)具有去除干擾能力強(qiáng)、靈敏度高與環(huán)保等特點(diǎn)，有望應(yīng)用于茶葉等復(fù)雜基質(zhì)中PAs的分離純化，提高檢測(cè)方法的抗干擾能力和靈敏度，且新型的前處理技術(shù)未來(lái)將可能成為多種PAs痕量分析的主要趨勢(shì)。

2.2 PAs分析技術(shù)

2.2.1 氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

GC-MS分析PAs的方法最早于20世紀(jì)90年代開(kāi)發(fā)并應(yīng)用于天然來(lái)源物質(zhì)（植物和昆蟲(chóng)）的PAs檢測(cè)[41]。游離PAs通過(guò)GC進(jìn)行分離，并使用不同的固定相根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行鑒定，這種方法適用于除奧索千里光裂堿型以外的大多數(shù)PAs。由于PANOs在GC揮發(fā)溫度下不易揮發(fā)，不適合用此方法鑒定，因此可先通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)化如使用Zn+/H+將PANOs還原為游離PAs進(jìn)行檢測(cè)[9-10,30,42]。GC-MS通常用電子轟擊電離（electron ionization，EI），PAs經(jīng)EI源轟擊后產(chǎn)生碎片離子，通過(guò)選擇離子監(jiān)測(cè)（selected ion monitoring，SIM）和全掃描模式，定性定量分析復(fù)雜基質(zhì)中的PAs[41]。由于多羥基PAs在GC條件下難揮發(fā)，不能直接采用GC和GC-MS進(jìn)行分析，因此需采用衍生化的方法將多羥基PAs衍生產(chǎn)生揮發(fā)性產(chǎn)物，通過(guò)PAs與衍生物之間的量化關(guān)系定量分析PAs。多羥基PAs常用衍生試劑是鄰二醇的硼酸衍生物或三甲基硅醚或二者的組合[9,42-43]。

Kempf等[42]提出一種采用GC-MS法檢測(cè)蜂蜜基質(zhì)大多數(shù)1,2-不飽和PAs的方法。該方法通過(guò)酸性液體萃取，用鋅粉將PANOs還原為游離PAs，經(jīng)過(guò)SPE凈化后，使用LiAlH4將1,2-不飽和PAs還原以產(chǎn)生共同的骨架結(jié)構(gòu)（千里次光堿結(jié)構(gòu)），再用N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺（N-methyl-N-(trimethylsilyl) trifluoroacetamide，MSTFA）進(jìn)行衍生化反應(yīng)（圖5），最后通過(guò)GC-MS在SIM模式下分析所得的衍生物。這種方法通過(guò)還原和衍生化將所有不飽和PAs轉(zhuǎn)化為同一種類(lèi)型化合物（倒千里光裂解型），結(jié)果用單一的總和參數(shù)表示，結(jié)果的定量限為0.01 mg/L。該方法后來(lái)也同樣適用于許多基質(zhì)，如蜂蜜、花粉和植物等[10,44]。Kowalczyk等[45]基于上述前處理技術(shù)使用七氟丁酸酐作為衍生化試劑，結(jié)合GC-MS法檢測(cè)蜂蜜中1,2-不飽和PAs含量，結(jié)果回收率為73.1%～93.6%，定量限為1 μg/kg。

圖5 千里光裂堿還原及衍生化反應(yīng)[42]Fig.5 Reduction and derivatization of senecionine[42]

衍生化過(guò)程用于GC-MS法分析PAs雖有提高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，但過(guò)程繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)；且GC-MS法分析PAs存在穩(wěn)定性差、檢出限高等缺陷，目前PAs分析較少使用GC及GC-MS，LC及LC-MS是PAs的主要分析手段（表1）。

2.2.2 液相色譜、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜和液相色譜-高分辨質(zhì)譜

LC與LC-MS方法不僅可以同時(shí)檢測(cè)PAs和PANOs，且具有靈敏度高、檢測(cè)限低、適用范圍廣、重復(fù)性好、操作方便、前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，是目前使用最廣泛的方法[30,44]。游離堿PAs包括中等極性與極性化合物，而PANOs為極性化合物，因此LC柱固定相應(yīng)選擇極性較小的鍵合固定相，如C18、C8反相色譜柱；流動(dòng)相系統(tǒng)常選用甲醇/水系統(tǒng)和乙腈/水系統(tǒng)，并使用酸或堿作為水性洗脫液的改性劑來(lái)提高分離度[7,9]。PAs因存在多個(gè)立體異構(gòu)體（如印美定/石松胺）導(dǎo)致色譜峰分離度較差，可選用分離度更高的色譜柱改善，如HPLC色譜柱、UPLC色譜柱[46]。

LC-MS/MS中電離源的電離方式通常采用ESI或大氣壓化學(xué)電離（atmospheric pressure chemical ion source，APCI）兩種技術(shù)[30]。其中ESI應(yīng)用更為廣泛，PAs和PANOs在ESI作用下形成分子離子峰[M+H]+；APCI對(duì)游離PAs分析雖有良好的穩(wěn)定性，但對(duì)PANOs的靈敏度低[7,10,30]。樣品經(jīng)電噴霧電離后，進(jìn)入MS檢測(cè)，離子阱或三重四極桿已廣泛應(yīng)用到其MS的分析中，通過(guò)分析在離子源中形成的加合離子碰撞誘導(dǎo)解離片段來(lái)開(kāi)發(fā)PAs特定的MS方法，例如選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）或前體離子掃描等[9,10,47]。

Yoon等[48]通過(guò)LC-ESI-MS/MS結(jié)合冷凍脂質(zhì)沉淀和SCX-SPE測(cè)定高脂食品中的9 種有毒PAs。該研究基于PAs的[M+H]+的MS/MS碎片化路徑，在MRM模式下選擇PAs的質(zhì)子化分子作為前體離子，裂解后豐度最高或第二高的離子作為產(chǎn)物離子，以對(duì)基質(zhì)中的PAs進(jìn)行定性和精確定量。圖6為部分PAs的[M+H]+離子的MS/MS碎裂途徑。此分析方法檢出限達(dá)0.06～0.60 ng/mL，分析物的平均回收率在低質(zhì)量濃度（10 ng/mL）下為81.59%～104.92%，在高質(zhì)量濃度（100 ng/mL）下為82.06%～105.41%。使用LC-MS/MS MRM模式對(duì)PAs進(jìn)行定性及痕量分析，可以在復(fù)雜基質(zhì)中顯著提高PAs的檢測(cè)靈敏度、精密度、選擇性及準(zhǔn)確性。目前LC-MS應(yīng)用廣泛，也是痕量分析茶葉中PAs最普遍的技術(shù)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

圖6 部分PAs [M＋H]＋離子MS/MS裂解途徑[48]Fig.6 Partial PAs [M + H]+ MS/MS fragmentation pathway[48]

LC和LC-MS/MS具有許多優(yōu)點(diǎn)，但也有局限。研究中多數(shù)方法都使用目標(biāo)MS/MS設(shè)置，會(huì)遺漏相關(guān)的PAs；市場(chǎng)上用于準(zhǔn)確定量（認(rèn)證的）且可以商購(gòu)的參考標(biāo)準(zhǔn)品PAs大約只有50 種，可用的PANOs標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量甚至更少，同位素標(biāo)記的化合物也無(wú)法商購(gòu)，基于無(wú)相應(yīng)的參考標(biāo)準(zhǔn)，研究中只能在大的不確定性下獲得定量結(jié)果。在此情況下，使用液相色譜與高分辨質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)（liquid chromatography-high resolution mass spectrometry，LC-HRMS）對(duì)PAs相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)篩選（“非目標(biāo)”篩選）具有重大意義[7,9-10]。

在LC-MS聯(lián)用的快速發(fā)展中，HRMS已經(jīng)應(yīng)用到MS中形成新的檢測(cè)方法。如液相色譜-四極桿-軌道阱質(zhì)譜（liquid chromatography-Q-Exactive Orbitrap mass spectrometry，LC-Q Exactive-MS）[49]、超高效液相色譜-電噴霧電離-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（ultra high-performance liquid chromatography-quadrupole/time-of-flight mass spectrometry，UPLC-ESI-Q-TOF-MS）[50]、親水液相色譜-電噴霧電離-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（hydrophilic interaction liquid chromatography quadrupole/time-of-flight mass spectrometry，HILIC/ESI-Q-TOF-MS）[51]、液相色譜多模式化-飛行時(shí)間質(zhì)譜（liquid chromatographymulti mode ionization-quadrupole/time-of-flight mass spectrometry，LC-MMI-TOF-MS）等[52]，這些工具都具有高分辨率、高精度、高質(zhì)量準(zhǔn)確度及極高的靈敏度的優(yōu)勢(shì)，可以基于LC-HRMS的方法來(lái)分析沒(méi)有參考標(biāo)準(zhǔn)但已知結(jié)構(gòu)的PAs[9]。Q-TOF-MS是目前使用普遍的高分辨質(zhì)譜，可通過(guò)建立每種PAs的碎裂過(guò)程來(lái)表征痕量化合物[36]。Jeong等[50]開(kāi)發(fā)并驗(yàn)證了一種使用UPLC-ESI-QTOF-MS快速準(zhǔn)確測(cè)定植物樣本中9 種PAs的方法，并證明UPLC-ESI-Q-TOF-MS可提供準(zhǔn)確的前體和碎片離子質(zhì)量信息并同時(shí)定量，檢出限達(dá)0.4～2.0 ng/mL，定量限為0.6～6.0 ng/mL，此外還表征了70 種PAs及PANOs的前體離子及其生成的特征性碎片離子。Martinello等[49]研究發(fā)現(xiàn)混合四極桿軌道阱高分辨質(zhì)譜結(jié)合了四極桿質(zhì)量分析器對(duì)前體離子選擇的高性能和靜電場(chǎng)軌道離子阱檢測(cè)的高分辨率，與Q-TOF-MS和TOF-MS相比可實(shí)現(xiàn)更高的分辨率。

HRMS的應(yīng)用作為篩選方法有巨大優(yōu)勢(shì)，與傳統(tǒng)的MS/MS相比，HRMS降低了對(duì)色譜分離的要求，可實(shí)現(xiàn)高通量分析[9]；LC與HRMS聯(lián)用可全面獲取樣品中PAs的精確分子質(zhì)量和碎片離子信息，區(qū)分同分異構(gòu)體，鑒定未知物[53]，是對(duì)多種PAs痕量分析的有效檢測(cè)手段[9,36]。

3 茶葉中PAs的污染水平

目前茶葉中的PAs檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)相對(duì)成熟，針對(duì)茶葉中PAs造成的食品安全質(zhì)量問(wèn)題與健康風(fēng)險(xiǎn)，許多國(guó)家對(duì)市場(chǎng)中的不同茶葉開(kāi)展了PAs污染水平監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究，歐洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）調(diào)查結(jié)果表明，（草藥）茶等物質(zhì)是人體暴露PAs/PANOs的重要來(lái)源之一[54]。表2列舉了近年來(lái)不同國(guó)家茶葉中PAs的污染水平。

表2 不同國(guó)家茶葉中PAs水平Table 2 PAs contents in tea from different countries

3.1 不同國(guó)家茶葉PAs污染水平的差異

目前PAs污染茶葉已成為全球性問(wèn)題[11]，歐美國(guó)家尤其是德國(guó)已重點(diǎn)監(jiān)測(cè)了花草茶中PAs污染水平。與其他國(guó)家相比，德國(guó)近幾年市售花草茶中檢出PAs含量較低。Kaltner等[24]在德國(guó)檢測(cè)市售茶中44 種PAs/PANOs化合物的含量，分別檢查了3 個(gè)品牌6 種花草茶（薄荷茶、綠茶、紅茶、茴香茶、甘菊茶和博士茶）的PAs含量，18 個(gè)樣品中PAs的含量范圍為0.1～47.9 μg/kg。德國(guó)對(duì)食品中PAs有嚴(yán)格的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制策略，自1992年以來(lái)，含PA的植物藥物已受到《聯(lián)邦制藥條例》的管制，近些年來(lái)為加強(qiáng)食品中PAs污染的控制，德國(guó)聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究所（Bundesinstitut für Risikobewertung，BfR）已使用幾種消費(fèi)情景對(duì)兒童和成人食用（草本）茶中的PAs進(jìn)行了初步風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期食用某些類(lèi)型的（草藥）茶浸液會(huì)增加健康風(fēng)險(xiǎn)，建議消費(fèi)者對(duì)來(lái)自各種食品的PAs攝入量需保持低水平[58]。Mathon等[25]檢測(cè)瑞士市場(chǎng)花草茶PAs含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)PAs整體含量相對(duì)較低，其中茴香茶、紅茶、綠茶中PAs含量低于方法檢出限，但據(jù)某些樣品檢測(cè)結(jié)果推測(cè)人類(lèi)飲食后會(huì)超過(guò)BfR和英國(guó)毒性委員會(huì)建議的最大每日攝入量（0.007 μg/kg），長(zhǎng)期飲用亦會(huì)造成健康風(fēng)險(xiǎn)。比利時(shí)、以色列、愛(ài)爾蘭等其他國(guó)家針對(duì)市售花草茶中的PAs污染水平監(jiān)測(cè)中，（草藥）茶中含有類(lèi)型廣泛的PAs/PANOs，且某些PAs含量較高，存在嚴(yán)重質(zhì)量安全隱患。我國(guó)目前對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中PA污染與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估主要集中于含PAs的植物和蜂蜜，對(duì)其他農(nóng)產(chǎn)品研究甚少，缺乏系統(tǒng)性風(fēng)險(xiǎn)排查以及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究，最大殘留限量等安全評(píng)價(jià)指標(biāo)也因此處于缺失狀態(tài)。

3.2 茶葉中的PAs種類(lèi)

茶葉中的PAs/PANOs主要包括千里光寧堿型、石松胺型、天芥菜堿型、野百合堿型以及奧索千里光裂堿型5 種類(lèi)型，其中千里光寧堿型PAs是花草茶污染中最主要的化合物，占茶葉中PAs總含量77%以上；石松胺型、天芥菜堿型PAs分別約占總含量的14%和8%[10,29]。此外各類(lèi)茶葉中普遍發(fā)現(xiàn)有千里光寧堿、千里光寧堿氮氧化物、倒千里光堿氮氧化物、印美定、印美定氮氧化物、石松胺、千里光菲靈堿、千里光菲靈堿氮氧化物8 種污染物[54]。Mulder等[57]研究表明千里光寧堿氮氧化物是茶葉中最主要PA，含量范圍約為60～200 μg/kg，約占茶葉中PA總含量的50%。

3.3 不同茶葉中的PAs種類(lèi)及污染水平

不同茶葉類(lèi)其PAs組成不同。EFSA科學(xué)報(bào)告評(píng)估表明，在茶浸出液樣本中，綠茶和紅茶均有4 種主要PAs且含量分布均勻，綠茶中主要PAs類(lèi)型包括千里寧光堿氮氧化物（19%）、倒千里光堿氮氧化物（18%）、印美定（16%）和石松胺（16%）；紅茶中PAs主要由印美定氮氧化物（31%）、印美定（20%）、石松胺（20%）和倒千里光堿-氮氧化物（15%）組成；洋甘菊茶中千里光寧堿氮氧化物、印美定為主要檢出PAs，分別占28%和22%；博士茶中主要有3 類(lèi)檢出PAs，其中千里光寧堿氮氧化物為最主要PAs，約占總PAs含量57%，倒千里光堿氮氧化物以及千里光寧堿分別占19%和16%[54]。

不同茶類(lèi)PAs污染程度也不同?？傮w來(lái)看，博士茶中PAs污染最為嚴(yán)重，其次是花草茶和紅茶，綠茶以及其他茶葉中含量相對(duì)較低（表2）。Bodi等[59]分析了德國(guó)市場(chǎng)上6 個(gè)茶類(lèi)總共274 種干茶樣品（包括紅茶、綠茶、博士茶、薄荷、甘菊和混合茶）中PAs含量，其中博士茶PAs污染最為嚴(yán)重，平均含量為1 856.4 μg/kg，最大含量高達(dá)5 647.2 μg/kg。博士茶污染源被鑒定為可能是茶園里的雜草PA植物千里光，van Wyk等[6]發(fā)現(xiàn)在無(wú)雜草場(chǎng)所收集的博士茶中均未檢出PAs，在富含雜草千里光的場(chǎng)所中博士茶受到嚴(yán)重污染且其含有與千里光相同類(lèi)型和比例的Pas。研究證實(shí)了PAs主要通過(guò)污染土壤而間接污染博士茶[6,57]。歐洲花草茶污染水平監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，甘菊茶和蜂蜜茶中PAs含量較高且PA類(lèi)型分布均勻[26,56]，愛(ài)爾蘭一項(xiàng)調(diào)查檢出甘菊蜂蜜茶中PAs總量平均值可達(dá)245 μg/kg[26]，以色列花草茶監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)洋甘菊茶中PAs污染量高達(dá)564 μg/kg[56]，究其原因可能是一些花草茶配料、蜜源植物（如向日葵、紫云英、苜蓿、苕子）是典型的含PAs植物，則含有PAs植物和蜂蜜的花草茶易受到污染[12]。在各項(xiàng)監(jiān)測(cè)中茴香茶、綠茶、紅茶中PAs檢出含量較低（表2），但紅茶中PAs含量普遍高于綠茶[25,56]，EFSA在2016年的監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)紅茶中PAs濃度為綠茶中的2 倍[60]；黃茶、烏龍茶、普洱茶等中的PAs含量低甚至不超過(guò)方法檢出限[26]，推測(cè)不同茶類(lèi)間PAs種類(lèi)及污染水平差異可能與其茶葉采摘、加工方式有關(guān)。

3.4 茶葉與其他食品或農(nóng)產(chǎn)品中PAs差異

目前，PAs在蜂蜜、茶葉、谷物、牛奶、雞蛋、肉類(lèi)以及飼料等多種食品和農(nóng)產(chǎn)品中均能檢出。蜂蜜及其衍生產(chǎn)品是研究最廣泛的食品，且其中PAs檢出含量高，主要原因是花粉PAs濃度與原始PAs植物組織相近[61-62]，PAs可通過(guò)花粉意外引入花蜜污染蜂蜜及其衍生產(chǎn)品[63-64]；含PA的草藥和被PA植物意外污染的草藥、谷物以及香料中PAs檢出含量也均較高[7,10]；在動(dòng)物源性食品（肉類(lèi)、雞蛋）中僅有痕量PAs在少數(shù)情況下可被檢測(cè)到[57]，其污染來(lái)源為動(dòng)物覓食的牧場(chǎng)和田地中可能存在PA植物和含PAs的飼料產(chǎn)品（如苜蓿），這部分PAs可被轉(zhuǎn)移到動(dòng)物衍生的食品中[10,54]，Mulder等[65]研究表明產(chǎn)蛋雞攝入含PAs的草藥可能將PAs轉(zhuǎn)移入雞蛋和雞肉中，導(dǎo)致其受到污染。

與其他食品和農(nóng)產(chǎn)品相比，茶葉PAs污染范圍廣、污染程度較高且及濃度變化范圍大。Mulder等[57]對(duì)歐洲6 個(gè)國(guó)家動(dòng)植物源性食品中PAs的污染水平進(jìn)行調(diào)查，有92%的（草藥）茶均含有可檢出的PAs，且含量高，平均含量可達(dá)460 μg/kg（以干基質(zhì)量計(jì)），其中大多數(shù)花草茶中檢出PAs含量高，而部分紅綠茶中檢出PAs含量低。

4 茶葉中PAs健康風(fēng)險(xiǎn)

4.1 PAs的急性毒性與慢性毒性

目前已有相關(guān)機(jī)構(gòu)評(píng)估了受PA污染食品（包括茶葉）和基于PA植物生產(chǎn)的食品補(bǔ)充劑所造成的急性毒性及慢性健康風(fēng)險(xiǎn)[54,58-59]。PAs及其氮氧化物具有肝毒性、肺毒性、遺傳毒性、生殖毒性、致癌性、致突變等一系列毒性作用[66]。

PAs可引起急性肝毒性，其癥狀是出血性壞死、肝腫大、腹水和肝功能異常，最終可能導(dǎo)致死亡[66]。目前已有兩例發(fā)生在嬰兒當(dāng)中的臨床病例可以提供可靠的短期暴露劑量效應(yīng)關(guān)系信息[67-70]，6 個(gè)月大的女?huà)朊刻鞌z入PAs大約0.8～1.7 mg/kgmb持續(xù)2 周，被診斷出肝靜脈閉塞性疾?。╤epatic veno-occlusive disease，HVOD）。HVOD是由PAs中毒引起的肝臟損傷，能導(dǎo)致肝硬化和肝功能衰竭，被認(rèn)為是PAs暴露的表現(xiàn)[66]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，一個(gè)2 個(gè)月大的男嬰每日服用PAs 3 mg/kgmb約4 d發(fā)生了致命的后果[69]。這些病例報(bào)告列出了短期（4～14 d）暴露PAs后中毒和死亡相關(guān)的最低劑量范圍，可得出結(jié)論：對(duì)于人類(lèi)，短期暴露PAs后與肝臟不良反應(yīng)相關(guān)的最低已知?jiǎng)┝繛槊刻?.8～1.7 mg/kgmb[7,54,58]。EFSA食品鏈污染物小組根據(jù)病例得出每天攝入PAs 1～3 mg/kgmb持續(xù)4 d～2 周，可產(chǎn)生急性毒性，且考慮到PAs對(duì)人的潛在毒性及其影響的嚴(yán)重性尚不確定，與上述劑量范圍相比，暴露水平在100 倍以下亦有急性/短期影響的風(fēng)險(xiǎn)[54]。

臨床實(shí)驗(yàn)中，PAs的毒性作用具有累積性[71]。亞急性或慢性低水平的PAs暴露可能導(dǎo)致肝損傷，如纖維化、結(jié)節(jié)性再生和肝硬化[66]。目前，茶葉是人體PAs暴露的主要因素之一，因此消費(fèi)者因食用茶和涼茶等高消費(fèi)量食品而頻繁或長(zhǎng)期暴露于PAs，可能對(duì)人體健康造成危害。利用Riddelliine對(duì)大鼠的致癌性實(shí)驗(yàn)得出：以10%響應(yīng)的基準(zhǔn)劑量可信下限（benchmark dose limit with a 10%，BMDL10）可作為評(píng)估長(zhǎng)期暴露于PAs的風(fēng)險(xiǎn)參考點(diǎn)[60,66]。2017年EFSA重新采用暴露限值（margin of exposure，MOE）方法[54]結(jié)合基于Riddelliine在大鼠中的致癌性實(shí)驗(yàn)[68]和之前的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果[73]得出：以BMDL10（每天食用237 μg/kgmb）作為PAs慢性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的參考點(diǎn)。

鑒于食品中PAs對(duì)人體健康的潛在危害，已有多國(guó)制定了食品中PAs最大允許含量的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或措施[10]。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）早在1989年建議PAs日攝入限制量為15 μg/kgmb[74]；BfR建議PAs每日最大攝入量為0.007 μg/kgmb[58]；歐洲藥物管理局建議PAs的成人日攝入量最高為0.35 μg/kgmb，兒童為0.007 μg/kgmb[75]；2020年，歐盟設(shè)置茶葉中21 種PAs含量限量為成人150 μg/kgmb、嬰幼兒75 μg/kgmb[76]，美國(guó)食品藥品管理局禁止含PAs的紫草科植物用于食品加工業(yè)。目前我國(guó)尚未對(duì)PAs攝入量做出明確規(guī)定與建議。

4.2 PAs理化性質(zhì)及其在茶湯中的浸出特性

茶葉中的PAs主要通過(guò)茶湯被人體吸收從而造成健康風(fēng)險(xiǎn)，因此進(jìn)行茶葉中PAs風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)應(yīng)考慮其浸出特性[77]。Picron等[29]測(cè)定植物性食品（包括茶葉）中PAs在浸泡過(guò)程中的轉(zhuǎn)移率發(fā)現(xiàn)，根據(jù)化合物的不同，在浸泡過(guò)程中只有16%～28%的PAs/PANOs污染物從干物質(zhì)轉(zhuǎn)移到了浸泡液中。PAs的結(jié)構(gòu)特性和極性不同會(huì)導(dǎo)致浸出特性差異，PAs化合物極性越大，在水中浸出率越高，如PANO極性大，有更高的浸出率；PAs化合物浸出率與水溶解度也呈正相關(guān)；但因辛醇/水分配系數(shù)低的物質(zhì)，親水性較高，推測(cè)PAs化合物辛醇/水分配系數(shù)與其浸出率呈負(fù)相關(guān)。此外，根據(jù)茶葉中污染物以及內(nèi)含物質(zhì)在沖泡過(guò)程中的浸出規(guī)律[76]推測(cè)茶葉沖泡方式（沖泡溫度、沖泡次數(shù)、沖泡時(shí)間等）也會(huì)影響內(nèi)源污染物PAs實(shí)際浸出率。

4.3 茶葉中PAs對(duì)人體的暴露水平及健康風(fēng)險(xiǎn)

EFSA對(duì)歐洲人群中PAs的膳食暴露評(píng)估，茶和草藥的攝入是造成PA暴露總量的主要因素[60]。隨著茶葉消費(fèi)量近年逐漸增長(zhǎng)，茶葉中PAs對(duì)人體的暴露水平增加。年輕人（嬰幼兒、兒童）和成年人通過(guò)消耗茶和草藥（茶）而引起的長(zhǎng)期慢性暴露量范圍分別為每天34.5～48.4 ng/kgmb和31.1～41.8 ng/kgmb，其估計(jì)值均高于其他食品，長(zhǎng)期攝入會(huì)有慢性風(fēng)險(xiǎn)；高暴露人群因消費(fèi)大量高暴露水平茶類(lèi)（如博士茶）亦會(huì)有急性毒性風(fēng)險(xiǎn)[60]。

不同茶類(lèi)健康風(fēng)險(xiǎn)不同，推測(cè)博士茶、薄荷茶、紅茶屬于健康風(fēng)險(xiǎn)較高的茶類(lèi)，因?yàn)椴┦坎韬捅『刹柙诙囗?xiàng)監(jiān)測(cè)中PAs平均含量及暴露水平均較高[57,59-60]，而紅茶不僅PAs暴露水平較高，還含有毒性較大的石松胺類(lèi)PAs和印美定類(lèi)PAs[78]。結(jié)合Chen Lu等[79]進(jìn)行的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，博士茶、薄荷茶、紅茶3 種茶MOE普遍小于10 000，認(rèn)為其均存在慢性風(fēng)險(xiǎn)。紅茶、博士茶因?qū)Τ赡耆说谋┞端礁?，推測(cè)其風(fēng)險(xiǎn)更大。除上述3 種茶類(lèi)，根據(jù)茶葉中PAs的最大檢出含量與暴露水平推測(cè)，若大量食用綠茶、混合涼茶以及甘菊茶也會(huì)對(duì)人群造成健康風(fēng)險(xiǎn)。因此，茶葉中PAs的健康風(fēng)險(xiǎn)與茶葉PAs暴露水平、PAs分布以及人類(lèi)的膳食結(jié)構(gòu)均有關(guān)，建議人們應(yīng)建立合理的飲食習(xí)慣，保持均衡和多元化，避免因偏食或過(guò)度飲食某類(lèi)茶葉而攝入過(guò)量的PAs。

5 結(jié) 語(yǔ)

PAs是一類(lèi)植物次級(jí)代謝產(chǎn)物，不飽和PAs及大部分PANOs具有多種毒性作用。茶葉基質(zhì)復(fù)雜，茶葉中PAs檢測(cè)前處理技術(shù)主要包括改良QuEChERS和SPE法，LCMS/MS是檢測(cè)PAs的主要手段。茶葉普遍受到PAs的污染，其污染水平與茶葉產(chǎn)地、種類(lèi)相關(guān)。茶葉中PAs主要包括千里光寧堿型、石松胺型、天芥菜堿型等，其中千里光寧堿氮氧化物污染最為嚴(yán)重，約占PAs總含量50%。茶葉中PAs主要通過(guò)茶湯被人體吸收，從而對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。目前，根據(jù)科學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估歐盟等國(guó)家制定茶葉中PAs最大允許含量，并將PAs作為茶葉進(jìn)口重點(diǎn)關(guān)注和檢測(cè)參數(shù)，對(duì)我國(guó)茶葉出口貿(mào)易產(chǎn)生嚴(yán)重影響。我國(guó)尚未制定茶葉中PAs檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)和最大允許含量相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)處于缺失狀態(tài)，亟待開(kāi)展茶葉中PAs風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與管控研究，確保我國(guó)茶葉質(zhì)量安全，降低PAs超標(biāo)對(duì)我國(guó)茶葉出口造成的巨大經(jīng)濟(jì)損失。