李 娟 張智超 劉洪福 申小平

1.貴陽市疾病預防控制中心皮防科，貴州貴陽 550002；2.贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院普外科，江西贛州 341000；3.貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院皮膚科，貴州貴陽 550002

皮膚鱗狀細胞癌簡稱鱗癌，是臨床上最常見的非黑色素瘤皮膚癌之一。多發(fā)生在顏面、耳部、下唇和手背等曝光部位的皮膚[1-3]。目前皮膚鱗癌治療方法有手術治療、放療、化療，但常常出現復發(fā)和耐藥情況，嚴重影響患者的身心健康。從分子角度了解皮膚鱗癌發(fā)生發(fā)展對皮膚鱗癌有效治療具有重要意義。NF-κB即增強型核因子激活B 細胞輕鏈κ，是一種控制轉錄、細胞因子產生和細胞存活的蛋白質復合物[4-5]。NF-κB 在調節(jié)機體對感染的免疫應答中起著關鍵作用[6-7]。本研究選擇貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院和贛南醫(yī)學院附屬醫(yī)院收治的50 例皮膚鱗狀細胞癌患者組織病理切片作為癌組織組，相對應癌旁組織作為癌旁組，探討NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院和贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院2018年1月—2019年12月收治的50 例皮膚鱗狀細胞癌患者組織病理切片作為癌組織組，相應癌旁組織作為癌旁組織組。50 例患者中，男28 例，女22 例；年齡24～77 歲，平均（52.34±5.24）歲。納入標準：①病理診斷為皮膚鱗狀細胞癌；②所有標本均有完整的臨床資料；③簽署知情同意書。排除標準：①合并其他惡性腫瘤患者；②肝腎功能和心肺功能嚴重異常的患者；③精神病患者；④孕婦或哺乳期婦女；⑤術前放療或化療者。本研究經醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 主要材料 NF-κB p65 鼠抗人多克隆抗體（圣克魯斯公司）；PV-9000 免疫組織化學染色試劑盒（北京中山金橋有限公司）；NF-κb p65 Rabbit polyAb（10745-1-AP，Proteintech）；辣根酶標記山羊抗兔IgG（H+L）（ZB-2301，中杉金橋）；DAB 顯色試劑盒（CW0125，CWBIO）；中性樹脂（CW0136，CWBIO）；蘇木素染色（AR1180-1，博生德生物）等。

1.2.2 免疫組織化學檢測 進行石蠟切片預處理準備（烤片、脫蠟、水化）、切片抗原修復、消除內源性過氧化物酶、非特異性封閉、免疫反應，最后進行顯色復染，先是DAB 顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度，PBS 或自來水沖洗1 min 之后蘇木精復染3 min，鹽酸酒精分化，返藍；再自來水沖洗1 min，脫水、透明、封片、鏡檢。免疫組織化學檢測流程見圖1。染色結果說明：目的蛋白棕色，細胞核藍紫色。

圖1 免疫組織化學檢測流程

1.2.3 陽性表達的測定 切片采用雙盲法，由醫(yī)院兩名有經驗的病理學專家獨立觀察。在400×高倍顯微鏡下，每個切片隨機抽取10 個視野，觀察陽性細胞百分率和細胞染色強度。

1.3 觀察指標

觀察兩組NF-κB p65 蛋白的表達差異，分析NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達與患者性別、年齡、疾病臨床分期和分化程度之間的關系。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示；計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組NF-κB p65 蛋白表達陽性率的比較

癌組織組NF-κB p65 蛋白表達的陽性率為70.00%（35/50），高于癌旁組織組的16.00%（8/50），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 患者不同性別、年齡情況下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中表達情況的比較

患者不同性別、年齡情況下的NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

表1 患者不同性別、年齡情況下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中表達情況的比較[n（%）]

2.3 患者不同疾病臨床分期和分化程度下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中表達情況的比較

Ⅲ～Ⅳ期患者的NF-κB p65 蛋白表達陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，低分化患者的NF-κB p65 蛋白表達陽性率高于高中分化患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表2）。

表2 患者不同疾病臨床分期和分化程度下NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中表達情況的比較

3 討論

皮膚鱗狀細胞癌是皮膚科的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年上升的趨勢，特別是在特殊環(huán)境或特殊職業(yè)的人群中[2]。皮膚鱗狀細胞癌發(fā)病原因尚不清楚，其發(fā)生可能與以下因素有關：①紫外線照射和日常暴露；②化學致癌物刺激；③輻射、電離輻射；④其他因素，如病毒致癌物、遺傳等。該疾病容易被患者忽視，如果不能進行有效治療并任其發(fā)展，將導致腫瘤惡化和轉移，最終危及生命[8-9]。研究發(fā)現，皮膚鱗狀細胞癌與癌基因、抑癌基因、生長因子、細胞因子和微環(huán)境等因素有關[2]。作為多種細胞因子NF-κB 在皮膚鱗狀細胞癌的發(fā)生發(fā)展中也起著重要作用，但其作用機制尚不清楚[10-11]。

NF-κB 是一種具有多向轉錄調控功能的蛋白質。NF-κB 與其他轉錄因子共同作用，形成復雜的基因調控網絡，并以這個網絡進行抗凋亡、細胞增殖和免疫激活的參與作用，這一過程使其在免疫和炎癥反應中發(fā)揮重要作用[12-14]。當NF-κB 結合位點受到免疫和其他激活因子刺激時，IκB 通過細胞膜被激活，磷酸化為IκB，然后與泛素結合[15-16]。高表達的NF-κB與鱗狀細胞癌的嚴重程度呈正相關，可作為臨床診斷的分子標記鱗狀細胞癌。在皮膚鱗狀細胞癌早期，由于NF-κB 的快速增加促進了腫瘤細胞的增殖或增強了腫瘤細胞與下游分子的競爭能力，臨床檢測的NF-κB 表達量明顯高于正常皮膚[17-18]。

本研究結果顯示，癌組織組的NF-κB p65 蛋白表達陽性率高于癌旁組織組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。患者不同性別、年齡情況下的NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Ⅲ～Ⅳ期患者的NF-κB p65 蛋白表達陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。低分化患者的NF-κB p65 蛋白表達陽性率高于高中分化患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。可見臨床分期越高，NF-κB p65 蛋白陽性率越高；分化程度越低，NF-κB p65 蛋白陽性率越高。

NF-κB 中最常見的異源二聚體由p50 和p65兩個亞基組成。癌組織組NF-κB p65 蛋白陽性表達率高于癌旁組，提示皮膚癌組織組織中NF-κB p65蛋白高表達；且臨床Ⅲ～Ⅳ期皮膚癌組織組織中NF-κB p65 陽性表達率高于Ⅰ～Ⅱ期皮膚癌組織組織，提示隨著皮膚鱗狀細胞癌臨床分期的發(fā)展，NF-κB p65 陽性表達率明顯增高。NF-κB p65 在低分化皮膚鱗狀細胞癌中的陽性表達率高于高、中分化皮膚鱗癌，說明NF-κB p65 的陽性表達隨皮膚鱗狀細胞癌分化程度的升高而降低。NF-κP65 蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中高表達，且隨著疾病的加重表達增強，與相關研究結果[19-21]類似，認為其可作為判斷病程和治療的新指標，具有重要的研究意義，值得臨床參考。

綜上所述，NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達高于在癌旁正常組織，且皮膚鱗狀細胞癌的分期越高，則NF-κB p65 蛋白表達越高；皮膚鱗狀細胞癌的分化程度越低，則NF-κB p65 蛋白表達越高。而NF-κB p65 蛋白表達和患者的年齡、性別之間無明顯的關系。