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        BMSCs通過(guò)歸巢調(diào)節(jié)哮喘大鼠Th1/ Th2細(xì)胞“漂移”①

        2021-09-25 03:19:24朱慧志徐晴雯任馮春安徽中醫(yī)藥大學(xué)研究生院合肥230031
        中國(guó)免疫學(xué)雜志 2021年16期
        關(guān)鍵詞:歸巢細(xì)胞因子氣道

        王 坤 朱慧志 楊 磊 徐晴雯 任馮春 (安徽中醫(yī)藥大學(xué)研究生院,合肥230031)

        哮喘是Th2 淋巴細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的氣道異質(zhì)性疾病,其特征是慢性氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性、黏液過(guò)度分泌和氣道壁重塑[1]。哮喘的氣道炎癥以Th2 型CD4+T 細(xì)胞占主導(dǎo)[2]。發(fā)作時(shí)控制Th2 細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子GATA 結(jié)合蛋白3(GATA-3)表達(dá)迅速上調(diào),使得Th2 相關(guān)細(xì)胞因子如白介素(IL)-4,IL-5 和IL-13 等生成增多。與此同時(shí),Th1 細(xì)胞分化功能下降,諸如IFN-γ、IL-2等Th1細(xì)胞因子生成不足,抑制IL-4、IL-10 等Th2 細(xì)胞因子基因表達(dá)的作用削弱。Th1/Th2細(xì)胞因子的比例失衡促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞活化、黏液分泌增強(qiáng)和IgE 升高,誘發(fā)支氣管收縮,氣流阻塞。由此可見(jiàn),Th1/Th2 細(xì)胞間的失衡(即Th1/Th2“漂移”)是哮喘發(fā)病的重要機(jī)制,也為哮喘的治療提供了基礎(chǔ)框架[3-4]。哮喘治療的研究主要集中于減少嚴(yán)重哮喘發(fā)作和提高生活質(zhì)量。間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)可改善包括哮喘在內(nèi)的各種慢性炎癥疾病免疫紊亂狀態(tài)。研究表明[5-6],BMSCs 具有調(diào)節(jié)宿主免疫和抑制慢性炎癥的作用。尤其是在不同類型的組織損傷和過(guò)敏性炎癥中,BMSCs 具有保護(hù)肺免受各種損傷的能力。哮喘發(fā)作時(shí),“休眠”的BMSCs 被“喚醒”,“歸巢”到損傷部位,調(diào)節(jié)Th1/Th2“漂移”,即抑制Th2 過(guò)度分泌而減少Th2 細(xì)胞因子表達(dá),從而調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境、改善氣道炎癥[7-9]。BMSCs 發(fā)揮作用的關(guān)鍵在于其歸巢能力及歸巢時(shí)間。本研究通過(guò)CFSE 熒光染色示蹤技術(shù)觀察移植后哮喘大鼠BM‐SCs 向肺組織的歸巢情況,借以研究其免疫調(diào)節(jié)作用,為BMSCs移植治療哮喘鋪墊。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD 大鼠18 只(體重180~200 g),隨機(jī)分為3 組,每組6 只:空白組,哮喘模型組(哮喘組),間充質(zhì)干細(xì)胞移植組(歸巢組)。以上大鼠均購(gòu)自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心。

        1.1.2 主要試劑及儀器 卵蛋白(ovalbumin egg,OVA)購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司;氫氧化鋁凝膠購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司;DMEM/L 培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司;胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司;胰酶消化液、青-鏈霉素溶液購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司;CD29-FITC、CD45-FITC、CD44-PE、CD11b/c-PE 單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)eBioscience 公司。IFN-γ、IL-13購(gòu)自美國(guó)R&D Systems 公司。BX51 光學(xué)顯微鏡購(gòu)自日本OLYMPUS;超聲霧化器購(gòu)自江蘇魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司;流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司。

        1.2 方法

        1.2.1 BMSCs 分離培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定 大鼠經(jīng)麻醉處死后以培養(yǎng)基沖出其股骨骨髓并重懸,接種于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。待細(xì)胞融合達(dá)80%~90% 時(shí),傳代;取第3 至5 代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。BMSCs 表面標(biāo)志物檢測(cè):取第4 代BMSCs 調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106個(gè)/ml,分別加入熒光標(biāo)記的抗體(CD29、CD44、CD45、CD11b/c)混勻,4℃避光孵育30 min,PBS 漂洗2 遍以去除未結(jié)合的抗體,后用流式細(xì)胞儀檢測(cè),同型IgG作為相應(yīng)的陰性對(duì)照。

        1.2.2 哮喘模型的制備、細(xì)胞移植 哮喘模型制備[10]:模型組及BMSCs移植組大鼠于第0天和第7天腹腔內(nèi)注射致敏液(內(nèi)含OVA 1 mg和氫氧化鋁凝膠100 mg),于第14天將致敏大鼠放置于自制的密閉有機(jī)玻璃容器內(nèi)(長(zhǎng)125 cm×寬85 cm×高80 cm),將含1%OVA 的生理鹽水混懸液用超聲霧化器以最大霧化量霧化吸入,每次霧化30 min,1 次/d,持續(xù)7 d。BMSCs 體內(nèi)移植:在二甲基亞砜(DMSO)中制備了10 mm 的熒光染料羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺(5- and 6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl es‐ter,CFSE)分子探針儲(chǔ)備溶液,并在干燥劑下保存于?20℃。采集的細(xì)胞在1%PBS 中洗滌,37℃孵育30 min 后用PBS液懸浮,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFSE標(biāo)志細(xì)胞(CFSE+cells)比例,同時(shí)1×106個(gè)/只CFSE+細(xì)胞經(jīng)尾靜脈輸注法注射到BMSCs移植組大鼠中。

        1.2.3 觀察指標(biāo)

        1.2.3.1 歸巢能力標(biāo)志物CFSE 檢測(cè) 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFSE 表達(dá)。 分別在BMSCs 移植后24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h的時(shí)間節(jié)點(diǎn)將肺組織細(xì)胞染色,用100 ml/L胎牛血清的DMEM/L培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度,以1×105個(gè)/孔接種于6孔板內(nèi),之后取3 孔用流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度,其余細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)直至所測(cè)熒光強(qiáng)度與未標(biāo)記細(xì)胞接近。此樣本需在FL1 檢測(cè)通道進(jìn)行分析,并用流式細(xì)胞儀測(cè)定激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm 時(shí)的熒光強(qiáng)度,利用對(duì)數(shù)放大器分析門內(nèi)染色細(xì)胞所占的百分比和細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度。

        1.2.3.2 肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察 光鏡下觀察肺組織蘇木精-伊紅染色病理變化。取大鼠右下肺組織,石蠟包埋,HE 染色,通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察肺病理形態(tài)學(xué)改變,并完成支氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度評(píng)分[11]:0 分:幾乎無(wú)炎癥細(xì)胞;1 分:散在少許炎癥細(xì)胞;2 分:較多分布不均的炎癥細(xì)胞但未聚集成團(tuán);3 分:大量炎癥細(xì)胞,分布較均勻但少見(jiàn)聚集成團(tuán);4 分:大量炎癥細(xì)胞聚集成團(tuán)。按炎癥浸潤(rùn)程度分別記“0、1、2、3、4分”。

        1.2.3.3 支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類測(cè)定大鼠經(jīng)腹腔注射6% 水合氯醛(0.06 ml/kg)麻醉后抽取肺泡灌洗液,后用瑞氏-吉姆薩染色法進(jìn)行染色,置光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類,包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、嗜酸性細(xì)胞(eosinophil,E)、巨噬細(xì)胞分類(macrophages,Mφ)計(jì)數(shù)。

        1.2.3.4 血清IFN-γ、IL-13檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IFN-γ、IL-13 表達(dá)。將平底96 孔聚碳酸酯板在4℃下用碳酸鹽包被緩沖液(0.1 mol/L Na2CO3、0.1 mol/L NaHCO3,pH9.6)中1∶1 稀 釋的50 ml/孔細(xì)胞培養(yǎng)上清液包被過(guò)夜。通過(guò)在包被緩沖液中連續(xù)稀釋純化的抗大鼠IFN-γ、IL-13 抗體的重組人IFN-γ、IL-13 獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。去除稀釋的上清液或標(biāo)準(zhǔn)液并在室溫下用添加有1%W/VBSA 的PBS封閉1 h后,將板與小鼠抗人IFN-γ、IL-13(PBS中2 mg/ml,50 ml/孔)在室溫下放置1 h。然后,用含有0.025%V/V Tween-20 的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)(300 ml/孔)洗滌2次,并與抗小鼠HRP 標(biāo)記的二抗(0.2 mg/ml 于PBS,50 ml/孔)在室溫下放置1 h。加入TMB 比色底物,并在5 min 后使用酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm的光密度。

        1.2.3.5 T-bet、GATA-3 蛋白檢測(cè) 采用Western blot 檢測(cè)T-bet、GATA-3 蛋白表達(dá)。具體步驟:使用裂解緩沖液(10 mol/ml Tris-HCl pH7.5,1%TritonX-100、20%甘油,1 mol/ml EDTA,50 mol/ml NaCl 和1 mol/ml PMSF)制備肺總蛋白。將90 μg 蛋白質(zhì)上樣到SDS-聚丙烯酰胺凝膠上,進(jìn)行電泳,然后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。然后將印跡的膜與在5%牛奶/TBST 中加入一抗(T-bet、GATA-3 稀釋度1∶2000)4℃孵育24 h。在TBST 中洗滌3 次10 min 后,將膜與5%牛奶/PBST 中的辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗以1:4000稀釋液孵育3 h。最后,將膜在PBST中洗滌3 次,每次10 min,然后使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(ECL)觀察顯色后膠片曝光,分析表達(dá)量。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS12.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表示為±s。用方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,組間差異比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 BMSCs 表面標(biāo)志物鑒定 BMSCs 表面CD44和CD29 表達(dá)量分別為98.3%、表達(dá)量為98.4%,呈陽(yáng)性。CD45和CD11b表達(dá)量分別為1.62%、1.14%,呈陰性。見(jiàn)圖1。

        圖1 BMSCs表面標(biāo)志物鑒定Fig.1 Identification of BMSCs surface markers

        2.2 哮喘大鼠BMSCs 歸巢能力觀察 通過(guò)BMSCs體內(nèi)移植至哮喘大鼠,流式細(xì)胞術(shù)觀察歸巢能力標(biāo)志物CFSE 發(fā)現(xiàn),BMSCs 體內(nèi)移植后CFSE 在肺組織表達(dá)逐漸升高,72 h時(shí)CFSE表達(dá)量達(dá)最高峰。后漸下降,至144 h達(dá)最低峰。見(jiàn)圖2、表1。

        表1 哮喘大鼠BMSC歸巢能力動(dòng)態(tài)觀察(±s,n=3)Tab.1 Dynamic observation of homing ability of BMSCs in asthmatic rats(±s,n=3)

        表1 哮喘大鼠BMSC歸巢能力動(dòng)態(tài)觀察(±s,n=3)Tab.1 Dynamic observation of homing ability of BMSCs in asthmatic rats(±s,n=3)

        Time 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h 144 h CFSE 4.99±1.057.18±2.0515.33±3.156.98±1.855.18±1.252.26±0.85

        圖2 哮喘大鼠CFSE表達(dá)Fig.2 CFSE expression in asthmatic rats

        2.3 BMSCs 歸巢對(duì)哮喘大鼠肺部炎癥的影響 病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),BMSCs 移植72 h 后肺組織病理形態(tài)學(xué)肺泡炎積分(4.45±1.38)較0 h(8.45±2.38)降低(P<0.01)。見(jiàn)圖3。

        圖3 肺組織病理形態(tài)學(xué)變化Fig.3 Pathological and morphological changes of lung tissue

        2.4 哮喘大鼠支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞分類及計(jì)數(shù)BMSCs移植0 h后,與空白組比較,哮喘組、歸巢組WBC、E、Mφ表達(dá)升高(P<0.05或P<0.01)。經(jīng)BMSCs移植72 h后,與哮喘組比較,歸巢組WBC、E、Mφ表達(dá)降低(P<0.05或P<0.01)。在歸巢組,與0 h相比,72 h的WBC、Mφ降低(P<0.05)。見(jiàn)圖4、表2。

        表2 支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞分類及計(jì)數(shù)比較(±s,n=6,n/ HP)Tab.2 Comparison of cell classification and count of bronchoalveolar lavage fluid(±s,n=6,n/ HP)

        表2 支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞分類及計(jì)數(shù)比較(±s,n=6,n/ HP)Tab.2 Comparison of cell classification and count of bronchoalveolar lavage fluid(±s,n=6,n/ HP)

        Note:1)P<0.05,2)P<0.01 vs blank group;3)P<0.05 vs asthma group;4)P<0.05 vs 0 h.

        Groups Blank Asthma Homing 0 h WBC 0.97±0.4311.94±7.712)8.92±3.282)E 1.03±0.163.04±0.832)3.56±0.152)Mφ 1.81±0.173.04±1.191)3.57±1.132)72 h WBC 1.00±0.7010.43±5.451)6.69±2.552)4)E 1.03±0.304.37±1.102.57±1.232)3)Mφ 1.87±0.383.83±1.252)1.91±1.012)3)4)

        圖4 瑞士-吉姆薩染色細(xì)胞分類計(jì)數(shù)(×400)Fig.4 Cell classification by Wright's staining(×400)

        2.5 血 清IFN-γ、IL-13 及Th1/Th2(IFN-γ/IL-13)表達(dá)比較 與空白組比較,哮喘組、歸巢組IFN-γ、Th1/Th2(IFN-γ/IL-13)表達(dá)降低,IL-13 表達(dá)升高(P<0.05 或P<0.01)。經(jīng)BMSCs 移植72 h 后,與哮喘組比較,歸巢組IFN-γ 表達(dá)升高,IL-13 表達(dá)降低(P<0.05或P<0.01)。且在歸巢組,與0 h比較,72 h的IFN-γ表達(dá)、Th1/Th2升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 血清IFN-γ、IL-13表達(dá)(±s,n=6,pg/ ml)Tab.3 Serum IFN-γ,IL-13 expression(±s,n=6,pg/ ml)

        表3 血清IFN-γ、IL-13表達(dá)(±s,n=6,pg/ ml)Tab.3 Serum IFN-γ,IL-13 expression(±s,n=6,pg/ ml)

        Note:1)P<0.05,2)P<0.01 vs blank group;3)P<0.01 vs asthma group;4)P<0.05 vs 0 h.

        Groups Blank Asthma Homing 0 h IFN-γ 698.72±138.21514.97±170.101)536.23±75.961)IL-1332.68±15.3154.01±10.181)59.09±11.122)Th1/ Th27.27±5.7313.12±7.171)13.39±5.831)72 h IFN-γ 665.70±115.08450.45±115.222)777.46±43.841)3)4)IL-1357.26±16.1728.51±9.312)67.98±10.724)Th1/ Th219.69±8.7413.03±3.8420.15±4.36

        2.6 肺組織T-bet、GATA-3 蛋白表達(dá) BMSCs 移植0 h 時(shí)觀察發(fā)現(xiàn),與空白組比較,哮喘組、歸巢組T-bet、T-bet/GATA-3 表達(dá) 降 低,GATA-3 表 達(dá)升高(P<0.05 或P<0.01)。經(jīng)BMSCs 移植72 h 后,與哮喘組比較,歸巢組T-bet、T-bet/GATA-3 表達(dá)升高,GATA-3 表達(dá)降低(P<0.01)。在歸巢組,與0 h 比較,72 h 的T-bet/GATA-3 表達(dá)升高,GATA-3 表達(dá)降低(P<0.01)。見(jiàn)表4,圖5。

        圖5 肺組織T-bet、GATA-3蛋白表達(dá)Fig.5 T-bet and GATA-3 protein expression in lung tissue

        表4 肺組織T-bet、GATA-3蛋白表達(dá)(±s,n=6)Tab.4 T-bet and GATA-3 protein expression in lung tissue(±s,n=6)

        表4 肺組織T-bet、GATA-3蛋白表達(dá)(±s,n=6)Tab.4 T-bet and GATA-3 protein expression in lung tissue(±s,n=6)

        Note:1)P<0.05,2)P<0.01 vs blank group;3)P<0.01 vs asthma group;4)P<0.01 vs 0 h.

        Groups Blank Asthma Homing 0 h T-bet 0.72±0.030.45±0.062)0.46±0.062)GATA-30.41±0.060.81±0.102)0.77±0.052)T-bet/ GATA-31.25±0.310.69±0.122)0.72±0.122)72 h T-bet 0.69±0.030.40±0.052)0.49±0.112)GATA-30.44±0.060.65±0.062)0.46±0.033)4)T-bet/ GATA-31.14±0.260.84±0.081)1.24±0.183)4)

        2.7 相關(guān)性分析 CFSE 與IFN-γ 呈正比,CFSE 與GATA-3 呈反比(P<0.05,P<0.01)。肺泡炎積分、Mφ與GATA-3呈正比(P<0.05,P<0.01)。見(jiàn)表5。

        表5 哮喘各指標(biāo)之間相關(guān)性分析Tab.5 Correlation analysis between asthma indicators

        3 討論

        哮喘是由多種細(xì)胞及細(xì)胞組分參與的慢性炎癥性氣道疾病,是一種以氣道炎癥為特征的復(fù)雜免疫反應(yīng)性疾病[12-13]。哮喘的主要特征是嗜酸性粒細(xì)胞增多、血清IgE 濃度升高、氣道高反應(yīng)性和氣道黏液過(guò)多[14]。哮喘被認(rèn)為是由Th2細(xì)胞因子(包括IL-14、IL-15和IL-13)誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。免疫調(diào)節(jié)學(xué)說(shuō)認(rèn)為Th1/Th2 細(xì)胞功能及比例的失衡有利于Th2 極化,Th1/Th2細(xì)胞“漂移”是哮喘最主要的免疫異常[15-16]。

        IFN-γ 是Th1 產(chǎn)生的主要細(xì)胞因子,在誘導(dǎo)Th1細(xì)胞產(chǎn)生方面起著關(guān)鍵作用,并參與抑制Th2 細(xì)胞反應(yīng)和B 細(xì)胞IgE 合成,從而限制哮喘的進(jìn)展。有研究發(fā)現(xiàn),IFN-γ 能降低IL-13 誘導(dǎo)的杯狀細(xì)胞增生和嗜酸性粒細(xì)胞增多,減少IL-13 信號(hào)傳導(dǎo)[17]。通過(guò)降低TGF-β 和前膠原Ⅰ和Ⅲ的表達(dá),IFN-γ 可減輕哮喘氣道重塑和纖維化。IL-13 足以介導(dǎo)肺部Th2 炎癥的所有基本特征[18-19]。IL-13 及其受體在哮喘患者的呼吸道中高表達(dá)。Th2 細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞都產(chǎn)生IL-13。IL-13刺激人B 細(xì)胞合成IgE,是Th2 介導(dǎo)的疾病的關(guān)鍵效應(yīng)因子。氣道中IL-13 的產(chǎn)生促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的存活和遷移,巨噬細(xì)胞的激活,B 細(xì)胞中IgG 同種型向IgE 的轉(zhuǎn)換,氣道上皮細(xì)胞的通透性和黏液分泌增加,氣道上皮細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)型一氧化氮合酶,氣道成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞,膠原沉積。本次研究發(fā)現(xiàn),與空白組比較,哮喘組IFN-γ、Th1/Th2表達(dá)降低,IL-13 表達(dá)升高,且WBC、E、Mφ 表達(dá)升高。提示IFN-γ 參與哮喘發(fā)生。說(shuō)明Th2 極化可致哮喘的發(fā)生。表明哮喘發(fā)生與Th2源性的細(xì)胞因子密切相關(guān)。IFN-γ 的表達(dá)升高能提供有益的Th1 免疫調(diào)節(jié)信號(hào)。通過(guò)促進(jìn)Th1細(xì)胞的機(jī)能而恢復(fù)Th1/Th2 平衡。而通過(guò)抑制Th2 反應(yīng)的發(fā)生可能減輕哮喘氣道炎癥。

        對(duì)不同類型病原體的免疫應(yīng)答是通過(guò)將幼稚的CD4+T 細(xì)胞分化為Th1 和Th2 亞群實(shí)現(xiàn),而2 個(gè)亞群的分化分別受特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet 和GATA-3調(diào)節(jié)。正常狀況下,T-bet 和GATA-3 在細(xì)胞因子基因表達(dá)不同的細(xì)胞因子基因,從而動(dòng)態(tài)調(diào)控Th1/Th2間的分化平衡。在哮喘發(fā)生過(guò)程中GATA-3 依賴的Th2 淋巴細(xì)胞活化[20-21]。GATA-3 可直接抑制IFN-γ的表達(dá),促進(jìn)IL-4、IL-5、IL-13 等多種Th2 細(xì)胞分化,由此Th2 型細(xì)胞效應(yīng)增強(qiáng),Th1 分化功能受抑制,Th1/Th2 向Th2“漂移”。IL-13 作為1 種關(guān)鍵的Th2細(xì)胞因子,受Th2 主要轉(zhuǎn)錄因子(GATA-3)調(diào)控激活產(chǎn)生,與哮喘氣道炎癥和重塑密切相關(guān)。本研究顯示,與空白組比較,哮喘組T-bet、T-bet/GATA-3表達(dá)降低,GATA-3 表達(dá)升高。說(shuō)明T-bet/GATA-3 可能參與哮喘發(fā)生。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),肺泡炎積分、Mφ與GATA-3 呈正比。上述發(fā)病機(jī)制又導(dǎo)致支氣管高反應(yīng)性并引起氣流阻塞。在哮喘復(fù)雜的免疫反應(yīng)中,IL-13無(wú)疑是治療的相關(guān)靶點(diǎn)。

        BMSCs 來(lái)源于骨髓,是具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞,有高度可塑性和增殖能力,同時(shí)還具有特殊的低免疫原性和免疫調(diào)節(jié)功能。低免疫原性使外源性BMSCs 在宿主體內(nèi)獲得長(zhǎng)期的生存能力,為BMSCs 移植的可行性提供了基礎(chǔ)。其內(nèi)在免疫調(diào)節(jié)潛能更為治療哮喘提供了可能。BMSCs 能否發(fā)揮作用取決于BMSCs 的“歸巢”能力。BMSCs“歸巢”即當(dāng)機(jī)體損傷時(shí),“休眠”的BMSCs 被“喚醒”,有效地遷移到炎癥損傷部位,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)及損傷修復(fù)作用。哮喘發(fā)作過(guò)程,BMSCs 通過(guò)“歸巢”到達(dá)損傷肺組織,通過(guò)調(diào)節(jié)主轉(zhuǎn)錄基因和決定Th細(xì)胞亞群命運(yùn)的相關(guān)細(xì)胞因子基因表達(dá),調(diào)節(jié)Th1/Th2“漂移”,緩解破壞性炎癥反應(yīng)并發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。本研究顯示,經(jīng)BMSCs 移植72 h 后,與哮喘組比較,歸巢組IFN-γ 表達(dá)升高,IL-13 表達(dá)降低。且歸巢組T-bet、T-bet/GATA-3 表達(dá)升高,GATA-3 表達(dá)降低。而相關(guān)性分析顯示,CFSE 與IFN-γ 呈正比,CFSE 與GATA-3 呈反比。說(shuō)明BMSCs 可能是通過(guò)調(diào)節(jié)T-bet、GATA-3 的表達(dá)恢復(fù)Th1/Th2 平衡。BMSCs 對(duì)Th2 細(xì)胞具有優(yōu)先抑制活性,其通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞接觸機(jī)制介導(dǎo)對(duì)CD4+細(xì)胞免疫抑制,抑制Th2轉(zhuǎn)錄因子GATA-3 和細(xì)胞因子(如IL-10、IL-4)的表達(dá),促進(jìn)T-bet 和IFN-γ 的表達(dá),使免疫反應(yīng)偏向Th1。此外,BMSCs 可以調(diào)節(jié)釋放炎癥相關(guān)因子,通過(guò)刺激INF-γ 調(diào)節(jié)Th1/Th2 細(xì)胞因子平衡,并抑制IL-4、IL-5和IL-13的表達(dá)。

        綜上所述,BMSCs 通過(guò)調(diào)節(jié)T-bet/GATA-3 表達(dá),促進(jìn)Th1/Th2“漂移”向Th1 方向遷移,改善哮喘氣道炎癥。

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