張鎮(zhèn)梁，邢福武，侯小改，王發(fā)國(guó)，喬 琦*

（1.河南科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院/牡丹學(xué)院，河南洛陽(yáng)471023；2.中國(guó)科學(xué)院華南植物園，廣東廣州510650）

牡丹（Paeonia suffruticasaAndrews.）是芍藥科（Paeoniaeeae）芍藥屬（Paeonia）牡丹組（Sect.Mou?tonDC）植物，為多年生灌木［1-3］。該組分為兩個(gè)亞組：革質(zhì)花盤亞組（Subsetc.Vaginatea）和肉質(zhì)花盤亞組（Subsetc Delavayanae Stern），共9 個(gè)種。其中，革質(zhì)花盤亞組包括矮牡丹（Paeonia jishanensis）、卵葉牡丹（Paeonia qiui）、楊山牡丹（Paeonia ostii）、紫斑牡丹（Paeonia rockii）、四川牡丹（Paeonia decomposi?ta）5 個(gè)種；肉質(zhì)花盤亞組包括4 個(gè)種，即紫牡丹（Paeonia delavayi）、黃牡丹（Paeonia lutea）、狹葉牡丹（Paeonia potaninii）、大黃花牡丹（Paeonia lud?lowii）［4-5］。牡丹因花大色艷、品冠群芳，故有“花中之王”、“國(guó)色天香”的美譽(yù)［7-8］，具有觀賞、藥用和食用價(jià)值［6-8］。

目前對(duì)于牡丹的研究，主要集中在野生種分類、栽培品種分類、遺傳多樣性以及文旅等方面，而對(duì)其生殖生物學(xué)方向的研究尚未全面報(bào)道［9］。因此對(duì)牡丹花部特征、開花物候、傳粉、花粉活力、結(jié)實(shí)特性、種子休眠與萌發(fā)等生殖生物學(xué)特性進(jìn)行了歸納，以期為相關(guān)研究工作提供理論依據(jù)和有利的參考。

1 牡丹的地理分布

牡丹原產(chǎn)中國(guó)，其適應(yīng)性強(qiáng)，可耐干旱。牡丹最大最集中的栽培區(qū)是菏澤、洛陽(yáng)、北京、臨夏、彭州、銅陵縣等。通過中原花農(nóng)冬季赴粵、閩、浙、深圳、海南進(jìn)行牡丹催花，促使了牡丹在以上幾個(gè)地區(qū)生殖發(fā)育，使牡丹種植遍布到中國(guó)各省市自治區(qū)［10］。事實(shí)上，經(jīng)過2 000 多年的生產(chǎn)實(shí)踐，我國(guó)栽培牡丹的多樣性不僅更加豐富，而且對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力也增強(qiáng)，基本形成了以我國(guó)中原、西北、江南及西南地區(qū)為主的幾個(gè)品種群［11-12］（表1）。

表1 牡丹四大栽培品種群Table 1 Four major cultivars of peony

2 牡丹開花生物學(xué)研究

牡丹開花生物學(xué)包括花芽分化、花部構(gòu)成、配子體的發(fā)生和發(fā)育、開花物候等過程［13-14］。

2.1 牡丹開花物候及花部特征

開花物候是牡丹生殖生物學(xué)研究的重要環(huán)節(jié)之一，包括開花的起始時(shí)間、開花高峰期和末花期，它對(duì)牡丹結(jié)實(shí)成功具有重要影響［15］。對(duì)比全國(guó)各地牡丹的花期表征，我們可以看出，通常花期時(shí)間差異較大，如河南省洛陽(yáng)市最長(zhǎng)為17 d，同一地區(qū)不同品種的開花物候也有較大的差別，因而有早、中、晚花的區(qū)分。

花部特征：?jiǎn)位ㄉ谥ι遥睆?0～17 cm；莖長(zhǎng)4～6 cm；綠色，苞片長(zhǎng)圓形，數(shù)量5枚；綠色萼片，5 枚，匙形或卵圓形，頂端急尖；花冠放射狀，花基部盤繞卷曲；花瓣5 枚，或重瓣，粉紅色、紅紫色、粉紅色至白色，倒卵形，長(zhǎng)5～8 cm，寬4.2～6 cm，先端呈不規(guī)則波浪形；花藥扭曲縮短，長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)4 mm；花絲從開花到凋謝均纖細(xì)，紫紅色和粉紅色，上部為白色，長(zhǎng)約1.3 cm；花盤革質(zhì)，杯狀，紫紅色、黃色、綠色，先端有數(shù)個(gè)尖齒或裂片，完全包圍心皮，心皮成熟后干燥，2～6 枚，無毛，有光澤，顏色隨柱頭變化而變化。自然花期為3月中旬～6月上旬，單花的花期約 3～10 d，群體的花期在 20～30 d［16-17］，并且每年只開花一次。

2.2 牡丹花芽分化

花芽分化是開花過程中非常重要的一步，直接影響著開花的數(shù)量和質(zhì)量。牡丹作為中國(guó)的傳統(tǒng)名花，其花芽分化不僅對(duì)其自然花期觀賞價(jià)值有著重要影響，也是進(jìn)行花期調(diào)控的重要依據(jù)［18］。牡丹的花芽分化通常在6 月初開始，在9 月下旬至10 月中旬結(jié)束，雌蕊和雄蕊的瓣化主要發(fā)生在11月至下年年初，其分化進(jìn)程依照萼片、花瓣、雄蕊、雌蕊（心皮）的順序進(jìn)行［19-20］。但是，花芽分化過程發(fā)生的時(shí)間因植株的條件和品種不同而不同。國(guó)內(nèi)對(duì)牡丹花芽分化的研究主要集中在分化類型和分化進(jìn)程上［21］。賀丹等［22］采用石蠟切片技術(shù)和觀察測(cè)量方法對(duì)牡丹栽培品種——鳳丹進(jìn)行了觀察，根據(jù)切片顯示，牡丹花芽為混合芽，大致分為早期花芽分化、苞片初生分化、萼片初生分化、花瓣初生分化、雄蕊初生分化和雌蕊初生分化六個(gè)時(shí)期。楊正申等［23］選取27個(gè)牡丹品種研究花芽分化，發(fā)現(xiàn)分化可分為幼葉分化完成、花被分化和雌蕊分化三個(gè)時(shí)期，并以此將牡丹分為‘趙粉型’、‘櫻落寶珠型’和‘洛陽(yáng)紅型’?；ㄑ糠只俣瓤?、完成時(shí)間早的牡丹品種更容易用于栽培試驗(yàn)。來自中原地區(qū)的中國(guó)牡丹品種，其花芽分化開始時(shí)間在日本比中國(guó)稍晚，可作為節(jié)日花材推廣。

3 牡丹傳粉生物學(xué)研究

花粉是種子植物的雄配子體，在生殖過程中起著重要的作用［24］?；ǚ蹆?chǔ)存常被用來延長(zhǎng)親本不開花授粉的植物的壽命。在授粉前一般都進(jìn)行萌發(fā)率的測(cè)定，確定花粉是否具備受精能力。測(cè)定花粉萌發(fā)率的主要方法有三種：離體萌發(fā)、活體萌發(fā)和用氧化還原染料的非萌發(fā)分析測(cè)定法［25］?；ǚ勖劝l(fā)率的測(cè)定對(duì)于雜交育種工作具有重要的意義，這樣可以減少工作浪費(fèi)，提高生殖效率。

3.1 花粉活力研究

花粉活力的高低直接影響生殖的效率和成功率，是人工授粉、輻射誘變和花粉培養(yǎng)的必要條件，在使用花粉前應(yīng)進(jìn)行測(cè)定［26］。目前，花粉活力的測(cè)定一般用染色鑒定法和離體萌發(fā)測(cè)定法。

3.1.1 花粉活力測(cè)定方法

3.1.1.1 染色鑒定法

染色有三種染色方法：醋酸洋紅、碘-碘化鉀（I2-KI）、2，3，5-三苯基氯化四氮唑法（2，3，5-triphe?nylte-trazolium chloride，TTC），TTC 是測(cè)定花粉的活力和壽命最常用的方法。具體方法是：將同一朵花不同時(shí)間和同一植株的不同花朵在同一時(shí)間散出的花粉撒在載玻片上，滴加含有0.5%TTC 的蔗糖溶液，迅速蓋上蓋玻片，放在平板上，內(nèi)有濕濾紙，將平板置于37℃黑暗中2 h。對(duì)蓋玻片中心觀察到的所有花粉中紅色花粉的比例的3～5 個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)［27］。TTC 法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)速度較快，但在測(cè)定過程中出現(xiàn)過渡色，顏色鑒別有困難，測(cè)定結(jié)果往往偏高。

3.1.1.2 離體萌發(fā)測(cè)定法

離體萌發(fā)測(cè)定法對(duì)所有貯藏花粉或新鮮花粉都適宜，并能測(cè)出相對(duì)萌發(fā)率，花粉萌發(fā)率直接關(guān)系到植物生殖能力及價(jià)值［28］。離體萌發(fā)測(cè)定法需要特定的培養(yǎng)基來培養(yǎng)花粉，常用的培養(yǎng)基有液體和固體兩種，其中液體培養(yǎng)分離法最為方便。在恒定的培養(yǎng)條件和溫度控制下，可以通過離體培養(yǎng)時(shí)的發(fā)芽率來測(cè)定花粉的成活率，這種方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快速、合理，完全可以定量［29］。但花粉發(fā)芽條件如養(yǎng)分、溫度和培養(yǎng)時(shí)間以及礦物質(zhì)元素等對(duì)離體萌發(fā)法測(cè)定花粉成活率有很大影響［30］。

3.1.2 花粉培養(yǎng)條件

蔗糖是大多數(shù)植物花粉培養(yǎng)物的重要成分，因?yàn)樗転榛ǚ郯l(fā)芽和花粉管生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，還能維持外界環(huán)境中恒定的滲透壓，不同品種的牡丹對(duì)蔗糖濃度有不同的需求［31-32］。黃牡丹［33］（Paeonia dela?vayiFranch.）花粉萌發(fā)所需蔗糖濃度為80～140 g/L。矮牡丹［34］花粉萌發(fā)所需蔗糖濃度為80 g/L。蓋偉玲［35］研究了魯荷紅牡丹（Paeonia suffruticosacv.Luhehong）、楊山牡丹（Paeoniaostii.）、卵葉牡丹（P.qi?ui）、紫斑牡丹（P.rokki）4 個(gè)牡丹品種的花粉萌發(fā)情況，發(fā)現(xiàn)當(dāng)蔗糖濃度增加時(shí)，4 個(gè)牡丹品種的花粉表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)蔗糖濃度為100 g/L時(shí)，四種牡丹萌發(fā)率最高。

硼酸是牡丹花粉萌發(fā)的必要條件，它對(duì)花器官的形態(tài)結(jié)構(gòu)、花粉發(fā)芽、花粉管的生長(zhǎng)和受精有很大的影響，缺硼會(huì)導(dǎo)致開花不受精。硼酸作用于質(zhì)膜上的Ca2+通道，使Ca2+進(jìn)入細(xì)胞，增加細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+的濃度，啟動(dòng)花粉萌發(fā)［36］。牡丹所需要的硼酸質(zhì)量濃度一般在30～80 mg/L。鈣是雌蕊中花粉管生長(zhǎng)的必要條件，也是通過化合反應(yīng)促進(jìn)花粉管的生長(zhǎng)。鈣是花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)最重要的信號(hào)，在花粉萌發(fā)過程中，鈣可以代替群體效應(yīng)。離體花粉的培養(yǎng)基中必須有Ca2+，并且鈣的濃度一定要適當(dāng)，當(dāng)鈣濃度較低或培養(yǎng)基中沒有鈣時(shí)，花粉管末端可能會(huì)膨脹斷裂，當(dāng)鈣濃度較高時(shí)，花粉管停止生長(zhǎng)［37］。牡丹花粉萌發(fā)所需Ca2+質(zhì)量濃度為20 mg/L 時(shí)與蔗糖、硼酸兩兩組合后對(duì)萌發(fā)率有非常顯著的影響。

3.2 花粉胚株比（Pollen-Ovule Ratio，P/O）

花粉-胚珠比率（P/O）是用每朵花的估計(jì)花粉量數(shù)除以每朵花的胚珠數(shù)來確定的。Cruden 通過研究認(rèn)為P/O值可以指示植物的繁育系統(tǒng)，因?yàn)镻/O值反映的是大量花粉都能到達(dá)柱頭所形成最高結(jié)實(shí)率，P/O 值越低，花粉傳遞越有效［38］。平均花粉量通常采用在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)器來計(jì)算［39］。胚珠數(shù)是統(tǒng)計(jì)植株結(jié)實(shí)率的重要指標(biāo)之一，常用的方法是直接觀察法，即用解剖刀和鑷子等打開子房，在解剖鏡下觀察胚珠個(gè)數(shù)。

3.3 柱頭可授期

柱頭可授期是花朵成熟的重要時(shí)期，也是人工授粉的重要參考指標(biāo)［40］。柱頭可授性通過聯(lián)苯胺-過氧化氫法測(cè)定，即在牡丹開花期旺盛時(shí)，每天中午采開花后不同天數(shù)的花朵，將其柱頭浸入含有聯(lián)苯胺-過氧化氫反應(yīng)液凹面載片中（1%聯(lián)苯胺：3%過氧化氫：水=4：11：22）的凹陷處，如果柱頭可育，則柱頭周圍的反應(yīng)液為藍(lán)色，并出現(xiàn)大量氣泡［41］。根據(jù)李奎等［42］研究發(fā)現(xiàn)，滇牡丹開花后第一天至第三天的授粉率超過70%以上，但授粉率在開花后四天急劇下降，柱頭變黑變硬后失去了產(chǎn)生花粉的能力。楊勇等［43］對(duì)四川牡丹的柱頭進(jìn)行了可授性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)四川牡丹柱頭可授性持續(xù)了9 d，在開花的第5～8 d最強(qiáng)。

3.4 訪花昆蟲

蟲媒植物利用花蜜、花粉、顏色和氣味等花卉特性的綜合作用，吸引開花昆蟲到其花上傳粉，不同植物的花吸引不同類型的昆蟲，有時(shí)形成特定的傳粉關(guān)系［44］。以昆蟲為媒介的植物必須依靠傳粉昆蟲來完成卵受精過程，這種植物的開花生物學(xué)對(duì)昆蟲的活動(dòng)規(guī)律和花粉傳遞有重要作用，同時(shí)昆蟲的行為對(duì)植物的成功繁殖起著至關(guān)重要的作用［45］。

牡丹是典型的蟲媒植物，主要的傳粉昆蟲是蜂類、甲蟲類和蠅類。雖然許多昆蟲都能為農(nóng)作物授粉，如雙翅目的蠅類、鱗翅目的蝶類和鱗翅目的蝶類等［46］。但膜翅目昆蟲以其獨(dú)特的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性，是最主要的傳粉昆蟲［47］。羅毅波等［48］連續(xù)兩年對(duì)山西省三個(gè)矮牡丹居群進(jìn)行了實(shí)地觀察，發(fā)現(xiàn)共有5 種蜂和4 種甲蟲參與矮牡丹的傳粉。通過電鏡觀察和人工控制昆蟲傳粉試驗(yàn)證明蜂類，特別是地蜂類是矮牡丹的主要傳粉者，而甲蟲只是不穩(wěn)定的傳粉者。

表2 已發(fā)表的常見牡丹傳粉昆蟲Table 2 Common pollinators of Peony published in journals

3.5 繁育系統(tǒng)檢測(cè)

繁育系統(tǒng)的檢測(cè)是傳粉生物學(xué)中不可缺少的一部分，一般是采用套袋和人工授粉等方式［49］。李奎等［50］人研究滇牡丹的繁育系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)滇牡丹是異花授粉植物。為了提高滇牡丹結(jié)實(shí)率，可以在特殊天氣條件下使用人工授粉，也可在花期人工放蜂，增加訪花者數(shù)量來提高傳粉力度。種子的結(jié)實(shí)主要取決于傳粉昆蟲的活動(dòng)，通過異花傳粉攜帶的異質(zhì)基因可以進(jìn)一步增強(qiáng)后代的變異性和適應(yīng)性。羅毅波等人對(duì)矮牡丹的試驗(yàn)結(jié)果表明，居群間人工雜交和自然授粉的結(jié)實(shí)情況在“永濟(jì)Ⅰ”居群中基本相似，但在“稷山Ⅱ”居群中，則居群間人工雜交的結(jié)實(shí)情況遠(yuǎn)好于自然授粉的結(jié)果。在居群間人工雜交情況下“永濟(jì)Ⅰ”和“稷山Ⅱ”居群的結(jié)實(shí)情況則基本一致［48］。所以，研究者們認(rèn)為‘矮牡丹’的結(jié)實(shí)情況存在一定預(yù)知情況，在這個(gè)預(yù)知情況的范圍內(nèi)，隨著傳粉過程的改變，結(jié)實(shí)情況會(huì)有所好轉(zhuǎn)。

4 牡丹種子生物學(xué)特性

種子是植物的主要生殖器官，是種群延續(xù)的重要紐帶，也是長(zhǎng)期保存種質(zhì)資源的理想材料［51］。種子特征包括形態(tài)和生理兩個(gè)方面，其中，種子微形態(tài)不易受環(huán)境影響，具有一定的穩(wěn)定性［52-53］。

4.1 牡丹種子的形態(tài)結(jié)構(gòu)和結(jié)實(shí)特性

牡丹的果實(shí)為蓇葖果，呈紡錘形、橢圓形、瓶形等；有光滑或細(xì)密的絨毛。2～8 枚離生，由單心皮構(gòu)成，子房1室，內(nèi)含種子多粒，黑色或黑褐色，呈圓形、長(zhǎng)圓形或尖圓形。不同品種的種子大小、色澤等也不同［54］。牡丹種子由種皮、胚、胚乳三部分構(gòu)成［55］，由于牡丹結(jié)實(shí)率較高，種子在果實(shí)中分布不均勻，相鄰種之間相互擠壓，形成不規(guī)則的種子形狀。牡丹種子的胚一般為匙形，發(fā)育不完全，因此需要在種子成熟后進(jìn)一步發(fā)育［56］。種胚僅占新鮮成熟種子的一小部分，其余大部分為胚乳［57］。

牡丹的蓇葖果五角，每個(gè)果角結(jié)籽7～13 粒，表皮初為綠色且多毛，成熟時(shí)變?yōu)樾伏S色，種籽為黃綠色，成熟時(shí)果角干枯，種籽為黑褐色，千粒重約400 g，但種籽僅有部分可育性［58］。

4.2 牡丹種子休眠及萌發(fā)特性

牡丹繁殖可分為種子繁殖和無性繁殖兩種［59］。種子繁殖系數(shù)大，可以在短期內(nèi)獲得大量苗木，但實(shí)生苗變異大，不易保持母本的優(yōu)良性狀。因此種子繁殖常用于藥用牡丹、新品種的選育。種子萌發(fā)則是種子繁殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，種子萌發(fā)成苗的質(zhì)量和周期直接影響牡丹種苗的產(chǎn)量和效益。因此，關(guān)于牡丹種子的休眠和萌發(fā)的相關(guān)研究引起了人們廣泛關(guān)注［60］。牡丹種子的休眠特性包括胚根（下胚軸）和胚芽（上胚軸）的休眠，其中上胚軸的休眠更為明顯［61］。種子萌發(fā)過程呈現(xiàn)出階段性變化，需要相應(yīng)的溫度變化過程，不過不同種類之間，不同種類的種子萌發(fā)階段所需的溫度和時(shí)期的長(zhǎng)短不一［62］。

4.2.1 種子休眠原因

種皮受損是影響植物種子休眠的因素之一，但是否是造成種子休眠的主要原因，各植物的情況不同。牡丹種子種皮較硬，木質(zhì)化程度高，嚴(yán)重影響了種子的吸水速度和種子的透氣性，不利于種子萌發(fā)［63］。

牡丹種子中存在的發(fā)芽抑制物質(zhì)是導(dǎo)致種子休眠的重要原因。宋會(huì)興［64］在四川牡丹種子提取出了抑制萌發(fā)的物質(zhì)，能夠抑制油菜種子萌發(fā)，這是四川牡丹種子休眠的重要原因。郭麗萍等［65］發(fā)現(xiàn)鳳丹和紫斑牡丹的種子種皮和胚乳中存在較強(qiáng)的抑制物質(zhì)，能夠抑制白菜種子萌發(fā)和自身種子的萌發(fā)。

牡丹果實(shí)成熟后，種子胚芽發(fā)育不完全，并處于一定程度的生理休眠狀態(tài)，必須在一定條件下完成形態(tài)及生理后熟才能萌發(fā)，種胚形態(tài)及生理發(fā)育不成熟也是導(dǎo)致牡丹種子休眠的重要因素［66］。

4.2.2 種子休眠的破除

目前對(duì)牡丹種子休眠解除方法的研究主要從溫度、外源激素、種皮結(jié)構(gòu)等方面入手。關(guān)于溫度，主要研究了層積積溫和低溫春化兩種最有效的溫度。溫度對(duì)牡丹種子的萌發(fā)及胚伸長(zhǎng)起著明顯的作用，不同的牡丹品種對(duì)層積的溫度要求不同。馬宏等［67］對(duì)大花黃牡丹種子休眠解除研究表明溫度對(duì)大花黃牡丹種子萌發(fā)有顯著影響，在溫度低于10℃和高于25℃時(shí)生長(zhǎng)的種子不發(fā)芽，解除種子休眠的最佳溫度為15～20℃。根據(jù)鄭相穆等［68］人對(duì)‘鳳丹’種子的觀察，‘鳳丹’種子需要經(jīng)歷25℃暖溫長(zhǎng)根階段和5℃低溫春化長(zhǎng)芽階段。

植物激素對(duì)牡丹種子萌發(fā)的主要影響是赤霉素（Gibberellin A3，GA3）的使用，種子生根后，低溫和GA3處理均能有效地解除上胚軸休眠，促進(jìn)芽的形成。外源激素可以通過改變內(nèi)源激素的含量而調(diào)節(jié)種子休眠與萌發(fā)。范丙友等［69］研究發(fā)現(xiàn)用200 mg/LGA3處理已生根鳳丹種子，能有效打破鳳丹種子的上胚軸休眠，從而使其發(fā)芽率達(dá)90.1%。婁方芳等［70］用 200 mg/LGA3溶液浸泡 24 h 處理過的已生根種子，放置在15℃條件下，不僅發(fā)芽時(shí)間縮短，而且發(fā)芽率也明顯提高。

根據(jù)劉敏淑、王蓮英等［8］人所述，種皮的透水和透氣性是影響種子萌發(fā)的重要因素，并提出在濃硫酸中浸泡2～3 min，或在95%的酒精中浸泡30 min，均可軟化種皮并促進(jìn)萌發(fā)。然而，景新明等［71］人認(rèn)為，使用化學(xué)或物理方法來處理牡丹種皮，對(duì)種子休眠的打破效果并不顯著，反而會(huì)引起霉菌侵染。郭麗萍等［72］研究中發(fā)現(xiàn)鳳丹種皮對(duì)種子的吸水率有一定的影響，而當(dāng)吸水率達(dá)到吸水飽和時(shí)則沒有影響。種皮的通透性不是牡丹休眠的主要原因，但是木質(zhì)化的種皮可能會(huì)對(duì)種子萌發(fā)造成一定的機(jī)械阻力。

4.3 牡丹種子的采收及貯藏

牡丹種子從8月初到9月中旬成熟，而5年生以上的牡丹種子相對(duì)飽滿，發(fā)芽率高。種子的成熟有早有晚，應(yīng)分階段和分批收獲，如果采收時(shí)間過早，種子將不成熟，如果采收時(shí)間過晚，則種皮將變黑發(fā)硬不易出苗［73］。當(dāng)果實(shí)的角呈蟹黃色時(shí)，將果實(shí)摘下并放在屋內(nèi)涼爽潮濕的地面上，讓果殼中的種子成熟。每天翻動(dòng)1次，以防止底部變熱，并且防止外部干燥和硬化。種子從果殼中黃綠色變?yōu)楹稚?，再變?yōu)楹谏?0～15 d后，大多數(shù)果皮逐漸破裂并釋放出種子。此時(shí)，不需將果皮與種子分離，并保存在其原始位置以備后用，嚴(yán)禁將它曝曬在陽(yáng)光底下使種皮變硬，等到種植前1 d再將種子揀出［74］。

將晾干的種子放在干凈的河沙上，以1：3 的比例混合，將溫度控制在1～10℃，濕度控制在60%左右（用手將河沙捏成團(tuán)，松開不散，手掌濕潤(rùn)，但不見水滴時(shí)的濕度），貯藏4 個(gè)月。在貯藏期間，應(yīng)翻動(dòng)2～3次，同時(shí)注意通風(fēng)和保濕［75］。

5 總結(jié)與展望

牡丹是典型的蟲媒植物，為了提高牡丹結(jié)實(shí)率，我們可以在牡丹花期通過人工釋放蜂增加訪花者數(shù)量來提高傳粉力度或相應(yīng)地降低居群內(nèi)其他植物的郁閉度，并在一定的天氣條件下（如陰天或雨天）采用人工授粉，為后代環(huán)境變化的適應(yīng)性創(chuàng)造條件，促進(jìn)牡丹活株的形成。種子是植物的主要生殖器官，牡丹的品種培育通常采用種子繁殖，而種子萌發(fā)是種子繁殖的關(guān)鍵。大多數(shù)牡丹都有上胚軸形態(tài)生理休眠的特性［63］，種胚分化但未完全發(fā)育，在胚根突破種皮之前，種胚必須達(dá)到一定的長(zhǎng)度。因此，牡丹種子的萌發(fā)需經(jīng)歷暖層積打破種胚的形態(tài)休眠和胚根的生理休眠。GA3和低溫處理均可有效打破牡丹種子的上胚軸休眠，可以促進(jìn)牡丹種子的發(fā)芽，縮短牡丹實(shí)生苗的成苗時(shí)間，進(jìn)而提高牡丹的結(jié)實(shí)率［76］。

隨著時(shí)代的進(jìn)步，對(duì)牡丹觀賞性狀及適應(yīng)能力均提出了更高的要求。這就需要不斷地培育新優(yōu)品種以滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的需求。近年來，由于缺乏對(duì)牡丹資源的保護(hù)和非本地區(qū)的盲目移植，以及開花和種子結(jié)實(shí)率低，導(dǎo)致牡丹品種急劇下降。為此研究牡丹的開花物候、花粉活力、繁育系統(tǒng)特征、種子的休眠與萌發(fā)特性尤為重要。對(duì)牡丹生殖生物學(xué)的詳細(xì)研究不僅為牡丹優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的栽培提供了理論依據(jù)，也為牡丹優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)品種的培育提供了參考。