羅 娟 閆再宏 郭文有

河北中石油中心醫(yī)院消化內(nèi)科 (河北 廊坊， 065000)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、NAFLD相關(guān)的肝纖維化和肝硬化等。其中NASH為肝硬化、肝衰竭以及肝細(xì)胞癌的重要危險(xiǎn)因素[1，2]，因此在臨床上越來越受到重視。當(dāng)前區(qū)分NAFL和NASH的最好檢測方法是肝活檢，但由于其局限性，很少在臨床使用[3]。研究發(fā)現(xiàn)，多種細(xì)胞因子參與了NAFLD的病理生理過程，并在NAFLD的發(fā)展中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，包括白細(xì)胞介素-22(IL-22)、白細(xì)胞介素-18(IL-18)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)[4]。肝臟是人體重要的免疫器官，在人體的免疫中發(fā)揮重要作用，T細(xì)胞是細(xì)胞免疫反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞，其CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+T細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能異?？赡芘c慢性肝病進(jìn)展的密切相關(guān)[5]。為探討聯(lián)合檢測血清炎癥因子和T細(xì)胞亞群對診斷NAFLD的價(jià)值，本研究選取2018年1月至2019年12月在我院治療的90例NAFLD患者進(jìn)行研究，并與同期在我院體檢的90例健康人員作對照，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 NAFLD患者90例(NAFLD組)，其中非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者29例，非酒精性單純型脂肪肝(NAFL)患者61例。90例健康體檢者作為對照組，兩組人員一般情況見表1。

表1 兩組人員一般資料比較

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①診斷符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南》中的標(biāo)準(zhǔn)[6]；②年齡>18歲；③患者及家屬知情同意。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并HBV感染、自身免疫性肝病、藥物性肝病等其他肝病患者；②其他因素導(dǎo)致的脂肪肝患者；③有精神疾病史、惡性腫瘤、內(nèi)分泌疾病等其他嚴(yán)重疾病者。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 清晨空腹抽取患者6 ml靜脈血，3 000 r/min離心10 min，取上清液，采用流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞因子IL-22、IL-18、TNF-α，抽取肘靜脈血，置于抗凝管中，離心機(jī)分離取上層血清，低溫下保存，30 min 內(nèi)送檢，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+T細(xì)胞百分率，操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 血清炎性因子、T細(xì)胞亞群鑒別NASH的價(jià)值 IL-22、IL-18、TNF-α、CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+T細(xì)胞診斷NASH的ROC曲線下面積分別為0.936、0.865、0.770、0.851、0.906和0.768，P<0.05，具體參數(shù)見表2和圖1。

表2 ROC曲線參數(shù)

圖1 ROC曲線圖

2.2 兩組人員血清炎性因子、T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果 NAFLD組患者血清IL-22、IL-18、TNF-α和CD4+T細(xì)胞比例明顯高于對照組(P<0.05)，而CD8+、CD4+CD25+T細(xì)胞比例明顯低于對照組(P<0.05)，見表3。

表3 兩組人員血清炎性因子、T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

2.3 NASH和NASFL患者血清炎性因子、T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果 NASH患者血清IL-22、IL-18、TNF-和CD4+T細(xì)胞比例明顯高于NAFL患者(P<0.05)，而CD8+、CD4+CD25+T細(xì)胞比例明顯低于NAFL患者(P<0.05)。見表4。

表4 NASH和NAFL患者血清炎性因子、T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

3 討論

NAFLD作為常見的慢性疾病，在臨床實(shí)踐中，應(yīng)特別注意NASH患者，此類患者容易并發(fā)肝纖維化，NASH是肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌的重要危險(xiǎn)因素。目前，用于鑒別和區(qū)分NAFL和NASH的各種診斷方法，包括實(shí)驗(yàn)室檢查和成像，但肝活檢仍是金標(biāo)準(zhǔn)。但是，由于其具有侵入性，成本高和適用性差等缺點(diǎn)，臨床應(yīng)用具有一定的局限性，因此有必要尋求其他更安全適用的臨床檢測指標(biāo)以鑒別NAFL和NASH患者。NAFLD的發(fā)病是一個(gè)復(fù)雜的過程，目前認(rèn)為“二次打擊”理論可解釋其過程，首先是由于甘油三酯在肝細(xì)胞中的積累，導(dǎo)致肝臟中存在脂肪浸潤，從而導(dǎo)致胰島素抵抗(IR)[7，8]。在二次打擊中，多余的脂肪會觸發(fā)導(dǎo)致炎癥，纖維化和壞死細(xì)胞死亡的機(jī)制，包括氧化應(yīng)激，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，某些細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子和腸道菌群中的內(nèi)毒素[9]。另外，內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病和遺傳易感性促進(jìn)了NASH的發(fā)生和發(fā)展[10]。因此，本研究主要對成人NAFLD患者進(jìn)行了免疫細(xì)胞和炎癥因子的檢測，以達(dá)到對NAFLD患者早發(fā)現(xiàn)早治療的目的。

TNF-α由脂肪組織中的巨噬細(xì)胞分泌，可引起肌體損傷，影響肌體對胰島素依賴性葡萄糖的吸收，導(dǎo)致IR，并刺激激素敏感性脂肪酶，游離脂肪酸(FFA)濃度增加[11]。IL-18是脂肪源性因子，在肥胖的人中，脂肪組織中IL-18的表達(dá)增加。IL-18水平升高可進(jìn)一步激活T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，分泌一系列炎癥細(xì)胞因子和粘附分子，促進(jìn)炎癥的持續(xù)發(fā)展，并使患者的病情惡化[12]。IL-22的主要靶器官是肝細(xì)胞，參與急性期蛋白的產(chǎn)生和與組織修復(fù)有關(guān)的蛋白表達(dá)過程。研究結(jié)果表明，以上白細(xì)胞介素通過促進(jìn)肝細(xì)胞的存活和再生來避免肝臟受損害[13]。本次研究結(jié)果顯示，NAFLD患者血清IL-22、IL-18和TNF-α水平明顯高于對照組，發(fā)揮促進(jìn)炎癥發(fā)展的作用。NASH患者的IL-22、IL-18和TNF-α水平顯著高于NAFL患者，表明該指標(biāo)與NASH患者的病情發(fā)展密切相關(guān)，并可能反映了疾病嚴(yán)重程度。

T細(xì)胞是執(zhí)行細(xì)胞免疫反應(yīng)并在體液免疫反應(yīng)中起重要作用的效應(yīng)細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞對靶細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用，對免疫應(yīng)答中的主要應(yīng)答細(xì)胞CD4+T細(xì)胞發(fā)揮調(diào)節(jié)性免疫抑制作用，兩者相互影響維持人體細(xì)胞免疫反應(yīng)的平衡[14-16]。CD4+CD25+T細(xì)胞約占人體CD4+T細(xì)胞總數(shù)的10%，是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群、具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞群，可以抑制免疫T細(xì)胞活化，維持免疫耐受和預(yù)防免疫疾病發(fā)生。外周血CD4+T細(xì)胞中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例已成為衡量CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞群落大小的重要參數(shù)[17]。NAFLD患者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)異常，外周血T細(xì)胞亞群的變化可能參與NAFLD患者肝臟慢性損傷的進(jìn)程。NASH患者的CD4+CD25+T細(xì)胞免疫功能異常，CD4+CD25+T細(xì)胞表達(dá)不足，不能有效抑制CD4+T細(xì)胞增殖。由NAFLD患者的T細(xì)胞亞群的變化引起的細(xì)胞免疫紊亂的可能原因是患者機(jī)體反應(yīng)性氧化代謝產(chǎn)物增加導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化、細(xì)胞因子增多。CD4+T細(xì)胞參與免疫應(yīng)答過程，因此NAFLD患者機(jī)體CD4+T細(xì)胞增加，其活化后促炎性細(xì)胞因子大量分泌，發(fā)揮更強(qiáng)的促炎作用，導(dǎo)致促炎和抗炎作用失衡。NAFLD患者外周血中CD4+T細(xì)胞增加，人體的CD8+T細(xì)胞在一定程度上對CD4+ T細(xì)胞起調(diào)節(jié)性免疫抑制作用，使人體處于免疫平衡狀態(tài)，但是一旦失衡則表現(xiàn)為CD4+T細(xì)胞增加而CD8+T細(xì)胞減少。IL-22、IL-18、TNF-α、CD4+T、CD8+、CD4+CD25+T細(xì)胞診斷NASH靈敏度和特異性均處于較高水平。

血清學(xué)指標(biāo)的檢測具有簡單易行的優(yōu)點(diǎn)，可以動態(tài)觀察NAFLD的發(fā)展過程，并直觀地反映出臨床治療效果[18,19]。目前臨床上對于區(qū)分NAFL和NASH的安全適用的診斷方法、NAFLD患者外周血T細(xì)胞亞群和炎性因子的變化及其與NAFLD和NASH進(jìn)展和程度的相關(guān)性的研究均很少。本研究通過觀察患者血清中炎癥因子和T細(xì)胞亞群在成人NAFLD中的變化，進(jìn)一步研究上述炎癥因子和T細(xì)胞亞群與成人NAFLD炎癥活動程度的相關(guān)性，并為區(qū)分NAFL、NASH提供診斷方法。

綜上所述，聯(lián)合檢測患者血清炎癥因子、T細(xì)胞亞群水平對診斷NAFLD和鑒別診斷NASH有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。