謝瑾卉，林英，臧超群，裴雪，于舒怡，梁春浩

（遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，遼寧沈陽(yáng) 110161）

花生是我國(guó)出口創(chuàng)匯的重要作物，在國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有重要地位，也是世界貿(mào)易中重要的出口創(chuàng)匯作物[1-4]。花生網(wǎng)斑?。≒homa arachidicolaMarasas）是花生生產(chǎn)中重要的葉部病害之一，自1973 年于美國(guó)德克薩斯州首次發(fā)現(xiàn)后，在阿根廷、巴西、加拿大等國(guó)家均有相繼報(bào)道[4]。近年來，我國(guó)花生種植面積逐漸增大，但隨著花生新品種的推廣使用，花生重茬種植、耐藥性增強(qiáng)等因素，花生網(wǎng)斑病危害程度不斷加重，成為影響花生產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素[5-6]?；ㄉW(wǎng)斑病是由花生派倫霉（Peyronellaea arachidicola）引起的花生生產(chǎn)中最重要的病害之一[7-8]，生產(chǎn)上該病常與褐斑病、黑斑病混合發(fā)生，造成嚴(yán)重落葉，影響植株光合作用，嚴(yán)重時(shí)造成減產(chǎn)30%以上[9-10]。

目前，對(duì)于花生網(wǎng)斑病的防治措施主要依靠施用農(nóng)藥和耕作栽培防治等，由于化學(xué)藥劑防治易造成病菌產(chǎn)生耐藥性且花生種植倒茬困難，因此，選育優(yōu)良抗病品種成為了防治花生網(wǎng)斑病最有效的措施之一。該課題組系統(tǒng)選取37 個(gè)花生品種，采用室內(nèi)人工離體接種和田間自然發(fā)病相結(jié)合的方法，評(píng)價(jià)不同品種（系）對(duì)網(wǎng)斑病的抗性，旨在生產(chǎn)上利用抗病品種防治網(wǎng)斑病，同時(shí)為花生抗病品種的推廣提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株?；ㄉW(wǎng)斑病菌、病害標(biāo)樣采自遼寧省花生主產(chǎn)區(qū)阜新市阜蒙縣，經(jīng)單孢分離、純化和柯赫氏法則驗(yàn)證后于實(shí)驗(yàn)室保存?zhèn)溆?。供試菌種于細(xì)燕麥培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)繁。25 d 后，用無(wú)菌水沖洗，配制出1×105個(gè)/mL 孢子懸浮液，加入0.1%的Tween 20 增加孢子懸浮液與葉片的粘附性，以及1 mg 蔗糖增強(qiáng)孢子活性，備用于接種[11]。

1.1.2 供試花生品種（系）。供試37 個(gè)花生品種由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花生研究所提供。在遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所花生病害鑒定資源圃2 年栽培觀察，品種特性表現(xiàn)穩(wěn)定（表1）。

其中‘中花’品種 5 個(gè)，‘錦花’品種 4 個(gè)，‘阜花’品種3 個(gè)，‘花育’品種 2 個(gè)，‘唐 k’品種 2 個(gè)，‘徐花’品種 2 個(gè)，‘豫花’品種2 個(gè)，其余品種17 個(gè)。

1.1.3 試驗(yàn)地概況。試驗(yàn)地位于遼寧省沈陽(yáng)市遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院西地花生試驗(yàn)田。試驗(yàn)地多年連作花生，土壤類型為壤質(zhì)土，pH 7.1，土壤有機(jī)質(zhì)含量為2.3%。試驗(yàn)地水肥管理及花生長(zhǎng)勢(shì)均勻一致。

1.2 方法

1.2.1 田間小區(qū)設(shè)置。鑒定材料按采用隨機(jī)排列。小區(qū)行長(zhǎng) 10 m，4 行區(qū)，行距 0.6 m，小區(qū)保苗 200 穴左右。每 5 個(gè)小區(qū)設(shè)置1 個(gè)病害誘發(fā)小區(qū)，誘發(fā)小區(qū)種植四粒紅，該品種為高感網(wǎng)斑病品種[12]，同時(shí)經(jīng)過本研究室驗(yàn)證。每個(gè)試驗(yàn)設(shè)置3 個(gè)重復(fù)，四周設(shè)保護(hù)行。

1.2.2 室內(nèi)人工接種步驟。①離體葉片選擇，在田間尚未見到花生網(wǎng)斑病病斑時(shí)，每個(gè)品種選取3 株主莖下部長(zhǎng)勢(shì)一致的成熟復(fù)葉，用剪刀緊貼主莖剪下，放置于事先標(biāo)記好的自封袋中帶回實(shí)驗(yàn)室備用。②接種培養(yǎng)，將葉片清水沖洗后用脫脂棉包裹葉柄，置于高6 cm、上口直徑4 cm、下底直徑3.7 cm，容積為30 mL 塑料接種杯中，內(nèi)置自來水25 mL，用8 號(hào)水粉筆沾取孢子懸浮液均勻涂抹供試花生全部葉片，用6 號(hào)自封袋（120 mm 取孢子懸浮液）保濕，置于人工智能培養(yǎng)箱中（25℃，光暗交替16∶8）培養(yǎng)。

1.2.3 室內(nèi)發(fā)病情況調(diào)查。接種網(wǎng)斑病菌10 d 后，調(diào)查每個(gè)品種的發(fā)病情況，記錄每片復(fù)葉的單葉數(shù)和各級(jí)病葉數(shù)，計(jì)算出每個(gè)品種的病情指數(shù)。

病情指數(shù)= [∑（各級(jí)病葉數(shù)×代表值）/調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高病級(jí)代表值）]×100

1.2.4 田間自然抗病性評(píng)價(jià)。在花生網(wǎng)斑病發(fā)病盛期（2019 年8 月25 日）于遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花生病害鑒定資源圃內(nèi)進(jìn)行調(diào)查，每個(gè)品種隨機(jī)選取小區(qū)非邊緣位置且長(zhǎng)勢(shì)一致的20 株為調(diào)查對(duì)象，調(diào)查主莖下部長(zhǎng)勢(shì)一致的一片復(fù)葉的發(fā)病情況，記錄每個(gè)復(fù)葉的單葉數(shù)和病級(jí)數(shù)，計(jì)算出每個(gè)品種的病情指數(shù)。

1.2.5 病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按照病斑面積占整個(gè)葉片面積的百分比把花生褐斑病分為6 級(jí)[13]。其中0 級(jí)：病斑面積為 0；1 級(jí)：病斑面積<10%；2 級(jí)：10%≤病斑面積 <25%；3 級(jí)：25%≤病斑面積 <50%；4 級(jí)：50≤病斑面積<75%；5 級(jí)：病斑面積≥75%。

1.2.6 品種抗病性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)相對(duì)抗病指數(shù)，將花生品種對(duì)褐斑病的抗性劃分為免疫（I）、高抗（HR）、中抗（R）、抗?。∕R）、感?。⊿）、高感（HS）6 個(gè)等級(jí)。各等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)和相對(duì)抗病指數(shù)公式如下：I：相對(duì)抗病指數(shù)為1.0；HR：相對(duì)抗病指數(shù)為：0.80~0.99；R：相對(duì)抗病指數(shù)為0.60~0.79；MR：相對(duì)抗病指數(shù)為 0.40~0.69；S：相對(duì)抗病指數(shù)為0.20~0.39；HS：相對(duì)抗病指數(shù)為0.20 以下。

相對(duì)抗病指數(shù)=1-[（品種病情指數(shù)）/（最感品種病情指數(shù)）]

1.2.7 數(shù)據(jù)分析。采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，判斷花生品種（系）對(duì)花生褐斑病抗性的差異顯著性分析，采用歐式距離法（Euclidean distance）計(jì)算品種間距離，離差平方和法（Ward’s）進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同花生品種對(duì)花生網(wǎng)斑病菌的抗性分析

從表2 可以看出，測(cè)定的37 個(gè)花生品種（系）均感網(wǎng)斑病，未發(fā)現(xiàn)免疫品種。其中高抗品種6 個(gè)，占供試品種的16.22%，錦花7 號(hào)的病情指數(shù)最低，為0.5；抗病品種12 個(gè)，占供試品種的32.43%；中抗品種9 個(gè)，占供試品種的24.32%，感病品種3 個(gè)，占供試品種的8%；高感品種7個(gè)，占供試品種的18.9%，粵油19 號(hào)的病情指數(shù)最高，為17.00。

2.2 不同花生品種田間網(wǎng)斑病發(fā)病情況調(diào)查

于發(fā)病盛期對(duì)供試品種（系）進(jìn)行了田間調(diào)查，結(jié)果顯示（表2），高抗品種5 個(gè)，占供試品種的14.71%，翼9801 的病情指數(shù)最低，為1.4；抗病品種17 個(gè)，占供試品種的45.95%；中抗品種7 個(gè)，占供試品種的18.92%，感病品種5 個(gè)，占供試品種的13.51%；高感品種4 個(gè)，占供試品種的10.81%，豐花6 號(hào)的病情指數(shù)最高，為34.88。

表2 不同花生品種對(duì)花生網(wǎng)斑病的抗性評(píng)價(jià)結(jié)果

2.3 不同花生品種（系）對(duì)花生網(wǎng)斑病抗性聚類分析

采用每個(gè)品種的室內(nèi)接種和田間調(diào)查的病情指數(shù)共同作為聚類分析的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，對(duì)37 個(gè)花生品種（系）進(jìn)行抗花生網(wǎng)斑病聚類分析。取閾值為10 時(shí)，37 個(gè)花生品種被聚為 4 類（圖 1）。其中翼 9801、錦花 7 號(hào)、錦花 5 號(hào)、中花2 號(hào)被聚為一類，抗性最強(qiáng)。

圖1 不同花生品種對(duì)網(wǎng)斑病抗性聚類分析譜系

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

供試品種中沒有對(duì)網(wǎng)斑病完全免疫的品種，其中室內(nèi)離體葉片接種評(píng)價(jià)高抗品種4 個(gè)，抗病品種4 個(gè)，中抗品種22 個(gè)，感病品種7 個(gè)，高感品種3 個(gè)；田間自然發(fā)病調(diào)查評(píng)價(jià)高抗品種3 個(gè)，抗病品種9 個(gè)，中抗品種11 個(gè)，感病品種8 個(gè)，高感品種3 個(gè)。對(duì)37 個(gè)花生品種（系）室內(nèi)外接種病情指數(shù)進(jìn)行聚類分析顯示，37 個(gè)花生品種（系）可分為4 類，其中抗性較多，高抗品種較少，翼9801、錦花7號(hào)、錦花5 號(hào)、中花2 號(hào)被聚為一類，抗性最強(qiáng)。

3.2 討論

袁虹霞等[12]采用田間自然病圃和人工接種的方法，對(duì)來自河南省的13 個(gè)花生品種（系）分別進(jìn)行了抗網(wǎng)斑病性能鑒定。結(jié)果表明，供試花生品系對(duì)花生網(wǎng)斑病抗性存在顯著差異，沒有發(fā)現(xiàn)免疫和高抗性品種。路興濤等[14]采用田間病圃鑒定了不同花生對(duì)網(wǎng)斑病的抗性，調(diào)查結(jié)果顯示，不同花生品種對(duì)花生網(wǎng)斑病的總體抗病性較差，隨不同地域和田間管理措施變化有一定差異，但田間自然發(fā)病率高，并有逐年危害、損失嚴(yán)重的趨勢(shì)。

該研究采用室內(nèi)人工接種以及田間自然病圃2 種方法分別對(duì)花生網(wǎng)斑病進(jìn)行了病情調(diào)查，發(fā)現(xiàn)多數(shù)花生品種室內(nèi)人工接種和田間自然病圃的發(fā)病程度基本相同，不同花生品種間抗病性存在顯著差異，與上述學(xué)者的研究結(jié)果一致。整體上均未發(fā)現(xiàn)免疫品種且缺乏較高抗性的品種。目前，國(guó)內(nèi)花生的種植面積不斷增大，然而大多數(shù)地區(qū)對(duì)花生網(wǎng)斑病重視程度不足，缺乏相對(duì)應(yīng)的防治措施，導(dǎo)致花生產(chǎn)量降低并嚴(yán)重制約花生品質(zhì)。除受栽培措施、氣候因素、水肥管理等影響外，抗性品種選育是改善這一問題的關(guān)鍵因素。因此，筆者將進(jìn)一步逐年調(diào)查不同花生品種對(duì)網(wǎng)斑病的抗性表現(xiàn)，旨在為花生優(yōu)勢(shì)品種選育和抗網(wǎng)斑病花生品種的推廣利用提供理論支持。