趙 巖，孫占良，江 飛，呂太勇，劉 楠

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科（瀘州 646000）；2.四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室核醫(yī)學(xué)與分子影像（瀘州 646000）；3.四川省院士（專(zhuān)家）工作站（瀘州 646000）；4.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院（瀘州 646000）

核醫(yī)學(xué)的推進(jìn)與發(fā)展主要包括兩個(gè)方面：一是診斷設(shè)備如正電子發(fā)射斷層掃描儀（positron emission tomography，PET）和單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描儀（single photon emission computed tomography，SPECT）方面的進(jìn)展[1]，二是放射性藥物方面的進(jìn)展[2-14]。隨著診斷設(shè)備的日漸成熟，放射性藥物的研究已經(jīng)成為推動(dòng)核醫(yī)學(xué)不斷向前發(fā)展的主要?jiǎng)恿?。放射性藥物從其放射性特點(diǎn)上可以分為兩個(gè)研究方面：首先是放射性藥物的標(biāo)記合成研究[2-6]，其次是放射性藥物的核素生產(chǎn)研究[7-14]。

68Ga-DOTATATE的化學(xué)全稱(chēng)是68Ga-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸-D-苯丙氨酸-1-酪氨酸-3-蘇氨酸-8-奧曲肽，是一種在PET顯像診斷中使用的放射性藥物，主要應(yīng)用于定位診斷表達(dá)生長(zhǎng)抑素受體（somatostatin receptor，SSR）的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（neuroendocrine neoplasms，NENs）[15-19]，聯(lián)合MRI可以提高腫瘤性骨軟化癥診斷的特異性和準(zhǔn)確性[20]。同時(shí)，在使用177Lu-DOTATATE 針對(duì)NENs 進(jìn)行的肽受體放射性核素治療（peptide receptor radionuclide therapies，PRRT）時(shí)，68Ga-DOTATATE 可以作為對(duì)應(yīng)的顯像劑在術(shù)前和術(shù)后為患者實(shí)行診斷和檢查[21-23]。

因?yàn)槠涑上裥Ч麅?yōu)于第一個(gè)被批準(zhǔn)用于NENs顯像的111In-噴曲肽（pentetreotide），該放射性藥物已于2016 年6 月1 日被美國(guó)的食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）批準(zhǔn)用于NENs的診斷[19]。

68Ga-DOTATATE的合成生產(chǎn)過(guò)程相對(duì)18F-FDG更簡(jiǎn)單，68Ga物理半衰期為68 min，一般由鍺鎵發(fā)生器（68Ge/68Ga generator）生產(chǎn)[10-14]，不需要加速器，標(biāo)記反應(yīng)可以使用全自動(dòng)模塊或半自動(dòng)模塊完成，也可以手動(dòng)完成[24-26]。下面以使用ITG 半自動(dòng)模塊為例，介紹68Ga-DOTATATE注射液的生產(chǎn)過(guò)程：安裝反應(yīng)管線及產(chǎn)品瓶與廢液瓶，預(yù)熱模塊與反應(yīng)管，溫度控制在80 ℃～100 ℃；將醋酸鈉緩沖溶液和DOTATATE前體混合后推入反應(yīng)管，使用超純鹽酸淋洗鍺鎵發(fā)生器，將68GaCl3淋洗液推入反應(yīng)管，反應(yīng)液最佳pH范圍為3.5～4.5，加熱反應(yīng)10～15 min；將反應(yīng)液通過(guò)C-18固相萃取柱送入廢液瓶，用生理鹽水再次清洗C-18 柱；使用乙醇和生理鹽水淋洗C-18 固相萃取柱并經(jīng)無(wú)菌濾膜過(guò)濾后送入產(chǎn)品瓶；測(cè)量廢液和產(chǎn)品活度，取微量產(chǎn)品液檢驗(yàn)pH并通過(guò)高效液相 色 譜（high-performance liquid chromatograph，HPLC）檢測(cè)放射化學(xué)純度（簡(jiǎn)稱(chēng)放化純）[27-28]。

雖然68Ga-DOTATATE的標(biāo)記方法已經(jīng)成熟，但是因?yàn)閲?guó)內(nèi)醫(yī)院開(kāi)展相關(guān)業(yè)務(wù)的單位仍然較少，對(duì)于合成過(guò)程中問(wèn)題排查的研究還未見(jiàn)報(bào)道，本報(bào)告將分享標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中問(wèn)題的排查和解決，盼望幫助相關(guān)工作人員解決實(shí)際問(wèn)題。

本院于2018 年開(kāi)始開(kāi)展68Ga-DOTATATE 的PET/CT 臨床科研診斷顯像[29-31]，該放射性藥物一直使用ITG 半自動(dòng)模塊進(jìn)行標(biāo)記合成，每天的藥物標(biāo)記由四位標(biāo)記人員輪流完成，產(chǎn)品的放化純正常在98%以上。在2020年4月份中下旬，不同人員標(biāo)記中出現(xiàn)了3次產(chǎn)品放化純低于98%，甚至低至90%，檢查相應(yīng)的廢液，發(fā)現(xiàn)其活度高于正常水平，表明反應(yīng)的標(biāo)記率低于正常水平。

要查找原因，首先檢查反應(yīng)的標(biāo)記率，使用ITG模塊按照操作程序進(jìn)行反應(yīng)，不進(jìn)行純化，測(cè)得標(biāo)記率僅為42%，遠(yuǎn)低于正常水平。造成標(biāo)記率降低可能有如下幾種原因：首先是反應(yīng)環(huán)境的酸堿度，如果反應(yīng)液pH不在正常范圍內(nèi)，標(biāo)記率會(huì)明顯下降，當(dāng)pH出現(xiàn)異常，說(shuō)明鹽酸或者緩沖液的濃度有問(wèn)題，可以進(jìn)行相應(yīng)的更換再次核驗(yàn)pH；其次是反應(yīng)液中所含每一種物質(zhì)的純度，包括鹽酸、緩沖液與前體溶液，對(duì)于標(biāo)記反應(yīng)金屬雜質(zhì)的濃度水平對(duì)反應(yīng)的成敗至關(guān)重要，需要核驗(yàn)這些物質(zhì)是否被污染，對(duì)受污染的物質(zhì)進(jìn)行更換后，可以恢復(fù)標(biāo)記率；最后是反應(yīng)的物理儀器系統(tǒng)，像其它化學(xué)反應(yīng)一樣，放射性標(biāo)記反應(yīng)需要在特定的溫度下進(jìn)行，另外模塊使用管線系統(tǒng)是否有殘余或者漏夜，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)液中各種物質(zhì)的比例改變，也會(huì)導(dǎo)致標(biāo)記率降低。如果加熱系統(tǒng)出現(xiàn)故障不能提供相應(yīng)溫度或者管線有問(wèn)題，需要進(jìn)行維修或更換以恢復(fù)標(biāo)記率。本文將針對(duì)上面所列舉的可能性展開(kāi)排查實(shí)驗(yàn)，對(duì)問(wèn)題進(jìn)行溯源。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

鹽酸（0.05 mol/L），使用超純鹽酸（Merck，Ultrapur，30%）和注射用水（四川美大康佳樂(lè)藥業(yè)）稀釋而成；醋酸鈉溶液（0.25 mol/L），使用無(wú)水超純醋酸鈉（Merck，Suprapur，99.99%）和注射用水配制而成；其它濃度的緩沖溶液也是使用不同濃度超純鹽酸和醋酸鈉配制而成；乙腈（賽孚瑞，HPLC/色譜純）；乙醇（Merck，Emprove）；廣范pH 試紙（pH 1～14，三愛(ài)思）、精密pH 試紙（pH 3.8～5.4，顯色反應(yīng)間隔0.5，麥克林）；合成模塊所用管線（ITG）；C-18 固相萃取柱（Waters，Sep-Pak C18 Light）；除菌濾膜（Merck，vented Millex-GS，0.22 μm）；DOTATATE 前體（江蘇華益）。

放射性核素活度計(jì)（Capintec，CRC-55tR）；鍺鎵發(fā)生器（ITG）；68Ga半自動(dòng)合成模塊（ITG）；恒溫混勻儀（寧波洛尚，Lawson，DHS-100）；數(shù)字溫度計(jì)（TP101，-50 ℃～300 ℃）；放射性HPLC（Lab Alliance）；pH計(jì)（雷磁，PHSJ-3F）。

1.2 質(zhì)量控制

C-18反向色譜柱（Agilent，ZORBAX Eclipse C18 Plus，4.6 mm×250 mm，5 μm），放射性HPLC 流動(dòng)相為：A泵，0.1%三氟乙酸乙腈溶液；B泵，0.1%三氟乙酸水溶液，洗脫梯度為：0～15 min，乙腈濃度10%～90%，流速為1 mL/min。

2 結(jié)果

2.1 pH核驗(yàn)

0.05mol/L 稀鹽酸淋洗儲(chǔ)備液儲(chǔ)存于一個(gè)500 mL 的PP 瓶?jī)?nèi)，并定期分裝入100 mL PP 中轉(zhuǎn)瓶中。每次標(biāo)記實(shí)驗(yàn)都是從中轉(zhuǎn)瓶取鹽酸，當(dāng)中轉(zhuǎn)瓶?jī)?nèi)鹽酸使用完后，再?gòu)膫溆闷咳←}酸進(jìn)入中轉(zhuǎn)瓶。分別從中轉(zhuǎn)瓶和備用瓶中取4 mL鹽酸，各加入1 mL醋酸鈉溶液與0.1 mL 水，模擬反應(yīng)液的酸堿度，使用pH 計(jì)測(cè)量pH，平均值分別為3.6 和3.8。當(dāng)用精密試紙測(cè)量時(shí)，顯示其pH 都低于3.8，沒(méi)有明顯差別。通過(guò)此驗(yàn)證說(shuō)明，反應(yīng)液的pH 是處于最佳pH 范圍3.5～4.5之內(nèi)。

2.2 緩沖溶液

反應(yīng)液的酸堿度是合格的，接下來(lái)檢查了所使用的緩沖液，使用手動(dòng)標(biāo)記的方法，在獨(dú)立的恒溫混勻儀上，使用不同的緩沖液：①0.25 mol/L NaOAc 溶液300 μL，68Ga 淋洗液1200 μL，前體水溶液10 μg/45 μL；②NaOAc/HCl溶液（pH=4.4）300 μL，68Ga淋洗液1800 μL，前體水溶液10 μg/45 μL。測(cè)量標(biāo)記率分別為98%和95%，從這里可以看到，使用不同的緩沖液的兩個(gè)反應(yīng)都是正常，甚至使用醋酸鈉緩沖液的標(biāo)記率更高。因?yàn)槭褂锚?dú)立搖動(dòng)的加熱器增加了標(biāo)記率，所以接下來(lái)對(duì)比了模塊和獨(dú)立加熱器的加熱效率差異，在這之前，需要驗(yàn)證前體的濃度是否充足。

2.3 前體濃度

在正常藥物生產(chǎn)中，反應(yīng)液的體積約為5 mL，包括4 mL68Ga 鹽酸淋洗溶液、1 mL 醋酸鈉溶液和0.1 mL 前體水溶液，投入的DOTATATE 前體質(zhì)量為25 μg，前體在反應(yīng)液中的濃度為5 μg/mL。由于鍺鎵發(fā)生器每次可提供的68Ga 鹽酸淋洗溶液只有4 mL，所以采取降低反應(yīng)體積來(lái)進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

取三份常規(guī)體積1/10 的反應(yīng)液，包括400 μL 0.05 mol/L68Ga鹽酸淋洗溶液和100 μL 0.25 mol/L醋酸鈉溶液，投入前體的質(zhì)量分別設(shè)為1.25，2.5和5.0 μg，體積都是20 μL，這樣前體在反應(yīng)液中的濃度分別為2.5，5 和10 μg/mL。使用恒溫混勻儀反應(yīng)，測(cè)得標(biāo)記率依次為99%，98%和98%。可以看出，當(dāng)前體濃度降低到正常使用濃度的50%或者增加到兩倍時(shí)，反應(yīng)標(biāo)記率都正常。

在標(biāo)記合成中一直使用ITG 模塊，到目前為止的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在模塊上的標(biāo)記率只有42%，而在恒溫混勻儀上，標(biāo)記率可以達(dá)到98%，需要進(jìn)一步檢查模塊的加熱器。

2.4 加熱器

將模塊和恒溫混勻儀的溫度控制設(shè)定為95 ℃，等待它們的溫度達(dá)到設(shè)定的溫度后，將帶有液體的反應(yīng)管放在不同加熱器上，并分別記錄在這些加熱系統(tǒng)上所使用的不同反應(yīng)管內(nèi)液體隨時(shí)間的溫度變化曲線，見(jiàn)圖1。在模塊上反應(yīng)管的溶液體積為5 mL，在恒溫混勻儀上反應(yīng)管的溶液體積為2 mL，從結(jié)果可以看出獨(dú)立的加熱器的溫度上升比較快，兩個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的液體在10 min 左右達(dá)到平衡溫度，它們的平衡溫度接近，大約為80 ℃。在恒溫混勻儀上的反應(yīng)管溫度上升較快，有兩個(gè)可能的原因：首先，在恒溫混勻儀上，只能放2 mL 的離心管，相對(duì)模塊上可裝納5 mL 的反應(yīng)管，溶液體積小，所以溫度上升快；其次，恒溫混勻儀帶有搖動(dòng)功能，可以加快熱的傳遞，而模塊上的溶液是靜止加熱的。

圖1 ITG模塊與恒溫混勻儀上溶液溫度隨時(shí)間變化

注意，將加熱器的平衡溫度設(shè)在95 ℃，在ITG模塊上是通過(guò)模擬信號(hào)旋鈕來(lái)調(diào)控溫度的，恒溫混勻儀是通過(guò)數(shù)字信號(hào)來(lái)調(diào)控溫度，在被加熱的液體達(dá)到平衡溫度時(shí)，平衡溫度只達(dá)到了80 ℃，而不是95 ℃。雖然所使用的數(shù)字溫度計(jì)有可能和實(shí)際的真實(shí)溫度有偏差，但是使用的是同一個(gè)溫度計(jì)測(cè)量溫度的變化，所以這兩個(gè)被加熱的反應(yīng)管的溫度變化不存在因不同溫度計(jì)而帶來(lái)的誤差。

2.5 反應(yīng)時(shí)間

獲得這兩個(gè)加熱器的加熱效率的信息后，又進(jìn)一步測(cè)量了在ITG 模塊上不同加熱時(shí)間的標(biāo)記率，見(jiàn)表1。

表1 ITG模塊上不同加熱時(shí)間的標(biāo)記率情況

前面提到，反應(yīng)時(shí)間為10 min時(shí)，測(cè)得的標(biāo)記率是42%，因?yàn)槊看稳釉贖PLC 進(jìn)行檢測(cè)就需要大約10 min的時(shí)間，為了較好地與前面反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)為10 min 的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，此處沒(méi)有先測(cè)10 min 時(shí)間節(jié)點(diǎn)的樣品，而是先測(cè)量15 min時(shí)間節(jié)點(diǎn)的樣品，經(jīng)過(guò)放射性HPLC檢測(cè)，其標(biāo)記率是38%，說(shuō)明在標(biāo)記率的誤差范圍內(nèi)增加反應(yīng)時(shí)間沒(méi)有提高標(biāo)記率。

對(duì)于10、20 和25 min 時(shí)間節(jié)點(diǎn)，分別取出約1 mL反應(yīng)液放在室溫環(huán)境下等待檢測(cè)。因?yàn)槊恳粋€(gè)樣品的測(cè)量時(shí)間為10 min 左右，所以20 min 節(jié)點(diǎn)的樣品是在室溫下放置5 min后進(jìn)行檢測(cè)的，10 min節(jié)點(diǎn)的樣品是在放置25 min 后進(jìn)行檢測(cè)的，25 min 節(jié)點(diǎn)的樣品是在放置20 min后進(jìn)行的檢測(cè)。1 mL的樣品液在從高溫的模塊上取下后，其溫度會(huì)緩慢降低，在這個(gè)過(guò)程中，雖然加熱停止了，但是標(biāo)記反應(yīng)仍然會(huì)繼續(xù)進(jìn)行，造成除首個(gè)檢測(cè)樣品外的其他時(shí)間節(jié)點(diǎn)樣品的反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)隨著放置時(shí)間增加而延長(zhǎng)。所以對(duì)于10 min 節(jié)點(diǎn)的樣品，其有效的反應(yīng)時(shí)間是在10～35 min 之間，這就解釋了為什么所檢測(cè)到標(biāo)記率是60%。

從標(biāo)記率的檢測(cè)結(jié)果可以看出，延長(zhǎng)有效的反應(yīng)時(shí)間，標(biāo)記率會(huì)有所改善，但是，即使是對(duì)于最長(zhǎng)的25 min時(shí)間節(jié)點(diǎn)的樣品，有效反應(yīng)時(shí)間在25～45 min之間，其標(biāo)記率也只是接近70%。

從這些實(shí)驗(yàn)可以看出，在模塊上增加有效反應(yīng)時(shí)間可以增加標(biāo)記率，但是仍然沒(méi)有達(dá)到以前的標(biāo)記率水平。為了增加混勻，嘗試了向反應(yīng)管中吹氣，分別在反應(yīng)開(kāi)始、5 min和10 min的三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)吹20 mL 空氣進(jìn)入反應(yīng)液，反應(yīng)15 min，測(cè)量標(biāo)記率為47%，比無(wú)吹氣混勻情形下的38%高出了約9%。取相同的反應(yīng)液在恒溫混勻儀上反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間15 min，標(biāo)記率為98%。從這里看出，獨(dú)立加熱器的混勻功能幫助了標(biāo)記率達(dá)到了98%。但是，需要解釋是什么原因使得以前使用模塊就可以完成的反應(yīng)，現(xiàn)在必須借助恒溫混勻儀才能完成。

2.6 pH環(huán)境

使用模塊時(shí)，不同的操作人員在具體操作上可能稍有不同，其中一步就是，是否把從淋洗液出口到反應(yīng)管之間這段管線內(nèi)剩余的鹽酸淋洗液吹入反應(yīng)管，這段管線內(nèi)可盛裝液體的體積為0.28 mL。同時(shí)，在鹽酸淋洗液的出口處有一段延長(zhǎng)管，這個(gè)延長(zhǎng)管是為了操作方便使用的，如果使用前這段延長(zhǎng)管是空的，它也會(huì)殘留一部分的淋洗液，其體積為0.24 mL。按照這個(gè)推理，管線殘余會(huì)引起鹽酸淋洗液比正常的4 mL少0.52 mL。另一方面，也要了解如果鹽酸過(guò)多對(duì)標(biāo)記率的影響。

按照前面pH驗(yàn)證的方法，分別將鹽酸的體積在4 mL 的基礎(chǔ)上減少0.6 mL 和增加0.6 mL，使用pH計(jì)測(cè)量反應(yīng)液的pH。鹽酸體積分別為3.4，4.0 和4.6 mL，取1.0 mL 醋酸鈉溶液，0.1 mL水（模擬前體水溶液體積），測(cè)量所得的pH 分別為3.89，3.61 和2.71。按照鹽酸和醋酸鈉溶液的比例，取340 和460 μL 的鎵淋洗液，100 μL 醋酸鈉溶液，2.5 μg/40 μL前體水溶液，在獨(dú)立的加熱器上95 ℃反應(yīng)15 min，測(cè)量標(biāo)記率分別為91%和42%。

可以看出，改變鹽酸的體積對(duì)標(biāo)記率有影響，但是，按照估算的鹽酸體積，不會(huì)導(dǎo)致標(biāo)記率減少到42%，反而是多加鹽酸，改變反應(yīng)溶液的酸堿度更大，使標(biāo)記率大幅度下降。所以，在模塊上的標(biāo)記率降低不是來(lái)自殘留在管線里面的鹽酸。

2.7 對(duì)比模塊和無(wú)混勻恒溫混勻儀

為了進(jìn)一步尋找原因，測(cè)量了在模塊和關(guān)閉混勻功能時(shí)使用恒溫混勻儀的標(biāo)記率。提前預(yù)熱模塊和恒溫混勻儀至90 ℃，將1 mL 醋酸鈉溶液和25 μg/0.1 mL前體水溶液混合推入模塊的反應(yīng)管，然后推入4 mL 鹽酸淋洗液，吹入空氣混合反應(yīng)液。然后從模塊的反應(yīng)管中用氣流推出1.5 mL 反應(yīng)液到離心管，放在恒溫混勻儀上反應(yīng)，反應(yīng)10 min 后取下，各取20 μL 樣品在HPLC測(cè)試，結(jié)果顯示模塊上的標(biāo)記率是98%，這個(gè)結(jié)果同之前在相同的裝置和條件下測(cè)得的42%的標(biāo)記率完全不符合，見(jiàn)圖2；測(cè)量在關(guān)閉混勻功能時(shí)使用恒溫混勻儀的標(biāo)記率是97%，兩者標(biāo)記率在誤差范圍內(nèi)基本相同；為了驗(yàn)證，又再次取樣測(cè)量了在模塊上的標(biāo)記率，結(jié)果是97%。

圖2 ITG模塊上不同日期所測(cè)量的HPLC結(jié)果

接下來(lái)于6月2日、3日、5日分別重復(fù)了三次在ITG模塊上的標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表2，標(biāo)記反應(yīng)完全正常，產(chǎn)品的放化純都在99%以上，問(wèn)題已經(jīng)得到解決，但是需要對(duì)問(wèn)題產(chǎn)生和得到解決的原因進(jìn)行解釋。

3 討論

3.1 對(duì)問(wèn)題來(lái)源的推測(cè)

按照本文開(kāi)始對(duì)問(wèn)題的分析，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)各種可能性進(jìn)行排查，在這個(gè)過(guò)程中，問(wèn)題解決了。通過(guò)進(jìn)一步查看生產(chǎn)記錄，找到了問(wèn)題可能的出處。68Ga標(biāo)記的DOTATATE注射液的生產(chǎn)記錄如表2所示，4月13日，廢液活度有2.4 mCi，高于正常水平，只是經(jīng)過(guò)純化后，放化純達(dá)到99.8%，仍處于正常水平，所以問(wèn)題沒(méi)有引起注意；4 月14 日，產(chǎn)品的放化純?yōu)?5.3%，低于正常的＞98%，引起了對(duì)標(biāo)記問(wèn)題的注意；接下來(lái)在4月21日、22日和24日連續(xù)出現(xiàn)異常。

表2 DOTATATE注射液04-01到06-05生產(chǎn)記錄

在發(fā)現(xiàn)問(wèn)題之后，進(jìn)行了一系列排查實(shí)驗(yàn)，包括檢查反應(yīng)液pH 與對(duì)比使用模塊和恒溫混勻儀的區(qū)別，發(fā)現(xiàn)使用恒溫混勻儀提高了標(biāo)記率，所以從5月6日開(kāi)始，使用恒溫混勻儀手動(dòng)標(biāo)記，同時(shí)每次記錄廢液、濾膜和C-18柱上的殘留活度。但是，即使是在使用恒溫混勻儀的情況下，在5 月6 日和5 月18 日，標(biāo)記率也出現(xiàn)異常，廢液活度過(guò)高。最終，在5 月27日，在尋找問(wèn)題的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)在模塊上反應(yīng)恢復(fù)了正常，經(jīng)過(guò)重復(fù)驗(yàn)證后，又改回使用ITG模塊進(jìn)行標(biāo)記。

通過(guò)檢查生產(chǎn)記錄和總結(jié)前面的排查結(jié)果，推測(cè)標(biāo)記異常是由中轉(zhuǎn)瓶的鹽酸被輕度污染造成的。在相同時(shí)期，也在使用同樣的鹽酸淋洗鍺鎵發(fā)生器，利用ITG模塊生產(chǎn)68Ga-PSMA注射液，但是PSMA的標(biāo)記沒(méi)有出現(xiàn)異常，而DOTATATE對(duì)反應(yīng)的體系要求較PSMA更苛刻，所以出現(xiàn)了明顯的標(biāo)記率降低，而這些又可以通過(guò)使用恒溫混勻儀獲得部分或者全部的補(bǔ)償。當(dāng)標(biāo)記率不能被完全補(bǔ)償時(shí)，就出現(xiàn)了在手動(dòng)標(biāo)記的情況下廢液活度過(guò)高；當(dāng)標(biāo)記率獲得全部補(bǔ)償時(shí)，廢液活度水平正常，所以推測(cè)是鹽酸被輕度的污染，還沒(méi)有達(dá)到完全使DOTATATE標(biāo)記不上或者影響到PSMA標(biāo)記的程度。

當(dāng)用完了被污染的鹽酸，從備用瓶補(bǔ)充了未被污染的鹽酸，原來(lái)的問(wèn)題也就解決了。因?yàn)橐獧z查鹽酸被污染的情況，需要特定的儀器設(shè)備，限于實(shí)驗(yàn)條件，無(wú)法完成此類(lèi)檢測(cè)。同時(shí)，因?yàn)闆](méi)有記錄中轉(zhuǎn)瓶鹽酸的具體補(bǔ)充日期，所以沒(méi)有辦法重復(fù)驗(yàn)證此假設(shè)。

標(biāo)記實(shí)驗(yàn)之所以存在這樣一個(gè)潛在的問(wèn)題，是因?yàn)槊看稳←}酸的注射器在3月份之前是重復(fù)使用的，而注射器每次是伸進(jìn)中轉(zhuǎn)瓶吸取鹽酸，當(dāng)外部帶有少量鹽酸的注射器接觸到鐵質(zhì)的屏蔽柜時(shí)，就有腐蝕并將鐵元素帶入中轉(zhuǎn)瓶的可能性，從而污染鹽酸。當(dāng)注意到這個(gè)潛在的問(wèn)題后，在3 月6 日就更新了操作規(guī)程，要求每次淋洗鍺鎵發(fā)生器都要更換注射器，使用新的注射器抽取中轉(zhuǎn)瓶?jī)?nèi)的鹽酸，避免污染。

4 月份發(fā)生的標(biāo)記率異常，有可能是在更新操作規(guī)程后，有些其它實(shí)驗(yàn)人員在鍺鎵發(fā)生器淋洗的過(guò)程中，仍然重復(fù)使用了抽取鹽酸的注射器，導(dǎo)致中轉(zhuǎn)瓶鹽酸被污染。因?yàn)槭禽p度污染，還沒(méi)有達(dá)到完全使DOTATATE 標(biāo)記不上或者影響PSMA 標(biāo)記的程度，另外進(jìn)行DOTATATE標(biāo)記的人員都已經(jīng)在每次使用時(shí)更換注射器，所以在最開(kāi)始也沒(méi)有把問(wèn)題歸結(jié)為這個(gè)原因。

為了防止類(lèi)似問(wèn)題發(fā)生，實(shí)驗(yàn)室規(guī)定鍺鎵發(fā)生器的淋洗只由常規(guī)操作人員執(zhí)行，非常規(guī)人員不允許進(jìn)行淋洗操作，確保每次抽取鹽酸的注射器只是一次性使用。從2020年6月份到現(xiàn)在，已經(jīng)有一年的時(shí)間，沒(méi)有再出現(xiàn)過(guò)DOTATATE 的標(biāo)記異常問(wèn)題，問(wèn)題得到了有效解決，這也從側(cè)面印證了對(duì)問(wèn)題原因的推斷是正確的。

3.2 降低濾膜和C-18柱殘留的方法

另外，生產(chǎn)的DOTATATE 和PSMA 的注射液都是用1 mL 50%乙醇和5 mL 生理鹽水清洗C-18固相萃取柱和除菌濾膜后勾兌而成的，注意到對(duì)于DOTATATE，其在濾膜和C-18 柱的殘留活度要比PSMA高，通過(guò)增加淋洗液的體積，可以減少產(chǎn)品在濾膜和C-18柱上的殘留，增加產(chǎn)品的活度。

對(duì)于濾膜上殘留的活度，例如，在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過(guò)1 mL 50%乙醇和5 mL 生理鹽水清洗后，其殘余活度經(jīng)測(cè)量為3.22 mCi，使用1 mL 50%乙醇再次沖洗濾膜，其殘留活度減少到0.596 mCi，再使用5 mL 生理鹽水沖洗濾膜后，其殘余活度進(jìn)一步減少至0.067 mCi，有非常明顯的效果。

3.3 檢查流程

通過(guò)這一次的問(wèn)題排查，總結(jié)了一份檢查的流程，以供相關(guān)人員參考，見(jiàn)圖3。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)標(biāo)記率降低時(shí)，游離鎵就會(huì)進(jìn)入廢液，首先發(fā)現(xiàn)的是廢液活度增加，同時(shí)進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，因?yàn)榧兓^(guò)程中游離鎵清除不徹底，產(chǎn)品的放化純一般就會(huì)降低，這時(shí)應(yīng)該首先檢查反應(yīng)的標(biāo)記率。前體一般一次性分裝許多小份，不至于互相污染，所以該流程圖沒(méi)有考慮前體的污染。更換鹽酸和緩沖液，使用備用鹽酸和備用緩沖液進(jìn)行標(biāo)記就是為了排除污染引起的標(biāo)記率降低，一般來(lái)說(shuō)，鹽酸被污染的可能性較大，所以先對(duì)其進(jìn)行檢查，本文遇到的問(wèn)題就是屬于鹽酸被輕度污染。如果排除了污染，標(biāo)記率還是低，那就要檢查反應(yīng)液的pH，如果pH異常，可能是鹽酸或者緩沖液濃度有問(wèn)題，分別檢查它們的pH，進(jìn)行必要的更換。核查pH通常是首先進(jìn)行的排查工作，但是通過(guò)本文工作的經(jīng)驗(yàn)，可以將其放在排除鹽酸和緩沖液的污染之后進(jìn)行，這樣或許可以提高排查效率。

圖3 標(biāo)記問(wèn)題檢查流程圖

前面的這些檢查都是在模塊上進(jìn)行，如果不存在污染，反應(yīng)液pH 也在正常范圍內(nèi)，那就要考慮模塊的加熱系統(tǒng)是否出現(xiàn)故障，使用獨(dú)立的加熱器進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。如果在上面檢查的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)了標(biāo)記率恢復(fù)正常，在可能的情況下，利用標(biāo)記率有問(wèn)題的實(shí)驗(yàn)條件和標(biāo)記率正常的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，確定問(wèn)題的來(lái)源。

建議每次新配置鹽酸、緩沖液或者前體后，要進(jìn)行標(biāo)記實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證標(biāo)記率正常，并進(jìn)行記錄，方便出現(xiàn)問(wèn)題后溯源。

4 結(jié)論

在生產(chǎn)68Ga 標(biāo)記的DOTATATE 注射液的實(shí)驗(yàn)中，放化純低于正常水平，經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)標(biāo)記率出現(xiàn)異常，通過(guò)分析問(wèn)題的原因，設(shè)計(jì)了一系列的排查實(shí)驗(yàn)，檢查在不同條件下標(biāo)記率，對(duì)問(wèn)題進(jìn)行了溯源。經(jīng)檢查，反應(yīng)液的pH正常，前體的濃度足夠，不是問(wèn)題的來(lái)源；在ITG 模塊和恒溫混勻儀上有顯著的標(biāo)記率差異，進(jìn)一步檢查發(fā)現(xiàn)，雖然不同加熱器的加熱效率不同，但是增加反應(yīng)時(shí)間并沒(méi)有改善標(biāo)記率，從而證明不是加熱效率造成的問(wèn)題。

在進(jìn)一步對(duì)比ITG模塊和關(guān)閉混勻功能的恒溫混勻儀對(duì)標(biāo)記反應(yīng)的差異時(shí)，發(fā)現(xiàn)標(biāo)記率異常的問(wèn)題消失了。通過(guò)檢查實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)記錄和總結(jié)排查實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，推測(cè)造成標(biāo)記率異常的原因?yàn)榱芟存N鎵發(fā)生器的鹽酸被輕度污染，而通過(guò)使用恒溫混勻儀，使標(biāo)記率得到部分或者完全的補(bǔ)償。通過(guò)規(guī)范鍺鎵發(fā)生器的使用，此后再也沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)類(lèi)似情況，問(wèn)題得到了有效解決。最后，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)了一份檢查流程，供相關(guān)人員在解決實(shí)際問(wèn)題時(shí)參考。