馬淑萍，蒙玉娜，黨春艷，李紅玲

(1.甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，甘肅 蘭州 730000；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750000)

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是淋巴瘤的常見(jiàn)亞型，占成人非霍奇金淋巴瘤(Non-hodgkin lymphoma，NHL)的30%～40%[1]。目前DLBCL的發(fā)病原因和機(jī)制尚不完全清楚，臨床上缺乏特異性診斷標(biāo)志物[2]。盡管R-CHOP方案可顯著改善患者的治療效果和預(yù)后，但仍有10%～15%的患者對(duì)治療無(wú)效，20%～30%的患者在治療后復(fù)發(fā)并且預(yù)后差[3]。據(jù)文獻(xiàn)[4]報(bào)道，氧化應(yīng)激在淋巴瘤的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用，其中錳超氧化物歧化酶(Manganese-containing superoxide dismutase，MnSOD)和過(guò)氧化物酶6(Peroxiredoxin 6，PRDX6)是抗氧化應(yīng)激的相關(guān)蛋白。MnSOD、PRDX6分別屬于超氧化物歧化酶家族(SODs)和過(guò)氧化物酶家族(PRDXs)。MnSOD可以催化超氧陰離子進(jìn)行歧化反應(yīng)生成過(guò)氧化氫(H2O2)和氧氣(O2)，隨后PRDX6可將H2O2還原為H2O和O2，兩者在清除氧自由基、保護(hù)細(xì)胞免受超氧陰離子損害中起重要作用[5-6]。文獻(xiàn)[7-9]報(bào)道，MnSOD和PRDX6在多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)異常，兩者均與多種惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于MnSOD和PRDX6表達(dá)和DLBCL臨床參數(shù)間的研究鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組化法研究MnSOD和PRDX6的表達(dá)與DLBCL 臨床病理特征間的關(guān)系，以及兩者在DLBCL的發(fā)生與發(fā)展中所起的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2016年1月至2019年12月由甘肅省人民醫(yī)院病理科確診的60例初發(fā)DLBCL患者作為DLBCL組，其中男性31例，女性29例；年齡12～80歲，中位年齡57歲；其診斷符合WHO 2016年版《淋巴造血系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)》。另外，收集同期確診的淋巴結(jié)反應(yīng)性增生(RHL)病例20例作為RHL組，其中男性8例，女性12例；年齡16～70歲，中位年齡44.5歲。兩組患者性別、年齡比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。

1.2 主要試劑 本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)DLBCL及RHL中MnSOD和PRDX6的表達(dá)。兔抗人MnSOD多克隆抗體(批號(hào)：GR275917-1)、兔抗人PRDX6多克隆抗體(批號(hào)：ab133348)購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。免疫組化SP試劑盒(批號(hào)：SP-1006)購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3 研究方法 所有標(biāo)本10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，片厚4 μm。檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。MnSOD和PRDX6抗體稀釋濃度均為1∶100。結(jié)果判定由兩位臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片評(píng)估：隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0 分，淡黃為1分，黃褐色為2分，深褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：<5%計(jì)0分，6%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分。取兩項(xiàng)之積為最終得分：0分為陰性；1～12分為陽(yáng)性，其中1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～8分為中度陽(yáng)性()，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性()。另外，收集DLBCL組和RHL組的性別、年齡、乳酸脫氫酶(LDH)、B癥狀、國(guó)際預(yù)后指數(shù)(IPI)評(píng)分等臨床病例資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。MnSOD和PRDX6表達(dá)水平的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者M(jìn)nSOD和PRDX6表達(dá)比較 見(jiàn)圖1、2。MnSOD和PRDX6主要位于細(xì)胞質(zhì)中，其陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色或棕褐色顆粒。DLBCL組MnSOD和PRDX6陽(yáng)性表達(dá)率為75%(45/60)和35%(21/60)，RHL組兩者陽(yáng)性表達(dá)率為50%(10/20)和5%(1/20)，因此DLBCL組MnSOD和PRDX6陽(yáng)性表達(dá)率高于RHL組(χ2=4.364、5.350，P=0.037、0.021)。

A：MnSOD表達(dá)呈陰性；B：MnSOD表達(dá)呈中等陽(yáng)性；C：MnSOD表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性

2.2 DLBCL患者臨床病理特征與MnSOD、PRDX6表達(dá)的關(guān)系 見(jiàn)表1。DLBCL患者臨床分期、B癥狀、IPI評(píng)分與MnSOD和PRDX6表達(dá)有關(guān)，臨床分期越晚(Ⅲ-Ⅳ期)，有B癥狀，IPI評(píng)分越高(3～5分)，兩者陽(yáng)性表達(dá)率越高(均P<0.05)。患者年齡、性別及LDH水平與兩者表達(dá)無(wú)相關(guān)性(均P>0.05)。

表1 DLBCL患者臨床病理特征與MnSOD、PRDX6表達(dá)的關(guān)系(例)

2.3 MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中的表達(dá)情況 見(jiàn)表2。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果表明，兩者在DLBCL組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.133，P=0.019)。

表2 MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中的表達(dá)情況(例)

3 討 論

DLBCL是一組起源于B淋巴細(xì)胞的惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為高度侵襲性和異質(zhì)性。其病因目前尚不完全清楚。有研究表明，氧化/抗氧化失衡在淋巴瘤的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。本研究主要探討MnSOD和PRDX6作為抗氧化應(yīng)激的蛋白，在DLBCL組織中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

MnSOD是抗氧化酶家族中的一種，被認(rèn)為是哺乳動(dòng)物最重要的超氧化物岐化酶(SOD)[10]。其主要功能是通過(guò)歧化反應(yīng)催化O2-生成H2O2和O2，從而保護(hù)細(xì)胞免受超氧陰離子的損害[5-6]。MnSOD基因定位于染色體6q25，這一位點(diǎn)恰是淋巴瘤、黑色素瘤、卵巢癌等多種腫瘤染色體畸變的好發(fā)部位[11]。因此，這一特殊基因位點(diǎn)可能是MnSOD在DLBCL組織中高表達(dá)的原因。Oberley等[12]研究發(fā)現(xiàn)，MnSOD在卵巢癌、胃癌和結(jié)腸直腸癌中表達(dá)上調(diào)，推測(cè)這是白細(xì)胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等激活了MnSOD表達(dá)的結(jié)果，并且認(rèn)為MnSOD是一種新的腫瘤抑制因子。也有研究[13]發(fā)現(xiàn)，MnSOD在胃癌、結(jié)直腸癌等腫瘤中表達(dá)升高，提示MnSOD與腫瘤的高侵襲性及耐藥性密切相關(guān)，并且預(yù)后不良。MnSOD不僅在不同腫瘤中表達(dá)不一，而且在同一種腫瘤不同時(shí)期的表達(dá)也不盡一致。Dhar等[14]在皮膚癌的研究中發(fā)現(xiàn)，MnSOD在早期呈低表達(dá)，而在晚期呈高表達(dá)。在某些晚期腫瘤中，尤其是一些轉(zhuǎn)移性腫瘤中，MnSOD幾乎呈高表達(dá)，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移[13，15]。目前，MnSOD在淋巴瘤中的報(bào)道較少，一項(xiàng)關(guān)于淋巴瘤的研究[16]表明MnSOD在T細(xì)胞淋巴瘤中表達(dá)升高，并且加速了腫瘤的形成，但腫瘤大小并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Tome等[17]在DLBCL患者預(yù)后的研究中發(fā)現(xiàn)，MnSOD與患者不良預(yù)后呈正相關(guān)。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)MnSOD在DLBCL組織中陽(yáng)性表達(dá)率為75%，這可能是因?yàn)檠装Y引起氧化應(yīng)激并釋放大量炎癥因子，通過(guò)調(diào)控氧化應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路使MnSOD其發(fā)揮抗氧化作用。此外，DLBCL患者臨床分期越晚，有B癥狀，IPI評(píng)分越高，MnSOD的表達(dá)就越高，提示MnSOD可能參與了DLBCL的進(jìn)展。

PRDX6是過(guò)氧化物酶家族中的一員，在抗氧化、調(diào)節(jié)和介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)等過(guò)程中起重要作用[18]。PRDX6可以利用自身谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性來(lái)清除機(jī)體內(nèi)的H2O2以及其他氫過(guò)氧化物，將其還原為H2O和O2，也可以利用磷脂酶A2活性減少磷脂氫過(guò)氧化物，調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡程度。文獻(xiàn)[19-20]報(bào)道，PRDX6在肺癌、乳腺癌、皮膚癌等腫瘤中表達(dá)增高，并與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。Kuusisto等[21]在DLBCL中的研究中發(fā)現(xiàn)，PRDX6在DLBCL組織中高表達(dá)，并且是獨(dú)立于IPI的預(yù)后因素。本研究中，PRDX6在DLBCL組織中表達(dá)升高，與其他文獻(xiàn)報(bào)道一致，并且其表達(dá)與臨床分期、B癥狀、IPI評(píng)分相關(guān)，因此可推測(cè)PRDX6也參與了DLBCL的發(fā)生與發(fā)展。由于與IPI評(píng)分相關(guān)，可以推測(cè)PRDX6與DLBCL的預(yù)后相關(guān)，但仍需進(jìn)一步隨訪來(lái)驗(yàn)證。另外，由于PRDX6可促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子生成，可以作為潛在的腫瘤標(biāo)志物，具有較為廣闊的臨床前景。

本研究還發(fā)現(xiàn)，MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，考慮可能是由于多種調(diào)控機(jī)制交叉影響及其本身抗氧化作用使兩者發(fā)揮協(xié)同作用。

綜上所述，MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中均呈高表達(dá)，與臨床分期、B癥狀、IPI評(píng)分相關(guān)，可能參與了DLBCL的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程，但具體作用機(jī)制及其與患者預(yù)后的分析仍需進(jìn)一步研究，以便為今后 DLBCL的診治提供新的思路。