馬顯平，張海斌

(1.陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院腫瘤放療科，陜西 咸陽(yáng) 712000；2.銅川市人民醫(yī)院普外胸外科，陜西 銅川 727000)

食管癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤，長(zhǎng)期占惡性腫瘤死亡的前5位[1-2]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了一些新的治療方法及新的治療藥物，但是食管癌患者5年生存率一直維持在20%左右[3]。放化療為中晚期食管癌的主要治療方法，但是除了治療過(guò)程中的不良反應(yīng)外，腫瘤局部未控率和復(fù)發(fā)率也一直比較高。因此，尋找影響食管癌病情與預(yù)后的分子標(biāo)志物并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行深入研究，對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要作用[4-5]?，F(xiàn)代研究表明食管癌的發(fā)生是環(huán)境因素與宿主因素相互作用的結(jié)果，也是多階段、多基因變化的過(guò)程。叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1(Forkhead box protein M1，F(xiàn)OXM1)可通過(guò)與下游基因的啟動(dòng)子結(jié)合，從而調(diào)控下游基因轉(zhuǎn)錄，參與機(jī)體DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)控、染色質(zhì)組裝等多個(gè)過(guò)程[6-7]。增殖細(xì)胞原核抗(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是反映細(xì)胞增殖的主要生物指標(biāo)之一，其表達(dá)水平與細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移水平密切相關(guān)[8-10]。本研究探討FOXM1和PCNA在食管癌組織中的表達(dá)與放化療預(yù)后的相關(guān)性，希望為明確食管癌的發(fā)生機(jī)制與改善放化療預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年6月至2020年6月于本院行同期放化療的86例食管癌患者作為研究對(duì)象。其中，男性46例，女性40例；平均年齡(59.38±9.47)歲；平均病灶最大直徑(5.28±0.28)cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例；組織學(xué)高分化28例，低分化22例，中分化36例；臨床分期Ⅱ期42例，Ⅲ期28例，Ⅳ期16例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均行病理檢查確診為食管鱗狀細(xì)胞癌，具有完整的病灶組織標(biāo)本與癌旁組織本標(biāo)(與癌灶距離≥5 cm)；年齡18～80歲；未合并其他惡性腫瘤；臨床分期Ⅱ期及以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：懷孕或母乳喂養(yǎng)期間婦女；對(duì)本研究放化療藥物過(guò)敏者；合并嚴(yán)重內(nèi)科疾病者?；颊吆炇鹆酥橥鈺?shū)。本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了本研究。

1.2 FOXM1和PCNA表達(dá)檢測(cè) 取所有患者癌組織標(biāo)本與癌旁組織標(biāo)本，即刻置于液氮中-80 ℃保存。制成原位雜交標(biāo)本，暴露特異性片段，0.1% Tritoon-100和0.1 mol/L PBS溶液孵育30 min，然后室溫固定10 min。每張切片加入20 μl雜交液(FOXM1、PCNA雜交液)，42 ℃雜交過(guò)夜。使用DAB進(jìn)行顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，顯微鏡下觀察。經(jīng)Image Pro Plus 6.0軟件分析，計(jì)數(shù)各視野總細(xì)胞數(shù)和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算標(biāo)本的FOXM1和PCNA陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)。

1.3 放化療方法 所有患者都采用相同的放化療方案。放療方案：使用瓦里安直線(xiàn)加速器，采用三維適形放療技術(shù)。計(jì)劃靶區(qū)給予劑量2 Gy/次，5次/周，共5周。完成后縮靶至計(jì)劃腫瘤靶區(qū)，推量至60 Gy。化療方案：放療第1天為順鉑60 mg/m2，第1～4天為氟尿嘧啶500 mg/m2，4周后重復(fù)該化療方案。

1.4 調(diào)查資料 調(diào)查所有患者的病理資料，包括性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分化、病灶最大直徑、臨床分期。同時(shí)隨訪(fǎng)到2020年12月1日，調(diào)查患者的生存與死亡情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行t檢驗(yàn)或方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson法，影響因素分析采用Logistic回歸模型，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 食管癌組織與癌旁組織FOXM1和PCNA表達(dá)水平比較 見(jiàn)表1(圖1)。食管癌組織FOXM1和PCNA表達(dá)水平高于癌旁組織(均P<0.05)。

表1 食管癌組織與癌旁組織FOXM1和PCNA表達(dá)水平比較

A：癌組織FOXM1；B：癌旁組織FOXM1；C：癌組織PCNA；D：癌旁組織PCNA

2.2 不同臨床病理特征食管癌患者FOXM1和PCNA表達(dá)水平比較 見(jiàn)表2。在食管癌患者中，不同組織學(xué)分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑患者的FOXM1和PCNA表達(dá)水平對(duì)比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表2 不同臨床病理特征食管癌患者FOXM1和PCNA表達(dá)水平比較

2.3 食管癌患者放化療預(yù)后與FOXM1和PCNA表達(dá)水平相關(guān)性分析 所有患者經(jīng)過(guò)放化療療治后，隨訪(fǎng)到2020年12月1日，86例患者死亡21例，病死率為24.4%。Pearson分析顯示，食管癌患者放化療預(yù)后與FOXM1和PCNA表達(dá)水平具有相關(guān)性(r=0.542、0.443，均P<0.05)。

2.4 食管癌患者放化療預(yù)后影響因素分析 見(jiàn)表3。Logistic回歸模型顯示，F(xiàn)OXM1和PCNA表達(dá)水平均為影響食管癌患者放化療預(yù)后的重要因素(均P<0.05)。

表3 食管癌患者放化療預(yù)后影響因素分析

3 討 論

我國(guó)是食管癌高發(fā)區(qū)，主要集中在太行山區(qū)，呈同心圓向外分布。該病的病因包括食物霉菌污染、微量營(yíng)養(yǎng)素缺乏、遺傳因素等，但具體的發(fā)病機(jī)制還不明確。為探討FOXM1和PCNA在食管癌組織中的表達(dá)及與放化療預(yù)后的相關(guān)性，本研究選取86例食管癌患者展開(kāi)研究。目前食管癌主要的治療手段為手術(shù)切除治療、化療、放療等，但是預(yù)后依然比較差[11-13]。隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷深入，積極進(jìn)行分子靶點(diǎn)分析已成為食管癌的研究熱點(diǎn)。

本研究顯示，食管癌組織FOXM1和PCNA表達(dá)水平都高于癌旁組織；不同組織學(xué)分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑食管癌患者的FOXM1和PCNA表達(dá)水平對(duì)比差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從機(jī)制上分析，F(xiàn)OXM1是FOX 轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、代謝、增殖與分化，在惡性腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)。FOXM1能夠促進(jìn)血管生成，為腫瘤的增殖提供大量養(yǎng)分，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[14]。李佩琴等[15]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXM1在食管鱗癌中存在異常表達(dá)，經(jīng)研究證實(shí)FOXM1與食管鱗癌細(xì)胞分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后有很大聯(lián)系，能為食管鱗癌的診治提供依據(jù)，與本研究結(jié)果基本一致。PCNA是一種相對(duì)分子量為3.6×104的酸性核蛋白，存在于細(xì)胞核內(nèi)不同部位，其合成與表達(dá)與細(xì)胞增殖狀態(tài)密切相關(guān)。PCNA也是細(xì)胞核內(nèi)合成DNA所必需的一種核蛋白，是反映細(xì)胞增殖的主要生物指標(biāo)之一，可參與調(diào)節(jié)DNA復(fù)制?，F(xiàn)代研究[16-17]顯示，PCNA在多種惡性腫瘤呈現(xiàn)高表達(dá)，可通過(guò)對(duì)多種基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控實(shí)現(xiàn)G2/M和G1/S轉(zhuǎn)換，推動(dòng)有絲分裂的進(jìn)行，可通過(guò)調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響腫瘤細(xì)胞的遷移。

食管鱗癌主要從基底細(xì)胞過(guò)度增生、不典型增生進(jìn)而發(fā)展為原位癌，進(jìn)一步發(fā)展為浸潤(rùn)型食管鱗狀細(xì)胞癌[18]。食管癌患者行根治性同期放化療后容易出現(xiàn)各種不良反應(yīng)，且沒(méi)有從根本上提高患者的預(yù)后生存率。本研究中，所有患者經(jīng)過(guò)放化療治療后，隨訪(fǎng)到2020年12月1日，86例患者中死亡21例，病死率為24.4%；Pearson分析顯示，食管癌患者放化療預(yù)后與FOXM1、PCNA表達(dá)水平具有相關(guān)性；Logistic回歸模型顯示，F(xiàn)OXM1、PCNA表達(dá)水平都為影響食管癌患者放化療預(yù)后的重要因素。從機(jī)制上分析，F(xiàn)OXM1可通過(guò)轉(zhuǎn)錄激活多種信號(hào)通路，作用于食管上皮的相關(guān)基因，引起食管上皮細(xì)胞癌變[19]；PCNA可在食管上皮癌變不同階段中起重要作用，其高表達(dá)可視為惡性腫瘤的危險(xiǎn)預(yù)后因素[20]。

綜上所述，F(xiàn)OXM1和PCNA在食管癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，與患者的病理特征存在相關(guān)性，也是影響患者放化療預(yù)后的重要影響因素。然而，本研究沒(méi)有進(jìn)行1年或者多年生存率分析，且納入患者數(shù)量比較少，將在后續(xù)研究中加以完善。