梁灼源 韋鋒 歐陽楚君 馮明亮 郭靜靜 盧瑞榮

[摘要]目的探討血管緊張素原（AGT）基因 M235T 位點多態(tài)性與高尿酸血癥（HUA）易感性的關(guān)系。方法以2018年5月至2020年4月江門市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科312例 HUA 患者為高尿酸血癥組，并以同期286例原發(fā)性痛風(fēng)患者為痛風(fēng)組，357例正常人群為正常組。比較三組的 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性，分析 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性與 HUA、痛風(fēng)發(fā)生的關(guān)系;根據(jù) HUA 治療效果將高尿酸血癥組分為有效組及無效組，比較兩組的AGT基因 M235T位點多態(tài)性，分析AGT基因 M235T位點多態(tài)性與 HUA 治療效果的關(guān)系。結(jié)果高尿酸血癥組、痛風(fēng)組和正常組的 MM、MT、TT 實際頻數(shù)與理論頻數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P >0.05）;高尿酸血癥組、痛風(fēng)組的 AGT 基因 M235T 位點 MT、TT 檢出率高于正常組（ P <0.05）;二元 logistic 回歸分析顯示，AGT 基因 M235T 位點 MT、TT 型是 HUA 及痛風(fēng)發(fā)生的危險因素， MM 型為保護因素（ P <0.05）。有效組的 AGT 基因 M235T 位點 MM 型檢出率高于無效組（ P <0.05）;二元 logistic 回歸分析顯示， AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性不是影響 HUA 治療效果的相關(guān)因素（ P >0.05）。結(jié)論 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性是影響 HUA 及痛風(fēng)發(fā)生的危險因素，但與 HUA 治療效果無關(guān)。

[關(guān)鍵詞]血管緊張素原基因;基因多態(tài)性;高尿酸血癥;痛風(fēng);易感性

[中圖分類號] R692.9;R589.7? [文獻標識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2021）23-0195-04

Analysis? of the relationship between angiotensinogen gene polymorphism and susceptibility of hyperuricemiaLIANG? Zhuoyuan??? WEI? Feng??? OUYANG? Chujun??? FENG? Mingliang??? GUO? JingjingLU? Ruirong

Department of Rheumatology and Immunology， Jiangmen Central Hospital， Guangdong， Jiangmen 529000， China

[Abstract] Objective To explore the relationship between the M235T polymorphism of the angiotensinogen （AGT） gene and the susceptibility of hyperuricemia （HUA）. Methods A total of 312 HUA patients admitted to the Department of Rheumatology and Immunology of Jiangmen Central Hospital from May 2018 to April 2020 were selected as the hyperuricemia group， and 286 patients with primary gout in the same period were selected as the gout group， and 357 normal people were regarded as the normal group. The M235T polymorphism of the AGT gene was compared among the three groups， and the relationship between the M235T polymorphism of the AGT gene and the occurrence of HUA and gout was analyzed. According to the HUA treatment effect， the hyperuricemia group was divided into the effective group and the ineffective group， the M235T polymorphism of the AGT gene was compared between the two groups， and the relationship between the M235T polymorphism of the AGT gene and HUA treatment effect was analyzed. Results There were no statistically significant differences between the actual frequency and theoretical frequency of MM， MT and TT genotypes among the hyperuricemia group， the gout group and the normal group （P >0.05）. The detection rates of MT and TT genotypes of AGT M235T in the hyperuricemia group and gout group were higher than those in the normal group （P <0.05）. Binary logistic regression analysis showed that MT and TT genotypes of AGT M235T were risk factors for the occurrence of HUA and gout， and MM genotype was a protective factor （P <0.05）. The detection rate of the MM genotype of AGT M235T in the effective group was higher than that in the ineffective group （P <0.05）. Binary logistic regression analysis showed that the M235T polymorphism of the AGT gene was not a related factor affecting HUA treatment effect （P >0.05）. Conclusion The M235T polymorphism of the AGT gene is a risk factor affecting the occurrence of HUA and gout， but it did not affect the effect of HUA treatment.

[Key words] Angiotensinogen gene; Gene polymorphism; Hyperuricemia; Gout; Susceptibility

高尿酸血癥（HUA）是嘌呤代謝紊亂所致疾病，多因腎臟及腸道排泄障礙或尿酸生成過多所致，患者會出現(xiàn)痛風(fēng)性急性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石沉積等癥狀，嚴重影響其日常生活[1]。既往研究指出， HUA 發(fā)生除了與患者日常飲食、高血壓、機體代謝紊亂等有關(guān)外，還與遺傳易感性相關(guān)[2]。血管緊張素原（AGT）基因可通過調(diào)控血管緊張素Ⅰ、Ⅱ合成，以影響腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活，進而導(dǎo)致腎臟功能異常[3]。筆者認為，AGT 基因多態(tài)性或可通過影響腎臟功能來抑制血尿酸的排泄，但目前有關(guān)其與 HUA 易感性的研究尚處于探索階段。故本研究旨在探究 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性與 HUA 易感性的關(guān)系，為該疾病的防治提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料

以2018年5月至2020年4月江門市中心醫(yī)院的312例 HUA 患者為高尿酸血癥組，HUA 的診斷標準參照《中國高尿酸血癥相關(guān)疾病診療多學(xué)科專家共識》[4]，血尿酸≥420 Ummol/L。并以同期286例原發(fā)性痛風(fēng)患者為痛風(fēng)組，痛風(fēng)的診斷標準參照《中國高尿酸血癥相關(guān)疾病診療多學(xué)科專家共識》，357例正常人群為正常組。高尿酸血癥組中，男183例，女129例;年齡29～57歲，平均（45.68±6.32）歲;體重指數(shù)18.9～26.1 kg/m2，平均（22.25±1.38）kg/m2;合并基礎(chǔ)疾病：高血壓105例、糖尿病80例、冠心病65例、兩種及以上62例;吸煙史75例。痛風(fēng)組中，男171例，女115例;年齡34～60歲，平均（46.05±7.17）歲;體重指數(shù)17.6～26.8 kg/m2，平均（22.09±1.52）kg/m2;合并基礎(chǔ)疾?。焊哐獕?1例、糖尿病72例、冠心病58例、兩種及以上65例;吸煙史63例。正常組中男195例，女162例;年齡31～59例，平均（45.19±6.13）歲;體重指數(shù)18.2～27.2 kg/m2，平均（22.60±1.68）kg/m2;吸煙史86例。三組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2納入及排除標準

納入標準：①經(jīng)實驗室檢查確診，符合相關(guān)疾病診斷標準;②患者均知曉本研究目的，且已簽署入組同意書。

排除標準：①惡性腫瘤者;②腫瘤、腎臟疾病等導(dǎo)致的繼發(fā)性痛風(fēng)者;③入組前3個月內(nèi)有服用過使血尿酸升高藥物者;④嚴重全身系統(tǒng)性疾病患者;⑤存在苯溴馬隆治療禁忌證者;⑥合并嚴重腎功能不全及腎結(jié)石者;⑦合并糖尿病患者;⑧合并高脂血癥患者。

1.3方法

1.3.1 AGT 基因多態(tài)性檢測（1）DNA 提?。翰杉惺茉囌咄庵莒o脈血標本5 ml，EDTA 抗凝處理，應(yīng)用 DNA 抽提試劑盒（天根生物科技有限公司），按照使用說明書，提取患者 DNA，并檢測 DNA 濃度及提取質(zhì)量。（2）多態(tài)性分析：Easy Taq PCR supermix（北京全式金生物技術(shù)有限公司，批號：20180311），應(yīng)用TProfessoinal Gradient 96 PCR 儀（德國 BIOMETRA 公司）對 AGT 基因第二個外顯子目的片段采用 PCR-RELP 法擴增，基因引物序列[生工生物（上海）有限公司合成]：上游引物5'-GATGCGCACAAGGTCCTGTG-3';下游引物5'-CAGGGTGCTGTCCACACTGGACCC-3'。其擴增產(chǎn)物采用限制性內(nèi)切酶TthⅢⅠ在65℃下進行酶切4 h，使用2%瓊脂糖凝膠（西班牙Biowest公司，批號：20180534），應(yīng)用 ECP3000三恒多用電泳儀（北京市六一儀器廠）、AlphaImager凝膠成像儀（美國 Alpha Innotech公司）對酶切產(chǎn)物進行電泳分離，并通過 BIO-RAD 公司的紫外分光光度儀進行觀察?；蛐桶ǎ孩偌兒闲停∕M）：酶切位點在 AGT 等位基因上，產(chǎn)物163 bp;②純合型（TT）：第二個外顯子的核苷酸由 T 變?yōu)?C，產(chǎn)物140 bp;③雜合型（MT）：產(chǎn)物163 bp 和140 bp 均存在。

1.3.2臨床療效分組根據(jù)《高尿酸血癥和痛風(fēng)治療的中國專家共識》[5]對 HUA 患者給予苯溴馬?。ɡド烬垷羧鸬现扑幱邢薰?，國藥準字 J20180056）治療，初始劑量為50 mg/d，餐后服用，用藥1周后增加藥量至75～100 mg/d，連續(xù)治療20 d。并限制高嘌呤食物攝入，嚴格控制飲食總熱量，飲水量>2000 ml/d，禁忌飲酒，以促進尿酸排泄。根據(jù)治療后血尿酸濃度將高尿酸血癥組分為有效組（≤300 Ummol/L）及無效組（>300 Ummol/L）。

1.4觀察指標

①比較高尿酸血癥組、痛風(fēng)組、正常組的 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性，分析 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性與 HUA、痛風(fēng)發(fā)生的關(guān)系。②比較有效組及無效組的 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性，分析 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性與 HUA 治療效果的關(guān)系。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用 SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理本研究所得數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[n （%）]表示，采用χ2檢驗，計量資料經(jīng)正態(tài)檢驗后以（x ±s）表示，采用獨立樣本t 檢驗;采用二元 logistic 回歸分析 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性與 HUA、痛風(fēng)發(fā)生及 HUA 治療效果的關(guān)聯(lián)。 P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗

高尿酸血癥組、痛風(fēng)組和正常組的 MM、MT、 TT 實際頻數(shù)與理論頻數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（ P >0.05），提示三組 AGT 基因 M235T 位點基因型分布符合 Hardy-Weinberg 平衡。見表1。

2.2 AGT基因M235T位點多態(tài)性與HUA、痛風(fēng)發(fā)生的單因素分析

高尿酸血癥組、痛風(fēng)組的 AGT 基因 M235T 位點 MT、TT檢出率均高于正常組（ P <0.05）。見表2。

2.3 AGT基因M235T位點多態(tài)性與HUA、痛風(fēng)發(fā)生的二元logistic回歸分析

AGT 基因 M235T 位點 MM 型是 HUA 及痛風(fēng)發(fā)生的保護因素，MT、TT 型為危險因素（P <0.05）。見表3。

2.4 AGT基因M235T位點多態(tài)性與HUA治療效果的單因素分析

有效組的 AGT 基因 M235T 位點 MM 檢出率高于無效組（ P <0.05）。見表4。

2.5 AGT基因M235T位點多態(tài)性與HUA治療效果的二元logistic回歸分析

AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性不是影響 HUA 治療效果的相關(guān)因素（ P >0.05）。見表5。

3討論

痛風(fēng)患者多表現(xiàn)為關(guān)節(jié)劇烈疼痛、痛風(fēng)石等癥狀，多因大量尿酸鹽結(jié)晶沉積于關(guān)節(jié)所致。原發(fā)性痛風(fēng)是指由于單鈉尿酸鹽在關(guān)節(jié)及周圍結(jié)締組織沉積，誘導(dǎo)的晶體性關(guān)節(jié)炎[6]。相關(guān)研究指出，除了后天因素外，遺傳因素也是導(dǎo)致痛風(fēng)及 HUA 發(fā)生的重要原因[7]。HUA 可破壞血小板及其他體細胞，損傷血管內(nèi)皮功能，增加心血管疾病發(fā)生風(fēng)險[8]，提示 HUA 的發(fā)生或與血管相關(guān)因子有關(guān)。AGT 基因位于染色體1q42～1q43，其 M235T 位點多態(tài)性是指密碼子的第235位由蘇氨酸轉(zhuǎn)換為蛋氨酸，該轉(zhuǎn)換可能會影響 AGT 的表達[9]。AGT 是血管緊張素的前提物質(zhì)，在腎素的作用下可生成血管緊張素Ⅰ，再經(jīng)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶分解為血管緊張素Ⅱ，影響心血管活動和凝血系統(tǒng)功能，進而提高心血管疾病的易感性[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥組、痛風(fēng)組的 AGT 基因 M235T 位點 MT、TT 檢出率高于正常組，說明 HUA 及痛風(fēng)患者均存在 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性的現(xiàn)象。提示 HUA 及痛風(fēng)的發(fā)生或與 AGT 基因 M235T 位點基因型相關(guān)。因此，本研究經(jīng)進一步分析發(fā)現(xiàn)，AGT 基因 M235T 位點 MT、TT 型是 HUA 及痛風(fēng)發(fā)生的危險因素，MM 型為保護因素，說明 HUA 及痛風(fēng)的發(fā)生與 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性有關(guān)。這可能是因為 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性會減少機體血液中血管緊張素酶原、血管緊張素酶水平，影響患者全身小血管及腎臟功能，進而導(dǎo)致血尿酸水平升高[11]。

HUA 病情持續(xù)可引起尿酸鹽晶沉積在體關(guān)節(jié)及周圍軟組織，是誘發(fā)痛風(fēng)的生化基礎(chǔ)。且 HUA 會影響腎臟功能，引發(fā)慢性腎病[12-13]。故對 HUA 患者給予降尿酸治療對于延緩疾病進展至關(guān)重要。目前，多采用排尿酸藥物（苯溴馬隆等）治療 HUA，可降低機體血尿酸濃度，但不同患者的治療效果不盡相同[14]。筆者認為可能與基因易感性有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，有效組的 AGT 基因 M235T 位點 MM 檢出率高于無效組，說明有效組的 M235T 位點基因突變發(fā)生率較低。研究指出，血管緊張素不僅具有較強的血管活性，還能影響腎組織的血流動力學(xué)，而 AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性可抑制血管緊張素生成而影響腎臟功能，可能影響 HUA 治療效果[15]。但本研究二元 logistic 回歸分析顯示，AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性與 HUA 治療效果無關(guān)，這可能與有效組及無效組的人數(shù)比例失衡有關(guān)，故后期需進一步探究其與 HUA 治療效果的關(guān)系。

綜上所述，AGT 基因 M235T 位點多態(tài)性是影響 HUA 及痛風(fēng)發(fā)生的危險因素，但與 HUA 治療效果無關(guān)。

[參考文獻]

[1]李瑞，秦麗巖，姚華，等.URAT1基因多態(tài)性與哈薩克族人群高尿酸血癥發(fā)病影響因素的交互作用[J].山東醫(yī)藥，2018，58（30）：5-8.

[2]陶金輝，唐江平，程苗，等.P2X7R 基因 rs1621388多態(tài)性與痛風(fēng)易感性的關(guān)聯(lián)研究[J].中華疾病控制雜志，2017，21（7）：58-61，96.

[3]Lin R，Lei Y，Yuan Z，et al.Angiotensinogen Gene M235T and T174M Polymorphisms and Susceptibility of Pre-Eclampsia： A Meta-Analysis[J].Annals of Human Genetics，2015，76（5）：377-386.

[4]高尿酸血癥相關(guān)疾病診療多學(xué)科共識專家組.中國高尿酸血癥相關(guān)疾病診療多學(xué)科專家共識[J].中華內(nèi)科雜志，2017，56（3）：235-248.

[5]中華醫(yī)學(xué)會內(nèi)分泌學(xué)分會.高尿酸血癥和痛風(fēng)治療的中國專家共識[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2013，29（11）：913-920.

[6]Zhou Z，Li Z，Wang C， et al.Common variants in the SLC28A2 gene are associated with serum uric acid level and hyperuricemia and gout in Han Chinese[J].Hereditas，2019，156（1）：156.

[7]魏曉珠，蘇維，劉愛勝，等.MTHFR 基因 C677T 位點單核苷酸多態(tài)性與深圳地區(qū)原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)性研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2019，27（1）：12-14.

[8]Zhou Y，Zhao M，Pu Z ，et al .Relationship between oxidative stress and inflammation in hyperuricemia：Analysis based on asymptomatic young patients with primary hyperuricemia[J].Medicine，2018，97（49）：e13108.

[9]羅蘭，何永蜀，陳元曉，等.云南彝族男性 AT1R A1166C、AGT M235T 多態(tài)性及血生化指標與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，37（5）：42-45.

[10]袁倩，毛以林，李杰，等.湖南地區(qū)人群早發(fā)冠心病血瘀證與 AGT 基因多態(tài)性的關(guān)系[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，17（4）：58-61.

[11]高艷華，伍人康，高柳冰.SLC2A9基因 rs2241480位點 T/C 多態(tài)性與深圳地區(qū)高尿酸血癥之間相關(guān)性[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2019，27（7）：792-794.

[12]王云，潘玉陽，王龍，等.原發(fā)性高尿酸血癥與 MTHFR 基因 rs1801133位點多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性研究[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，37（10）：1170-1173.

[13]瑪依娜·卡哈爾，余家會，李瑞，等.高尿酸血癥患者血清 ABCG2基因 rs2231142位點單核苷酸多態(tài)性觀察[J].山東醫(yī)藥，2019，59（6）：30-34.

[14]Kaczmarczyk M，Kuprjanowicz A，?oniewska B，et al. Epistatic interaction between common AGT G（6）A （rs5051） and AGTR1 A1166C （rs5186） variants contributes to variation in kidney size at birth[J].Gene，2015，572（1）：72-78.

[15]高英，王情，郭紅，等.外周血 ACE 基因 I/D，AGT 基因 M235T 多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2020，60（34）：15-18，37.

（收稿日期：2021-05-07）