羊燕群 王子威 鄭澤娜 張靜 張均倡 田廣俊

[摘要]目的觀察白術(shù)對(duì)黑變病結(jié)腸黏膜的治療作用。方法將60只實(shí)驗(yàn)大鼠分為正常對(duì)照組、模型組、白術(shù)低劑量組、白術(shù)中劑量組、白術(shù)高劑量組，每組各12只，給予相應(yīng)生大黃液及白術(shù)液，觀察各組大鼠結(jié)腸黏膜一般情況及病理組織學(xué)改變。結(jié)果隨著白術(shù)劑量升高，肉眼可見(jiàn)結(jié)腸黏膜著色呈逐漸變淺趨勢(shì)，白術(shù)高劑量組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05），顯微鏡下見(jiàn)黏膜層棕褐色顆粒狀物質(zhì)沉積亦隨著白術(shù)劑量升高而相應(yīng)變化。結(jié)論白術(shù)可改善結(jié)腸黑變病黏膜的黑變程度，減少結(jié)腸黏膜蒽醌類(lèi)物質(zhì)沉積，改善程度與白術(shù)液劑量呈正相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]白術(shù);結(jié)腸黑變病;結(jié)腸黏膜;病理組織學(xué)改變

[中圖分類(lèi)號(hào)] R285? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A?? [文章編號(hào)]2095-0616（2021）23-0027-04

Experimental observation of Baizhu regulating mucosal state of melanosis coli

YANGYanqun1 WANGZiwei1 ZHENGZe'na1 ZHANGJing1 ZHANGJunchang1 TIANGuangjun

1. Department of Traditional Chinese Medicine， Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Guangdong， Shenzhen 518101， China;2. Zhuhai Branch of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guangdong， Zhuhai 519015， China

[Abstract] Objective To observe the therapeutic effect of Baizhu on mucosa of patients with melanosis coli （MC）. Methods The 60 experimental rats were divided into the normal control group， model group， Baizhu low- dose group， Baizhu medium-dose group and Baizhu high-dose group，12 in each group. The corresponding rhubarb root and Dahuang liquid and Baizhu liquid were given， and the general conditions and histopathological changes of colon mucosa in each group were observed. Results With the increase of the dosage of Baizhu， the staining of colonic mucosa gradually became lighter with naked eyes， and there was a significant difference between the Baizhu high-dose group and the model group （P <0.05）. Microscopically， the deposition of brown granular substances in mucosal layer also changed correspondingly with the increase of the dosage of Baizhu. Conclusion Baizhu can improve the degree of melanosis of colon mucosa and reduce the deposition of anthraquinone in colon mucosa， and the improvement degree is positively correlated with the dose of Baizhu solution.

[Key words] Baizhu; Melanosis coli; Colon mucosa; Histopathological changes

隨著現(xiàn)代生活壓力增大及飲食結(jié)構(gòu)的改變，慢性便秘發(fā)病率逐年提高。使用蒽醌類(lèi)瀉劑導(dǎo)致的結(jié)腸黑變?。╩elanosiscoli， MC）隨著結(jié)腸鏡檢查的普及，其檢出率也逐年升高，且往往伴有息肉、慢性結(jié)腸炎，甚至與腫瘤的發(fā)生也有相關(guān)性[1]。結(jié)腸黑變病伴有的腹脹、便秘、排便無(wú)力的癥狀，在中醫(yī)理論中認(rèn)為是“虎狼之劑”誤下之后，脾虛氣弱、傷津耗液之癥，治療當(dāng)以健脾益氣、補(bǔ)液生津?yàn)橹蝿t。中藥白術(shù)具有健脾、益氣、養(yǎng)陰的作用，是 meta 分析出來(lái)最常用的治療便秘的中藥之一[2]。研究顯示白術(shù)或白術(shù)提取物對(duì)修復(fù)腸道黏膜、恢復(fù)腸道動(dòng)力有確切治療效果[3]。本研究旨在明確中藥白術(shù)對(duì)結(jié)腸黑變病的治療作用，并初探其對(duì)結(jié)腸黑變病治療作用的改善位點(diǎn)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1中藥制備項(xiàng)目所需白術(shù)（廣州至信，批號(hào)：190810）、生大黃（南城建洪，批號(hào)：1907004）一次性購(gòu)齊，所有藥材品質(zhì)符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版標(biāo)準(zhǔn)。

白術(shù)水煎液：取生白術(shù)飲片用蒸餾水浸泡0.5 h 后高火煎煮20 min，倒出煎液，12層紗布過(guò)濾，重復(fù)煎煮2次，合并濾液，濃縮為1 g/ml 濃度藥液。

生大黃液：取生大黃飲片經(jīng)70℃熱蒸餾水浸泡，過(guò)濾，提取為1 g/ml 濃度生大黃液。

以上藥液均4℃保存，當(dāng)天使用藥液加熱后降至40℃左右使用。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡 SD 大鼠180～220 g，雌雄各半，共60只，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)： SCXK 粵2018-0002）。

1.1.3主要設(shè)備顯微鏡（日本奧林巴斯 BX51T- PHD-J11），石蠟切片機(jī)（德國(guó)萊卡 RM2015）。? 1.1.4主要試劑蘇木精-伊紅染色液。

1.2方法

1.2.1分組與給藥將60只8周齡 SD 大鼠隨機(jī)分為五組：正常對(duì)照組、模型組、中藥組（低、中、高劑量組），每組各12只，按組別給予不同干預(yù)治療措施，實(shí)驗(yàn)周期為8周。正常對(duì)照組：自由進(jìn)食進(jìn)水，對(duì)照性灌胃蒸餾水1.5 ml/100 g 體重;模型組：予每日灌胃大黃液1.5 ml/100 g 體重;中藥組在造?；A(chǔ)上按照臨床分低、中、高劑量組，分別予0.3、0.6、1.2 g/100 g 體重白術(shù)水煎液灌胃。

1.2.2組織標(biāo)本采集在實(shí)驗(yàn)最后一天麻醉處死所有大鼠，將結(jié)腸標(biāo)本用冰生理鹽水清洗后腸黏膜層向上，平鋪于試驗(yàn)臺(tái)上，肉眼觀察盲腸近段結(jié)腸、中段結(jié)腸、遠(yuǎn)段結(jié)腸及回盲部并記錄結(jié)腸黏膜的黑變程度并評(píng)分。用冰生理鹽水反復(fù)沖洗腸內(nèi)容物后在大鼠盲腸端后結(jié)腸連續(xù)截取0.5 cm 結(jié)腸組織兩段，置于甲醛固定液中固定，繼續(xù)依次截取相同結(jié)腸組織置于液氮中保存待用。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1肉眼觀察結(jié)腸黏膜黑變病情況觀察標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[4]進(jìn)行肉眼下大體評(píng)分，顏色：淺紅色0分，淺褐色1分，暗褐色2分，深褐色3分;范圍：無(wú)黑變0分，盲腸1分，盲腸和部分近段結(jié)腸2分，全結(jié)腸3分;組織學(xué)大體評(píng)分為顏色評(píng)分與范圍評(píng)分之和。

1.3.2光鏡下觀察結(jié)腸黏膜黑變病情況通過(guò) HE 染色光鏡下觀察結(jié)腸組織病理學(xué)變化，比較各組大鼠結(jié)腸黑變病黏膜狀態(tài)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)用 SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用（x ±s）表示，各組間比較采用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)，兩組變量相關(guān)性分析用 Pearson 相關(guān)性分析，P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1肉眼觀察結(jié)腸黏膜黑變病情況

正常對(duì)照組：結(jié)腸黏膜側(cè)呈肉紅色，無(wú)黑變現(xiàn)象，整體光滑，結(jié)構(gòu)完整。模型組：盲腸及近端結(jié)腸可見(jiàn)條索狀黑色病變，向結(jié)腸遠(yuǎn)端逐漸變淺至不能看到。白術(shù)低、中、高劑量組：盲腸及近端結(jié)腸黏膜可見(jiàn)條索狀黑色病變，向結(jié)腸遠(yuǎn)端逐漸變淺至不能看到。隨著白術(shù)劑量升高，結(jié)腸黏膜著色呈逐漸變淺趨勢(shì)，黑變病評(píng)分與白術(shù)給藥劑量呈負(fù)相關(guān)（ P <0.05）。見(jiàn)表1及圖1。

2.2病理組織學(xué)觀察

病理組織學(xué)觀察見(jiàn)圖2。

3討論

MC 是結(jié)腸鏡下檢查發(fā)現(xiàn)結(jié)腸黏膜呈暗褐色花斑樣改變的一種病變。其發(fā)病原因和慢性便秘患者長(zhǎng)期服用含蒽醌類(lèi)成分的瀉劑有密切關(guān)系[5-6]。蒽醌苷類(lèi)藥物具有細(xì)胞毒性作用，可誘導(dǎo)結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生的凋亡小體被單核巨噬細(xì)胞吞噬后，通過(guò)基底膜小孔轉(zhuǎn)移到結(jié)腸黏膜固有層巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，由凋亡小體轉(zhuǎn)化為褐脂素或其他色素;大量巨噬細(xì)胞沉積在結(jié)腸黏膜固有層間質(zhì)內(nèi)，即表現(xiàn)為色素沉著[7]。市面上常見(jiàn)通便藥如大黃、蘆薈[8]、番瀉葉等中藥含有蒽醌類(lèi)物質(zhì)成分，長(zhǎng)期使用均有明確的導(dǎo)致 MC 發(fā)生的副作用[9-10]。有諸多文獻(xiàn)證據(jù)顯示 MC 與結(jié)腸息肉、間質(zhì)瘤、炎癥性疾病有直接關(guān)系，如可能影響 PI3K 等蛋白的表達(dá)，通過(guò) Ras 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路等調(diào)控結(jié)腸上皮細(xì)胞的增殖與凋亡，推動(dòng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移;誘導(dǎo)原癌基因 c-myc表達(dá)上調(diào)，增加結(jié)腸、直腸癌癥發(fā)生幾率等[11]。MC 在60歲以上老人或者年輕女性中的發(fā)病率較其他人群高[12-13]。而這部分人群也是最容易出現(xiàn)慢性便秘并依賴(lài)口服蒽醌類(lèi)瀉劑通便的人群。停止服用蒽醌類(lèi)瀉劑后大部分黑變結(jié)腸可在一定時(shí)間內(nèi)逆轉(zhuǎn)，但是其排便功能卻往往不能同步恢復(fù)，多數(shù)患者發(fā)展為進(jìn)一步的腹脹、便秘和排便困難，甚至出現(xiàn)嚴(yán)重的腸動(dòng)力障礙[14]。除了停止蒽醌類(lèi)瀉劑的服用，口服臨床常用的通便藥物改善癥狀，目前西醫(yī)內(nèi)外科對(duì) MC 及其伴隨的排便功能障礙尚無(wú)確定的治療方案[15]。

MC 的臨床癥狀主要是便秘，大便干結(jié)或不干結(jié)，排便費(fèi)力，或有腹脹、腹痛、便血等非特異性癥狀，屬于中醫(yī)“便秘”“腹脹”等范疇。有 meta 分析認(rèn)為中醫(yī)藥治療結(jié)腸黑變病在緩解癥狀、改善腸黏膜病理狀態(tài)方面療效明確，與西醫(yī)相比有一定優(yōu)勢(shì)[16]。夏婉等[17]認(rèn)為其病機(jī)為大腸傳導(dǎo)功能失司，與脾胃及腎關(guān)系密切。張喜珍等[18]認(rèn)為 MC 病機(jī)主要為氣陰兩虛，采用益氣養(yǎng)陰法口服加保留灌腸治療結(jié)腸黑變病有效。栗寧等[19]認(rèn)為 MC 需從“血瘀”論治，治以活血化瘀，輔以益氣養(yǎng)血。付敏軍等[20]認(rèn)為 MC 病位在腸，病機(jī)主要為腸燥津虧、脾胃虛弱及腎氣不足，治以滋陰潤(rùn)腸、補(bǔ)脾益腎。丁澤林等[21]認(rèn)為本病發(fā)病主要與肝、脾相關(guān)，臨床治療方面重在疏肝理氣、健運(yùn)脾胃，佐以滋陰潤(rùn)腸、活血化瘀之法。不論哪種病機(jī)理論，MC 的臟腑歸經(jīng)總不離脾臟，病機(jī)都有“脾虛”參與其中。

白術(shù)性溫，味苦、甘，歸脾、胃經(jīng)，主健脾益氣。清代陳修園《神農(nóng)本草經(jīng)讀》認(rèn)為：“白術(shù)，此為脾之正藥。”清代張志聰《本經(jīng)崇原》認(rèn)為：“白術(shù)氣味甘溫，質(zhì)多脂液，乃調(diào)和脾土之藥也。”臨床應(yīng)用中，白術(shù)燥而作潤(rùn)、溫而能和，是治療便秘和 MC 的要藥?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)白術(shù)可通過(guò)調(diào)節(jié)水通道蛋白增加大便含水量從而提高結(jié)腸炭末推進(jìn)率[22]。并能改善脾虛證大鼠腸道菌群，有利于腸道菌群的平衡[23]。白術(shù)還能升高“瀉劑結(jié)腸”大鼠結(jié)腸組織中 c-Kit 含量而恢復(fù)其排便功能[24]。白術(shù)提取物還能多靶點(diǎn)修復(fù)腸道黏膜[25]。在 meta 分析中，白術(shù)是排第一位的治療結(jié)腸黑變病的中藥。

本實(shí)驗(yàn)觀察到白術(shù)液高劑量時(shí)大鼠結(jié)腸黏膜的棕褐色沉積物明顯減少，結(jié)腸黑變病評(píng)分隨著白術(shù)液劑量的升高而降低，顯示白術(shù)對(duì)黑變病結(jié)腸黏膜的改善修復(fù)程度與白術(shù)液的劑量呈現(xiàn)正性量效關(guān)系。因此，白術(shù)作為治療慢性便秘中的主藥，也是便秘諸型均可用到的“百搭”中藥，對(duì)結(jié)腸黑變病的黏膜狀態(tài)改善是有明確治療作用的。但是其有效性是否會(huì)繼續(xù)隨用量升高而持續(xù)升高，其最佳使用劑量是多少，是否在隨著劑量提高過(guò)程中，出現(xiàn)其他毒副作用，且其改善 MC 的作用機(jī)制與上皮細(xì)胞修復(fù)、神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)還是腸道菌群改善有關(guān)，尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究來(lái)逐步明確。

本實(shí)驗(yàn)與本研究團(tuán)隊(duì)既往的實(shí)驗(yàn)研究體會(huì)及參考已有的結(jié)腸黑變病相關(guān)研究文獻(xiàn)資料[26-27]，認(rèn)為目前結(jié)腸黑變病模型動(dòng)物可選擇豚鼠或大鼠。相對(duì)于豚鼠，大鼠的價(jià)格便宜，實(shí)驗(yàn)造模過(guò)程中死亡率低，是它的優(yōu)勢(shì)。但是大鼠結(jié)腸黑變病模型相對(duì)豚鼠模型，病變結(jié)腸顏色淺，病變腸段短，結(jié)腸黑變病評(píng)分低。因此在選擇大鼠作為模型動(dòng)物時(shí)，需要設(shè)計(jì)更長(zhǎng)造模時(shí)間和更高劑量的蒽醌類(lèi)藥物作為造模因素以確保實(shí)驗(yàn)效果。

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（收稿日期：2021-06-15）