余先云， 冉彩萍， 何琛璐， 張曉慧， 張忠剛， 孫 勁， 周生元， 段令兄, 郭慧慧

1.青海省婦幼保健院 新生兒科，青海 西寧 810000；2.青海省婦女兒童醫(yī)院 急診科，青海 西寧 810000；3.聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六七醫(yī)院 婦產(chǎn)科，遼寧 大連 116000

呼吸系統(tǒng)感染是臨床較常見(jiàn)的兒童多發(fā)性疾病，在兒科收治患者中約占3/4，嚴(yán)重影響患兒健康[1]。此外，呼吸系統(tǒng)感染復(fù)發(fā)性高，病程長(zhǎng)，對(duì)患兒的學(xué)習(xí)和生活造成影響，也對(duì)其家庭造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。兒童呼吸道感染發(fā)病原因一方面與其自身的生理解剖特點(diǎn)有關(guān)，另一方面與患兒免疫功能缺陷或低下、營(yíng)養(yǎng)不良或維生素缺乏有關(guān)。維生素A、D、E是兒童生長(zhǎng)發(fā)育中不可缺少的微量營(yíng)養(yǎng)素，可增強(qiáng)免疫抵抗力，維持人體生長(zhǎng)發(fā)育與正常生理功能[3]。有研究表明，感染性疾病患者血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid A，SAA)水平明顯增加，增加時(shí)間早且迅速[4]。因此，該指標(biāo)在感染性疾病中可能具有重要的診斷價(jià)值。機(jī)體免疫功能低下時(shí)，體內(nèi)隱藏的EB病毒活化并引起機(jī)體一個(gè)甚至多個(gè)系統(tǒng)發(fā)生感染，其中，呼吸系統(tǒng)是最常見(jiàn)受累系統(tǒng)之一[5]。本研究旨在探討血清維生素A、SAA、EB病毒IgM(EB-IgM)聯(lián)合檢測(cè)在兒童呼吸道感染診斷中的診斷價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2017年1月至2019年12月于青海省婦幼保健院確診為呼吸道感染的100例患兒納入B組。所有患兒均根據(jù)呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)(衛(wèi)生部制定)診斷確認(rèn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝、腎等方面疾病及惡性腫瘤者；發(fā)病前服用免疫調(diào)節(jié)藥或腎上腺皮質(zhì)激素等藥物者；患有其他肺部疾病者。另選取同期于我院接受健康體檢的98例正常兒童納入A組。A組中，男性44例，女性54例；平均年齡(6.17±1.23)歲。B組中，男性48例，女性52例；平均年齡(6.12±1.34)歲；上呼吸道感染58例，支氣管肺炎22例，支氣管炎16例，扁桃體炎4例。兩組研究對(duì)象性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法 于清晨采集所有研究對(duì)象空腹10 ml靜脈血，3 500 r/min離心15 min取上清。采用免疫比濁法檢測(cè)C反應(yīng)蛋白(C-reaction protein，CRP)；使用電阻抗法檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(white blood cell count，WBC)水平；使用膠體金法檢測(cè)SAA；使用高效液相色譜檢測(cè)維生素A、維生素E；使用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)維生素D，試劑盒來(lái)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司。EB-IgM、EB-IgG、EB-IgA檢測(cè)：對(duì)分離的血清樣品給予如下操作，包括溫育、清洗、添加酶結(jié)合物進(jìn)一步溫育、清洗、底物溫育、終止反應(yīng)、比色等。待測(cè)樣品吸光度/標(biāo)準(zhǔn)品吸光度之比≥1.1，則判斷為陽(yáng)性。EB-DNA檢測(cè)：提取DNA、擴(kuò)增、加UNG酶反應(yīng)、酶活化、變性、退火、延伸(循環(huán)數(shù)：45)。當(dāng)達(dá)到熒光強(qiáng)度閾值的循環(huán)數(shù)<39時(shí)，則判斷為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象臨床指標(biāo)比較 B組EB-IgM、EB-IgG、EB-IgA、EB-DNA陽(yáng)性率明顯高于A組，CRP、WBC、SAA水平均顯著高于A組，維生素A、維生素D、維生素E水平顯著低于A組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組研究對(duì)象臨床指標(biāo)比較

2.2 多元Logistic回歸分析 多元Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清維生素A、SAA、EB-IgM是兒童呼吸道感染發(fā)生的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 多元Logistic回歸分析結(jié)果

2.3 EB-IgM、SAA、維生素A單獨(dú)與聯(lián)合檢測(cè)兒童呼吸道感染診斷價(jià)值 EB-IgM+SAA+維生素A檢測(cè)的ROC曲線下面積、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值高于EB-IgM、SAA、維生素A單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。EB-IgM檢測(cè)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值高于SAA及維生素A單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3、圖1。

表3 EB-IgM、SAA、維生素A單獨(dú)與聯(lián)合檢測(cè)兒童呼吸道感染ROC曲線分析

圖1 ROC曲線分析

3 討論

流行病學(xué)研究結(jié)果表明，兒童感染性疾病在小兒疾病中占據(jù)前列，而兒童呼吸道感染在其中具有重要位置，發(fā)病率高達(dá)40%[7]。上呼吸道感染未給予及時(shí)治療，病情易進(jìn)展為下呼吸道感染，甚至造成腎炎、心肌炎、敗血癥、風(fēng)濕熱等[8]。然而，病原學(xué)細(xì)菌培養(yǎng)檢查周期長(zhǎng)，且陽(yáng)性診斷率低，臨床診斷價(jià)值較低。因此，尋找更具準(zhǔn)確性與特異性的檢測(cè)指標(biāo)對(duì)于疾病的早期精準(zhǔn)有效治療具有重要的臨床意義。此外，早期診斷疾病對(duì)判斷感染類(lèi)型，避免抗菌藥物濫用，減少耐藥發(fā)生同樣具有重要作用。

作為載脂蛋白族中高度異類(lèi)蛋白質(zhì)之一，SAA主要表達(dá)于泡沫細(xì)胞、肝細(xì)胞及脂肪細(xì)胞中，在體內(nèi)生物學(xué)過(guò)程發(fā)揮著重要作用。當(dāng)機(jī)體受到炎性刺激并發(fā)生急性炎癥反應(yīng)時(shí)，單核巨噬細(xì)胞活化并釋放大量炎性因子，如腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素等，并進(jìn)一步刺激肝細(xì)胞合成SAA。有研究表明，正常人體內(nèi)血清中SAA水平很低，當(dāng)患兒發(fā)生呼吸道感染時(shí)，機(jī)體發(fā)生急性相反應(yīng)，此時(shí)肝內(nèi)合成SAA蛋白明顯增加，6 h后血清中含量可升高1 000倍[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，相比于A組，B組血清中SAA水平明顯增加。這提示，檢測(cè)體內(nèi)血清中SAA水平是否增加及其程度可為兒童呼吸道感染的診斷能提供重要的參考依據(jù)。

維生素A、D、E屬于脂溶性的微量營(yíng)養(yǎng)素，是人體物質(zhì)代謝必不可少的維生素，在兒童生長(zhǎng)發(fā)育、維持機(jī)體正常生理功能等過(guò)程中具有重要作用。維生素A是保持正常視覺(jué)功能并維持細(xì)胞生長(zhǎng)、上皮完整性、免疫力和生殖功能的必需營(yíng)養(yǎng)素。維生素D對(duì)保持骨骼的健康至關(guān)重要，在肌肉功能和免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。維生素E作為主要的脂溶性抗氧化劑可保護(hù)細(xì)胞膜免受自由基的氧化損傷，預(yù)防與氧化應(yīng)激相關(guān)的慢性疾病。維生素缺乏癥是兒童發(fā)生呼吸道感染的重要因素之一。本研究結(jié)果顯示，上述維生素中僅維生素A是兒童呼吸道感染發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，B組患兒血清中維生素A水平較正常兒童低。維生素A具有抗感染作用。有研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體維生素A缺乏時(shí)，呼吸道纖毛柱狀上皮細(xì)胞纖毛消失，導(dǎo)致其鱗狀上皮發(fā)生化生，降低呼吸道黏膜密集性，進(jìn)而降低呼吸道黏膜屏障功能，引起腺體細(xì)胞正常功能喪失，機(jī)體免疫功能降低，增加病原體入侵機(jī)體的可能性，最終導(dǎo)致呼吸道感染[10]。另有研究表明，血清中維生素A水平與免疫球蛋白、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率正相關(guān)[11]。

有研究表明，在90%的兒童血清中可檢查出EB-IgG[12]。由于取材樣品的局限性，早期檢查結(jié)果EB-IgG假陽(yáng)性結(jié)果較多。同時(shí)，由于EB-IgG被作為病毒感染的遠(yuǎn)期指標(biāo)，其早期診斷意義遠(yuǎn)低于EB-IgM。EB-IgM含量與機(jī)體組織、器官損傷程度、疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，因此，臨床上可以根據(jù)EB-IgM含量對(duì)患兒感染性疾病嚴(yán)重程度給予準(zhǔn)確判斷，準(zhǔn)確給予藥量，以達(dá)到最佳的治療效果[13]。本研究中，檢測(cè)EB-IgM診斷兒童呼吸道感染的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度分別為74.74%、78.34%、76.12%，高于維生素A、SAA單獨(dú)檢測(cè)；同時(shí)，B組EB-IgM陽(yáng)性率明顯高于A組，提示EB-IgM水平檢測(cè)可為兒童呼吸道感染的診斷提供重要的參考和判斷依據(jù)。

本研究結(jié)果表明，B組患兒EB-IgM陽(yáng)性率、SAA均顯著高于A組，而維生素A水平顯著低于A組；多元回歸分析結(jié)果顯示，維生素A+SAA+EB-IgM聯(lián)合檢測(cè)的敏感度為96.09%、特異度為97.54%、準(zhǔn)確度為95.02%，且此時(shí)ROC曲線下面積達(dá)到0.939。這提示，聯(lián)合檢測(cè)血清中維生素A、SAA、EB-IgM有利于臨床上兒童呼吸道感染的診斷、治療及預(yù)后判斷。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)血清中維生素A、SAA、EB-IgM可明顯提高兒童呼吸道感染診斷的準(zhǔn)確度、敏感度及特異度，三者聯(lián)合檢測(cè)效能優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)。