王偉英，任 娜

河北醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院/石家莊市人民醫(yī)院全科，河北石家莊 050031

高血壓可導(dǎo)致患者全身小靜脈發(fā)生痙攣，使血管內(nèi)血流灌注量減少，損傷血管內(nèi)皮功能，增加血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生風(fēng)險[1]。血管內(nèi)皮功能障礙不僅會增加患者病死風(fēng)險，還不利于患者身心健康。因此，在早期準(zhǔn)確評估高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生風(fēng)險并進(jìn)行干預(yù)尤為關(guān)鍵。微小RNA(miRNA)對特異基因的表達(dá)具有一定的調(diào)節(jié)能力[2]。miRNA可參與細(xì)胞生長、分化、凋亡等多種生物過程[3]，與機(jī)體的多種生理、病理過程密切相關(guān)，是多種心肌疾病的生物標(biāo)志物[4]。miR-297a、miR-143是兩種常見的miRNA，是調(diào)節(jié)生物體生命活動的主要分子。許多miRNA有利于機(jī)體創(chuàng)傷的愈合及血管生成[5-6]。筆者推測miR-297a、miR-143表達(dá)可能參與了高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生、發(fā)展，而相關(guān)研究較少。本研究探討了高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生的影響因素，旨在將影響因素的相關(guān)指標(biāo)用于對高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙的早期風(fēng)險評估，從而指導(dǎo)早期臨床干預(yù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究最終納入了2018年3月至2020年1月于本院接受治療的69例高血壓患者。其中男31例，女38例；年齡55～67歲，平均(61.32±2.01)歲；高血壓病程3～10年，平均(6.03±1.11)年。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《中國高血壓防治指南(2010)》[7]中的高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)均為原發(fā)性高血壓；(3)生命體征平穩(wěn)且意識清楚。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有精神障礙影響檢查配合度；(2)合并病理性認(rèn)知功能障礙；(3)合并惡性腫瘤；(4)合并其他重要臟器相關(guān)疾病或病變?；颊呒凹覍倬獣员敬窝芯績?nèi)容且簽署了知情同意書。

1.2方法

1.2.1血管內(nèi)皮功能障礙的評估及分組 參照文獻(xiàn)[8]，依據(jù)治療期間血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生情況，將發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的患者納入發(fā)生組，剩余患者納入未發(fā)生組。

1.2.2基線資料收集 使用本院自制基線資料調(diào)查量表調(diào)查兩組患者基線資料，克朗巴哈系數(shù)(Cronbach′s α)為0.86，重測效度為0.88，主要內(nèi)容包括年齡、性別、高血壓家族史、吸煙史(吸煙指數(shù)≥400為有吸煙史，吸煙指數(shù)=每天吸煙支數(shù)×吸煙年數(shù))、酗酒史(1次喝5瓶或5瓶以上啤酒或血液中的乙醇濃度≥0.08 g/dL為有酗酒史)、合并糖尿病(糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)：空腹血糖≥7.0 mmol/L，和/或餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L)。

1.2.3實驗室指標(biāo)檢測 (1)三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、尿酸(UA)、脂蛋白a(Lp-a)、載脂蛋白A(ApoA)、載脂蛋白B(ApoB)、載脂蛋白E(ApoE)、磷脂(PLIP)：在患者開始接受治療當(dāng)天早晨抽取外周肘靜脈血5 mL，使用TD5A型自動脫蓋離心機(jī)(長沙英泰儀器有限公司)，以3 000 r/min的速度離心10 min后取血清，使用美國貝克曼庫爾特有限公司AU5800型全自動生化分析儀進(jìn)行檢測。(2)纖維蛋白原(FIB)：于患者開始接受治療當(dāng)天早晨抽取外周肘靜脈血4 mL置于含有枸櫞酸鈉的試管中，使用自動脫蓋離心機(jī)，以3 000 r/min的速度離心10 min后取血清，采用全自動凝血分析儀[企晟(上海)醫(yī)療器械有限公司，SF-8000型]檢測。(3)成纖維細(xì)胞生長因子23(FGF23)、基質(zhì)金屬蛋白酶-14(MMP-14)：于患者開始接受治療當(dāng)天早晨抽取外周肘靜脈血5 mL，使用自動脫蓋離心機(jī)，以5 000 r/min離心5 min后取血清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測，試劑盒由合肥萊爾生物科技有限公司提供。(4)miR-297a、miR-143：于患者開始接受治療當(dāng)天早晨抽取外周肘靜脈血10 mL，以3 500 r/min的速度離心10 min后取血清，采用賽默飛世爾公司TRIzol Plus RNA純化試劑盒提取RNA；使用ABI公司TaqMan檢測試劑盒對miR-297a、miR-143進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增；使用熒光實時定量PCR進(jìn)行檢測，在待檢樣品中額外加入5 nmol/L的cel-miR-39作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt方法分別計算miR-297a、miR-143的相對表達(dá)量[9]。

2 結(jié) 果

2.1血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生情況 69例高血壓患者中，發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的有18例(納入發(fā)生組)，發(fā)生率為26.09%(18/69)，未發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的有51例(納入未發(fā)生組)。

2.2兩組間基線資料、實驗室指標(biāo)的比較 兩組間年齡、性別、高血壓家族史、吸煙史、合并糖尿病的情況、酗酒史、TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、FIB、Lp-a、ApoA、ApoB、ApoE、PLIP比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；發(fā)生組血清FGF23、MMP-14水平高于未發(fā)生組，miR-297a、miR-143水平低于未發(fā)生組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 發(fā)生組與未發(fā)生組基線資料、實驗室指標(biāo)比較

續(xù)表1 發(fā)生組與未發(fā)生組基線資料、實驗室指標(biāo)比較

2.3高血壓患者血清miR-297水平與miR-143水平的相關(guān)性分析 高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平呈正相關(guān)(r=0.548，P<0.05),見圖1。

圖1 高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平相關(guān)性的散點圖

2.4Logistic回歸分析高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的危險因素 將高血壓患者血清FGF23、MMP-14、miR-297a、miR-143水平分別作為自變量，血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生情況作為因變量(1=發(fā)生，0=未發(fā)生)，Logistic回歸分析顯示，血清FGF23、MMP-14是高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的危險因素(OR>1，P<0.05)，血清miR-297a、miR-143是高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的保護(hù)因素(OR<1，P<0.05)。見表2。

表2 Logistic回歸分析高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的危險因素

2.5血清miR-297a、miR-143水平用于預(yù)測高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的效能分析 繪制ROC曲線，見圖2，血清miR-297a、miR-143水平單獨及聯(lián)合檢測預(yù)測高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的AUC均大于0.80，預(yù)測價值較理想，聯(lián)合預(yù)測的AUC最大。依據(jù)ROC曲線，血清miR-297a、miR-143的cut-off值分別為0.585、1.045，并計算得到特異度、靈敏度，見表3。

圖2 血清miR-297a、miR-143水平預(yù)測高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的ROC曲線

表3 血清miR-297a、miR-143水平預(yù)測高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的效能

3 討 論

血管內(nèi)皮功能障礙是高血壓患者的常見并發(fā)癥，不僅是動脈粥樣硬化的早期表現(xiàn)，也是原發(fā)性高血壓患者心血管事件的高危因素，后者是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，嚴(yán)重影響患者生命安全[10-11]。因此，對高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的風(fēng)險進(jìn)行評估并擬定合理干預(yù)方案對改善患者預(yù)后非常重要。

有研究報道，高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的風(fēng)險約為25%[12]。本研究中，血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生率為26.09%(18/69)，與上述研究結(jié)果相近?？梢姼哐獕夯颊哐軆?nèi)皮功能障礙的發(fā)生風(fēng)險較高。高血壓的發(fā)病受多種因素影響，有研究指出，細(xì)胞生長因子及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)參與了高血壓的發(fā)生、發(fā)展，而FGF23、MMP-14分別是常見的細(xì)胞生長因子和MMPs[13-14]。FGF23主要是由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，能夠有效調(diào)節(jié)維生素D及鈣磷代謝，F(xiàn)GF23釋放入血后可激活蛋白激酶，進(jìn)而參與多種臟器功能調(diào)節(jié)[15]。MMP-14是MMPs家族中常見的蛋白酶，MMPs家族在細(xì)胞外基質(zhì)的降解及重構(gòu)中起重要作用，與多種病理過程的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[16]。FGF23、MMP-14可能受基礎(chǔ)合并癥、糖脂代謝紊亂等其他因素影響，致使水平異常升高，故單獨依靠這兩項指標(biāo)的水平來評估高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的風(fēng)險有較大的局限性。

miR-297a、miR-143作為miRNA主要存在于外泌體中，被機(jī)體組織細(xì)胞攝取后產(chǎn)生調(diào)節(jié)能力，且具有特異性[17]。外泌體已被證實是一種新的細(xì)胞通訊介質(zhì)，具有傳遞miRNA的作用，可介導(dǎo)miRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)及免疫調(diào)節(jié)[18]。當(dāng)機(jī)體心肌細(xì)胞缺氧、缺血時不利于外泌體的產(chǎn)生，進(jìn)而釋放大量腫瘤壞死因子-α，進(jìn)一步加重炎性反應(yīng)，加速心肌細(xì)胞凋亡，不利于預(yù)后[19-20]。本研究中，發(fā)生組血清miR-297a、miR-143水平低于未發(fā)生組，初步表明血清miR-297a、miR-143與高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。某些血清miRNA已被發(fā)現(xiàn)可在急性心肌梗死患者中呈低水平狀態(tài)，是急性心肌梗死的潛在生物標(biāo)記物[21]。正常情況下，某些miRNA對組織、細(xì)胞均有一定的保護(hù)作用，當(dāng)組織、細(xì)胞發(fā)生缺血、缺氧時，miRNA的表達(dá)受到抑制，不僅進(jìn)一步加重機(jī)體受損程度，且可與Beclin-Ⅰ結(jié)合，產(chǎn)生大量血管緊張素Ⅱ，引發(fā)心肌肥厚，加速右心衰竭的發(fā)生、發(fā)展[22-23]。為了更進(jìn)一步明確血清miR-297a、miR-143水平與高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生的關(guān)系，本研究采用了Logistic回歸分析，結(jié)果顯示miR-297a、miR-143均是高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的保護(hù)因素。ROC曲線顯示，血清miR-297a、miR-143水平單獨及聯(lián)合檢測預(yù)測高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙的AUC>0.80，預(yù)測價值較理想。血清miR-297a、miR-143低水平與高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，可作為高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生的預(yù)測指標(biāo)。此外，本研究還對miR-297a、miR-143水平的相關(guān)性進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平呈正相關(guān)，提示高血壓患者血清miR-297a水平與miR-143水平可能相互影響、相互作用，共同參與了高血壓患者血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生的調(diào)節(jié)，但二者的具體關(guān)系、相互影響的機(jī)制，以及參與疾病病理過程的機(jī)制仍未明確，需在未來進(jìn)行更為深入的研究。

綜上所述，高血壓患者發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙可能與血清miR-297a、miR-143低水平有關(guān)，臨床可考慮通過檢測高血壓患者血清miR-297a、miR-143水平來預(yù)測血管內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生，以指導(dǎo)臨床早期干預(yù)，改善預(yù)后。

志謝：河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院張磊老師在統(tǒng)計學(xué)分析中提供的幫助。