韓蕃頡，王海濱，蘇新云，郭 冉

濟南市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東濟南 271100

肺癌是臨床常見的呼吸道惡性腫瘤之一，其中非小細胞肺癌(NSCLC)占比最高[1]。近年來，隨著自然環(huán)境的污染加重、人口老齡化進程加快，NSCLC發(fā)病率和死亡率有逐年上升趨勢[2]。NSCLC早期臨床特征缺乏特異性，確診時大多已經(jīng)進展到中晚期，喪失最佳治療時機，因此及早診斷能有效進行干預治療、降低病死率和改善預后。目前已經(jīng)有多種血清腫瘤標志物逐漸應用于NSCLC的早期篩查，如神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)等，但單純采用腫瘤標志物檢測特異度和靈敏度有限[3]。隨著臨床對肺癌發(fā)病機制、分子生物學研究發(fā)的持續(xù)進展，發(fā)現(xiàn)血清淀粉樣蛋白A(SAA)、雙皮質(zhì)素樣激酶1(DCLK1)也在肺癌患者體內(nèi)表達水平升高，推測可能也參與了NSCLC發(fā)生、發(fā)展過程[4-5]。本次研究旨在探討常見血清腫瘤標志物聯(lián)合SAA、DCLK1在NSCLC中的表達及對預后判斷價值，以期為NSCLC早期診斷、病情評估和預后判斷提供新的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年5月到2019年5月本院收治的156例NSCLC患者作為NSCLC組。納入標準：(1)經(jīng)影像學、痰涂片及病理檢查確診為NSCLC，參考2015年WHO提出的肺腫瘤分類診斷標準[6]；(2)患者臨床資料完整且能完成隨訪；(3)患者知情并簽署知情同意書。排除標準：(1)入組前已接受過手術(shù)、放化療、藥物等相關(guān)治療；(2)合并肺部感染、哮喘等其他肺部病變；(3)合并急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、甲狀腺疾病等；(4)合并其他良、惡性腫瘤。另選取70例良性病變者(肺纖維瘤、肺氣腫、肺炎等)和72例于本院體檢健康人員分別作為良性病變組和健康組。NSCLC組男82例，女74例，年齡(67.40±12.37)歲；良性病變組男37例，女33例，年齡(67.14±12.52)歲；對照組男43例，女29例，年齡(67.52±12.34)歲。3組患者間一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審核通過。

1.2方法 采集所有納入對象清晨空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min取上清液于—80 ℃凍存?zhèn)溆谩２捎萌詣与娀瘜W發(fā)光免疫分析儀(瑞士羅氏公司，e601型)檢測血清NSE、CEA、CYFRA21-1、DCLK1水平，試劑盒購自北京科美生物技術(shù)有限公司，質(zhì)控品購自英國朗道公司，判斷標準為Westgard多規(guī)則分析。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清SAA水平，試劑盒購自上海雙贏生物科技有限公司。所有操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行操作。比較NSCLC組和健康組的NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1表達水平不同，然后按照TNM臨床分期[7]將NSCLC組患者分為Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期兩類，分析不同分期NSCLC患者以上血清指標表達水平。隨訪1年，分析各指標水平與NSCLC患者生存時間關(guān)系及對預后不良(生存時間<1年)的診斷價值。

2 結(jié) 果

2.1各組血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較 NSCLC組血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平均高于良性病變組和健康組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較

2.2不同臨床分期患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較 臨床分期Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平均低于Ⅲ～Ⅳ期者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床分期患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較

2.3不同預后NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較 隨訪1年，以患者死亡為隨訪終止，中位隨訪時間為0.74年。生存時間≥1年NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平低于生存時間<1年患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同預后NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較

2.4血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1聯(lián)合對預后的診斷價值 繪制血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1預測預后不良(生存時間<1年)的ROC曲線，其AUC分別為0.514、0.525、0.673、0.648、0.762，聯(lián)合診斷的曲線下面積(AUC)為0.824，診斷效能高于單一診斷方式(P<0.05)，見表4、圖1。

表4 血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1聯(lián)合對預后的診斷價值

圖1 血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1聯(lián)合診斷預后的ROC曲線

3 討 論

NSCLC具有惡性程度高、轉(zhuǎn)移早的特點，其發(fā)病率、死亡率居呼吸道腫瘤首位。據(jù)相關(guān)文獻報道，NSCLC患者5年生存率不到20%，可對患者生命健康造成較大威脅[8-9]。NSCLC患者常在中晚期確診，此時大多數(shù)甚至已經(jīng)處于擴散轉(zhuǎn)移期，不利于患者預后轉(zhuǎn)歸。早期診斷和手術(shù)干預治療對改善患者預后具有重要意義，目前臨床上主要采用影像學、痰涂片作為篩查標準，但陽性率低[10]。病理學檢查肺癌特異度高，但作為一種侵入性操作，存在患者耐受較差、取材難度較大且檢測結(jié)果靈敏度較低等問題[11]。近年來，隨著NSCLC發(fā)病機制研究進展，多種血清指標檢測逐漸應用于臨床，對NSCLC的輔助診斷、病情評估和預后預測等方面提供了重要參考價值。

NSE是分布于神經(jīng)組織和內(nèi)分泌組織中的烯醇化酶，與神經(jīng)內(nèi)分泌組織起源的腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[12]。目前已經(jīng)將NSE作為甲狀腺乳頭狀癌、肝癌等惡性腫瘤的高靈敏度和特異度的血清標志物，在惡性腫瘤的輔助診斷、療效檢測中起到一定意義。已有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者血清NSE明顯升高，且與患者病情嚴重程度相關(guān)[13-14]。CEA是一種酸性糖蛋白，多表達在內(nèi)胚層起源的消化道惡性腫瘤和正常胚胎的腸道中，在細胞從正常向癌變的轉(zhuǎn)化過程中，由于細胞基因調(diào)控受到損傷，胚胎細胞基因失調(diào)從而產(chǎn)生大量CEA釋放到血液中[15]。CYFRA21-1是存在肺上皮細胞中的可溶性蛋白，當肺細胞發(fā)生癌變時CYFRA21-1可被釋放到血液組織液中，且其水平持續(xù)升高提示腫瘤的廣泛轉(zhuǎn)移[16]。本次研究中NSCLC患者血清NSE CEA、CYFRA21-1水平高于肺部良性病變者和健康人群，而良性病變組和健康組上述標志物比較差異無統(tǒng)計學意義，提示NSE、CEA、CYFRA21-1對NSCLC的臨床輔助診斷具有重要鑒別意義。此外，血清NSE、CEA、CYFRA21-1水平與TNM分期相關(guān)，提示NSE、CEA、CYFRA21-1參與了NSCLC的發(fā)病發(fā)生、發(fā)展過程，且與腫瘤病理進展相關(guān)。NSE、CEA、CYFRA21-1作為常見腫瘤標志物，目前已經(jīng)成為實驗室診斷NSCLC的主要參考指標，但其陽性檢出率目前分別只有65%～75%、60%～70%、50%～65%等，因此尋找靈敏度、特異度更高的生物指標聯(lián)合檢測具有重要意義[17]。SAA是體內(nèi)出現(xiàn)炎性反應時水平異常升高的急性時相反應蛋白，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，部分腫瘤相關(guān)巨噬細胞可通過釋放SAA重塑腫瘤微環(huán)境，從而促進惡性腫瘤進展[18]。SAA目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在多發(fā)性骨髓瘤、直腸癌等惡性腫瘤的分化、轉(zhuǎn)移、預后預測中起到一定作用[19]。DCLK1是一種微管相關(guān)激酶，其高表達的陽性細胞具有腫瘤肝細胞特性。有文獻報道，有一半以上的NSCLC患者血清中DCLK1的基因啟動子甲基化，還能通過參與上皮-間質(zhì)化、增加腫瘤細胞對放化療藥物敏感性等多個途徑影響腫瘤形成和發(fā)展[20]。本次研究中NSCLC組血清SAA、DCLK1水平均高于良性病變組和健康組，而良性病變組和健康組上述標志物比較差異無統(tǒng)計學意義，提示SAA、DCLK1對NSCLC的臨床輔助診斷具有重要鑒別意義，且其表達水平與NSCLC臨床分期相關(guān)。此外，本次隨訪1年發(fā)現(xiàn)，生存時間≥1年NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平低于生存時間<1年患者，提示血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1表達水平與NSCLC患者預后相關(guān)。繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1預測預后不良(生存時間<1年)的AUC分別為0.514、0.525、0.673、0.648、0.762，聯(lián)合診斷的AUC為0.824，診斷效能高于單一診斷方式，且具有較高的靈敏度和特異度，提示聯(lián)合檢測對預測NSCLC預后具有重要臨床價值。

綜上所述，血清腫瘤標志物NSE、CEA、CYFRA21-1及SAA、DCLK1在NSCLC患者中表達上調(diào)，且其聯(lián)合檢測對輔助NSCLC預后判斷有一定價值。