◎ 李美珍，陳炎歡，馮華業(yè)，黃綺敏，黃照榮

（無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529100）

猴頭菇提取物是以猴頭菇為原料，經(jīng)提取、過濾、濃縮、干燥等工序制成的提取物[1-3]。猴頭菇提取物具有抗氧化、保護(hù)胃黏膜等作用[4-10]。猴頭菇提取物目前在國內(nèi)外均未有相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本研究建立不同產(chǎn)地猴頭菇提取物的腺苷含量測定方法，并測定了不同產(chǎn)地的猴頭菇提取物中腺苷的含量，為初步評價猴頭菇提取物的質(zhì)量提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

HP1200型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測器，美國Agilent公司。腺苷標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號58-61-7，批號110879-201703），中國食品藥品檢定研究院，含量以99.9%計；甲醇為色譜純，德國Merck公司；其他試劑均為分析純，水為純化水。

猴頭菇提取物由適量猴頭菇藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。10批猴頭菇提取物來源于3個廠家，編號1～10。

1.2 方法

1.2.1 腺苷的含量測定

（1）對照品溶液制備。精密稱取腺苷對照品約2 mg于100 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，即得。

（2）供試品溶液制備。精密稱取本品約2.0 g于50 mL小燒杯中，加水40 mL，加熱使溶解，取出，放至室溫，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.45 μm的針式過濾器過濾，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2 色譜條件

（1）色譜柱。十八烷基鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：以甲醇為流動相A，以水為流動相B。

（2）采用梯度洗脫。0～5 min流動相A由1%上升到3%，流動相B由99%下降到97%；5～10 min流動相A由3%上升到31%，流動相B由97%下降到69%，10～15 min流動相A由31%上升到35%，流動相B由69%下降到65%。波長260 nm；柱溫30 ℃；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量5 μL；理論塔板數(shù)按腺苷峰計算應(yīng)不低于5 000。

1.2.3 方法學(xué)考察

（1）線性關(guān)系考察。精密稱取腺苷對照品2.220 mg置50 mL容量瓶中，按1.2.1項(xiàng)下制備方法加50%甲醇溶解制成儲備液，再精密吸取該儲備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL及10.0 mL分別至10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，按1.2.2項(xiàng)下色譜條件分析，測定峰面積。

（2）精密度試驗(yàn)。精密稱取1.2.1項(xiàng)下制備的腺苷對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計算峰面積及保留時間的RSD值。

（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密稱取猴頭菇提取物按1.2.1項(xiàng)下制備供試品溶液，按色譜條件分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h及24 h測定。

（4）重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取猴頭菇提取物同一天內(nèi)按1.2.1項(xiàng)下制備的6份供試品溶液，按色譜條件測定。

（5）回收率試驗(yàn)。精密稱取猴頭菇提取物約1.0 g于9個50 mL小燒杯中，另取腺苷對照品4.882 mg置10 0mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，分別吸取該對照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL，分三組加入含樣品的9個50 mL小燒杯中，按1.2.1項(xiàng)下制成供回收率測定用供試品溶液，按色譜條件測定，計算腺苷的回收率。

（6）樣品含量測定。精密吸取對照品溶液和供試品溶各5 μL，注入液相色譜儀，測定。根據(jù)所得對照品溶液和供試品溶液色譜圖中腺苷峰面積計算供試品中待測組分腺苷含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系考察

以腺苷對照品的濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程Y=0.277 9X-0.037 7，R2=1。結(jié)果表明腺苷在 2.213 3 ～ 22.133 4 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，見表1。

表1 腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)結(jié)果表

2.2 精密度試驗(yàn)

保留時間和峰面積的RSD值為0.44%和0.05%，不對稱度以腺苷計不高于1.1。理論塔板數(shù)以腺苷峰計算約71 000，表明儀器精密度良好，見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果表

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

供試品中腺苷峰面積的RSD為0.68%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

腺苷平均含量為0.025%，RSD為1.76%，分離度大于1.5，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 回收率試驗(yàn)

平均回收率為97.80%，RSD值為1.15%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.6 樣品含量測定

腺苷的含量測定結(jié)果見表3，10批猴頭菇提取物中腺苷含量按干燥品計算分別不低于0.02%。

表3 猴頭菇提取物腺苷含量測定結(jié)果表

3 結(jié)論

測定猴頭菇提取物中腺苷含量的高效液相色譜法的適應(yīng)性、精密度、線性關(guān)系、準(zhǔn)確度等均符合要求，該方法可以作為猴頭菇提取物中腺苷含量的測定方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的猴頭菇提取物的腺苷含量存在一定差異，這可能與猴頭菇本身的生長環(huán)境、采收時間、提取工藝等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。