陳琳,左亞敏,趙松蘭,沈亞杰
鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 鎮(zhèn)江 212002
上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)是世界范圍內(nèi)導致女性腫瘤相關(guān)性死亡的最常見原因之一。由于臨床癥狀隱匿,不少卵巢癌患者發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)是晚期,且疾病進展迅速,EOC 患者的臨床預后并不理想,其5 年生存率低于50%。因而,探索EOC 發(fā)生、發(fā)展過程中涉及的分子機制,并且尋找早期或者特異性分子診斷標志,對EOC 的早期診斷和治療至關(guān)重要。叉頭盒(forkhead box,F(xiàn)OX)轉(zhuǎn)錄因子位于染色體5q13.2,全長2.27 kb,在細胞生長、分化、遷移等生命過程中發(fā)揮重要作用。作為FOX 家族的重要成員,叉頭盒D1(FOXD1)可促進腫瘤細胞的增殖、轉(zhuǎn)移,影響腫瘤細胞的化療抗性,并且與腫瘤患者預后不良有關(guān)。然而,有關(guān)EOC 中FOXD1
表達情況的臨床研究目前尚未見報道。因此,本研究檢測EOC 患者腫瘤組織中FOXD1
表達情況,分析其與臨床特征和EOC 患者預后之間的關(guān)系,現(xiàn)報道如下。P
﹥0.05),具有可比性。收集EOC 患者的EOC 組織65 例和卵巢良性疾病患者的卵巢組織28 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過,所有患者均對本研究知情并簽署知情同意書。首先通過研磨組織獲取細胞,總RNA 按照Trizol 法提取,通過比色后將所有標本濃度調(diào)節(jié)一致。逆轉(zhuǎn)錄參照Thermo 公司的RevertAid RT Reverse Transcription Kit 說明書進行,反應體系離心后進行聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR),程序包括三步:①25 ℃5 min;②42 ℃60 min;③70 ℃5 min。收集PCR 產(chǎn)物置于4 ℃保存待用。
FOXD1
的轉(zhuǎn)錄本水平,具體的PCR 反應體系及反應條件參照說明書,每次PCR 實驗均帶有陽性和陰性質(zhì)控,FOXD1
表達水平通過2法進行計算分析。FOXD1
引物序列:上游5'-GCGAGGACGAAGAAGACGAGGAA-3',下游5'-GAGGTTGTGGCGGATGCTGTT-3',產(chǎn)物長度為458 bp;內(nèi)參基因GAPDH
引物序列:上游5'-GAAGGTCGGAGTCAACGG-3',下游5'-TGGAAGATGGTGATGGGAT-3',產(chǎn)物長度為222 bp。M
(P
,P
)]表示,組間比較采用Mann WhitneyU
檢驗;計數(shù)資料以例數(shù)及率(%)表示,組間比較采用χ
檢驗;采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線進行診斷價值分析,計算ROC曲線下面積(area under the curve,AUC);采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,組間比較采用Log-rank 檢驗;以P
﹤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。FOXD1
在EOC 組織中的表達水平為0.574(0.352,0.958),明顯高于卵巢良性疾病患者的0.123(0.051,0.355),差 異 有 統(tǒng) 計 學 意 義(U
=318.000,P
﹤0.01)。采用X+2SD(本研究中均數(shù)+2倍標準差為0.788)的分組方法,將65 例EOC 患者分 為FOXD1
高 表 達(FOXD1
≥0.788,n
=21)和FOXD1
低表達(FOXD1
﹤0.788,n
=44)。FOXD1
表達水平診斷EOC 的AUC 為0.825(95%CI:0.730~0.921,P
﹤0.01),其靈敏度和特異度分別為0.738 和0.786。(圖1)圖1 FOXD1表達水平診斷EOC的ROC曲線
FOXD1 高表達和低表達EOC 患者的腫瘤直徑、腫瘤分化程度、血漿糖類抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)水平及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05);而FOXD1高表達和低表達EOC 患者的年齡、FIGO 分期及腹腔積液情況比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P ﹥0.05)。(表1)
表1 不同F(xiàn)OXD1 表達情況EOC 患者臨床特征的比較
FOXD1
低表達EOC 患者的中位總生存期為24.62(9.89,45.47)個月,盡管FOXD1
高表達患者的中位總生存期稍高于FOXD1
低表達患者,但生存曲線分析結(jié)果顯示,FOXD1
低表達患者的總生存情況優(yōu)于FOXD1
高表達患者,差異有統(tǒng)計學意義(χ
=5.739,P
=0.017)(圖2)。FOXD1
高表達EOC 患者的中位無進展生存期為11.17(8.95,27.84)個月,FOXD1
低表達EOC 患者的中位無進展生存期為13.83(8.57,23.06)個月,生存曲線分析結(jié)果顯示,FOXD1
低表達和FOXD1
高表達患者的無進展生存情況比較,差異無統(tǒng)計學意義(χ
=1.951,P
=0.162)(圖3)。圖2 FOXD1低表達(n=44)與FOXD1高表達(n=21)EOC患者的總生存曲線
圖3 FOXD1低表達(n=44)與FOXD1高表達(n=21)EOC患者的無進展生存曲線
FOXD1
基因作為一種轉(zhuǎn)錄因子可能參與多種生理過程,在腫瘤的發(fā)生中也扮演重要的作用。已有文獻報道FOXD1
可參與細胞生長、侵襲等生物學過程,從而賦予腫瘤特性。Wu 等發(fā)現(xiàn)FOXD1
可以通過間接調(diào)節(jié)黑色素瘤細胞中的基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)和Ras 相關(guān)C3 肉毒梭菌毒素1B(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1B,RAC1B)影響腫瘤細胞的侵襲和遷移。過表達FOXD1
可以通過激活胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2 或蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又稱AKT)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)等通路促進結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展。此外,在其他實體腫瘤如前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、非小細胞肺癌、宮頸癌中FOXD1
表達上調(diào),并可作為重要因子介導腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等。本研究通過qRT-PCR的方法檢測了EOC 患者腫瘤組織中FOXD1
表達水平,發(fā)現(xiàn)其較非腫瘤患者顯著上調(diào)。ROC 曲線分析提示FOXD1
異常表達有助于EOC 的診斷,具有潛在的臨床應用價值。此外,FOXD1
高表達可能與腫瘤直徑、腫瘤分化程度及血漿CA125 水平等密切相關(guān)。以上結(jié)果也提示FOXD1
可能促進EOC 細胞增殖以及細胞分化。當然,上述結(jié)果仍需深入的體外和體內(nèi)研究證實。除了作為腫瘤診斷分子標志,FOXD1
異常表達也可影響實體腫瘤患者的預后。Nakayama 等發(fā)現(xiàn)FOXD1
表達上調(diào)與非小細胞肺癌患者不良預后相關(guān)。在高級別膠質(zhì)瘤的臨床標本中,FOXD1
和醛脫氫酶1 家族成員A3(aldehyde dehydrogenase 1 family member A3,ALDH1A3)表達水平呈正相關(guān),且兩者異常高表達可影響患者的預后。而本研究發(fā)現(xiàn)FOXD1
表達與EOC 患者的預后有關(guān),提示FOXD1
可以作為監(jiān)測EOC 患者預后情況的重要分子標志。與本文研究不同的是,Wang等發(fā)現(xiàn)低表達FOXD1
與高級別漿液性卵巢癌患者預后不良相關(guān),出現(xiàn)這種情況可能與標本的選擇不同有關(guān),上述研究對象為高級別漿液性卵巢癌,僅是EOC 中的一個特殊亞型,而本文分析的是整個EOC 群體,因而可能出現(xiàn)FOXD1
表達水平的差異。當然,本研究也存在一些不足之處。本研究涉及的樣本數(shù)量較少,且重點分析的是EOC 患者中FOXD1
mRNA 水平,而無充足的標本以分析FOXD1 蛋白情況,因而僅是初步探索了EOC 中該基因的表達態(tài)勢,后續(xù)還需擴大樣本進一步分析以驗證上述結(jié)論。綜上所述,FOXD1
高表達在EOC 患者中常見,可以作為EOC 的輔助診斷依據(jù),并且FOXD1
高表達與EOC 患者預后不良相關(guān)。