袁愷 何偉 楊云麗 朱威宇 彭超 安泰 李麗 周衛(wèi)強(qiáng)

（1. 中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院有限公司，北京102209；2. 營(yíng)養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102209；3. 北京工商大學(xué)化學(xué)與材料 工程學(xué)院，北京 100048）

靈芝酸（ganoderic acids，GAs）是靈芝三萜酸的簡(jiǎn)稱，約占靈芝三萜類物質(zhì)的三分之一［1］。盡管已經(jīng)被證明其具有出色的藥用價(jià)值，但是從天然靈芝的子實(shí)體和孢子中提取GAs，存在靈芝栽培工作量大、時(shí)間長(zhǎng)、生長(zhǎng)環(huán)境要求高、GAs含量低等問題，極大地限制了其商業(yè)應(yīng)用和開發(fā)。近年來(lái)，靈芝菌深層液體發(fā)酵技術(shù)逐漸成為獲取GAs的重要方法，而靈芝酸生物合成途徑的解析和調(diào)控對(duì)于解決發(fā)酵生產(chǎn)靈芝酸低產(chǎn)量問題又意義重大。本文從GAs的合成代謝途徑出發(fā)，首先介紹了利用基因工程手段對(duì)GAs合成代謝途徑進(jìn)行調(diào)控的實(shí)施案例，隨后系統(tǒng)梳理了信號(hào)傳導(dǎo)途徑以及生物表觀遺傳在提高GAs積累量方面的作用原理，并繪制出示意圖，希望為今后進(jìn)一步提高深層液體發(fā)酵產(chǎn)GAs產(chǎn)量提供研究思路。

1 靈芝酸

1.1 靈芝酸簡(jiǎn)介

靈芝酸是靈芝菌的主要活性成分之一［2］。自1982年Kubota［3］首次分離得到靈芝酸A、靈芝酸B以來(lái)，已經(jīng)超過100多種GAs被分離出來(lái)，其主要結(jié)構(gòu)見圖1。GAs已經(jīng)被證明具有抗腫瘤［4-6］、抗炎［7］、抑菌［4］、抗衰老［8］、助睡眠［9］等作用。例如，靈芝酸A具有抑制炎癥、治療人膠質(zhì)瘤、保肝、抑菌等作用［4，7］，靈芝酸DM可以抑制黑色素瘤［10］，靈芝酸D可以抑制結(jié)腸癌［5］等。在靈芝菌深層液體發(fā)酵生產(chǎn)GAs的過程中，發(fā)酵參數(shù)，如溫度、pH、溶氧等，外源物質(zhì)，如植物激素、油脂、苯巴比妥等都對(duì)GAs的生物合成代謝有直接影響作用［11-12］。

1.2 靈芝酸的合成代謝途徑

Shiao通過13C同位素標(biāo)記證明GAs的生物合成是由甲羥戊酸（MVA）合成代謝途徑起始［13］，并通過3個(gè)階段合成（圖1）。第一階段：前體物質(zhì)生成。首先3分子的乙酰輔酶A經(jīng)過2次縮合形成3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA），隨后在3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGR）的作用下生成MVA。再經(jīng)過甲基戊酸激酶（MK）和甲羥戊酸激酶（MPK）焦磷酸化、甲羥戊酸脫羧酶（MVD）脫羧化作用下生成異戊烯焦磷酸（IPP）。IPP在異戊二烯焦磷酸異構(gòu)酶（IDI）激活下可異構(gòu)化生成二甲丙烯焦磷酸（DMAPP）。2分子IPP和1分子DMAPP在法尼基磷酸合酶（FPS）催化下頭尾縮合成法尼基焦磷酸（FPP）。第二階段：羊毛甾醇骨架生成。首先FPP在鯊烯合成酶（SQS）催化下轉(zhuǎn)化為鯊烯，隨后在羊毛甾醇合成酶（LSS）催化下生成羊毛甾醇。第三階段：GAs的合成。羊毛甾醇經(jīng)過氧化、羥基化和糖基化生成不同結(jié)構(gòu)的GAs。

圖1 靈芝酸生物合成途徑Fig.1 Biosynthesis pathways of GAs

在GAs的合成途徑中，第一、二階段已經(jīng)得到了系統(tǒng)性的研究，涉及的重要酶也被鑒定和表征。但是第三階段的生物轉(zhuǎn)化過程還未完全闡明。Chen等［14］發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素P450單加氧酶（CYP450）催化羊毛甾醇成為不同的GAs。同時(shí)基因測(cè)序發(fā)現(xiàn)有214個(gè)CYPs與靈芝酸下游合成途徑相關(guān)，其中有78個(gè)CYPs與LSS共表達(dá)，猜測(cè)這78個(gè)CYPs可能參與到靈芝酸骨架結(jié)構(gòu)修飾中。另外有198個(gè)CYPs分屬于24個(gè)基因簇，其中有5個(gè)基因簇與LSS共表達(dá)，說明它們?cè)贕As生物合成中發(fā)揮作用［15］。例 如CYP512U6負(fù) 責(zé) 催 化 合 成 靈 芝 酸ZXYL［16］，CYP505D13則配合生成環(huán)狀靈芝三萜［17］等。

2 靈芝酸合成代謝途徑的基因調(diào)控

作為次級(jí)代謝產(chǎn)物，尤其是存在多種支路的情況下，GAs的合成和積累嚴(yán)格受限于合成代謝途徑中關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄水平。因此，代謝通路中關(guān)鍵酶的過表達(dá)和異源表達(dá)成為獲得GAs高積累量的最直接最有效手段。

2.1 關(guān)鍵酶基因的過表達(dá)

在GAs合成代謝途徑的上游有HMGR、FPS、SQS、LSS［18］這4個(gè)關(guān)鍵酶，其基因表達(dá)量與GAs的積累量密切相關(guān)。鐘建江課題組［19］使用同源標(biāo)記基因Cbxr，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將N端截?cái)嗟膆mgr（t-HMGR）基因片段導(dǎo)入靈芝細(xì)胞中，對(duì)HMGR催化域進(jìn)行過表達(dá)。在發(fā)酵的第8天，fps、sqs、ls的基因轉(zhuǎn)錄水平出現(xiàn)上調(diào)，GAs水平急劇升高，發(fā)酵結(jié)束后t-HMGR基因過表達(dá)菌株中角鯊烯、羊毛甾醇和GAs含量比出發(fā)菌株分別高6.7、3.8、2倍。

作為MVA生物合成途徑的第一個(gè)多分支點(diǎn)，F(xiàn)PS活性直接影響異戊烯焦磷酸（IPP）的催化路徑［20］。Fei等［21］通過過表達(dá)fps發(fā)現(xiàn)，基因sqs和ls轉(zhuǎn)錄水平分別上調(diào)2.8倍和1.73倍，GAs、靈芝酸T、靈芝酸S、靈芝酸Me的含量分別為2.76、41、21、28 μg/100 mg菌絲體，比空白組分別高出2.28、2.27、2.62、2.80倍。與Ding等［22］上調(diào)fps轉(zhuǎn)錄水平的結(jié)果相同。類似于FPS，SQS通過控制法尼基焦磷酸將代謝流引向靈芝酸合成代謝途徑，從而避免形成半倍萜。Zhou等［23］通過過表達(dá)sqs，轉(zhuǎn)錄水平提高15.6倍，鯊烯和羊毛甾醇含量分別增加1.55倍和1.68倍，靈芝酸Mk、T、Me、S的含量分別是16、40、43、53 μg/100 mg，比出發(fā)菌株高2.86、2.67、1.95、1.25倍。

LSS催化2，3-氧化鯊烯形成羊毛甾醇，過表達(dá)lss可以為GAs的生物合成提供足夠的前體物質(zhì)。研究結(jié)果顯示原基時(shí)期的lss表達(dá)量顯著高于菌絲體中的lss表達(dá)量，GAs含量呈現(xiàn)相同趨勢(shì)［24］。Zhang等［25］過表達(dá)lss后羊毛甾醇積累量提高了2.3倍，靈芝酸O、Mk、T、S、MI、Me的含量分別達(dá)到4.66、24.30、69.80、28.90、15.4、26.70 μg/100 mg，相 比出發(fā)菌株提高6.1、2.2、3.2、4.8、2.0、1.9倍。

2.2 關(guān)鍵基因的異源表達(dá)

發(fā)酵周期長(zhǎng)是制約GAs商業(yè)應(yīng)用的另一個(gè)主要因素。根據(jù)其他次級(jí)代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，在合適的底盤微生物中實(shí)現(xiàn)異源表達(dá)將有效縮短發(fā)酵周期，同時(shí)也利于進(jìn)一步提升GAs積累量。青蒿酸［26］、彌羅松酚［27］、人參皂苷［28-29］等植物來(lái)源的天然產(chǎn)物已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了異源表達(dá)，但是目前GAs的異源表達(dá)報(bào)道十分少。Wang等［30］通過體外酶促實(shí)驗(yàn)證明羊毛甾醇氧化酶CYP510L8通過3步催化羊毛甾醇的第二十六位碳轉(zhuǎn)化成為靈芝酸Z，經(jīng)異源表達(dá)cyp150l8，又成功實(shí)現(xiàn)靈芝酸Z在釀酒酵母中的合成，發(fā)酵120 h后產(chǎn)量約為14.5 mg/L。為了進(jìn)一步提高CPY510L8活力，研究人員構(gòu)建了新的異源表達(dá)體系CYP510L8-iGLCPR融合蛋白（一種細(xì)胞色素P450還原酶），實(shí)現(xiàn)胞內(nèi)H+的快速轉(zhuǎn)移，從而靈芝酸Z產(chǎn)量提升至154.45 mg/L，相比出發(fā)菌株提高了10倍［31］。毫無(wú)疑問，基因工程手段可以實(shí)現(xiàn)GAs的異源表達(dá)，而且更方便進(jìn)行代謝調(diào)控、過程調(diào)控等方面的優(yōu)化。其次，選擇合適的宿主也十分重要。比如上述研究中選擇釀酒酵母，一方面是因?yàn)樗梢宰孕泻铣裳蛎薮?，為GAs合成提供前提物質(zhì)。另一方面是利用其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和翻譯修飾系統(tǒng)可以表達(dá)CYP510L8和iGLCPR的優(yōu)勢(shì)。

由此可見，通過基因工程手段對(duì)重要節(jié)點(diǎn)的酶的基因進(jìn)行過表達(dá)或抑制，可以將胞內(nèi)代謝流導(dǎo)向GAs的合成代謝分支，直接有效達(dá)到目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量積累的目的。此外，盡管還存在關(guān)鍵酶功能解析不完全、合適宿主的選擇困難等諸多障礙，但是通過構(gòu)建異源表達(dá)系統(tǒng)提高GAs的生產(chǎn)效價(jià)這一路徑極有發(fā)展前景。

3 靈芝酸合成代謝途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑即細(xì)胞對(duì)某些特定刺激做出反應(yīng)的分子途徑。通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物代謝途徑的調(diào)控已經(jīng)發(fā)展成為一種強(qiáng)有力的策略。在GAs代謝途徑中，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)包括鈣調(diào)磷脂酶信號(hào)、活性氧信號(hào)、細(xì)胞壁完整性信號(hào)、茉莉酮酸（JA）及其衍生物信號(hào)、NO信號(hào)、cAMP信號(hào)等 （表1）［32-34］。

表1 靈芝酸生物合成途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控Table 1 Signal transduction regulation of ganoderma acid biosynthesis pathway

3.1 鈣調(diào)磷脂酶信號(hào)

鈣調(diào)磷脂酶信號(hào)的作用途徑是，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高并與鈣調(diào)蛋白（基因cam）形成Ca2+/鈣調(diào)蛋白復(fù)合物，隨后與鈣調(diào)磷脂酶的催化亞基（基因cna）相互作用并激活轉(zhuǎn)錄因子鋅指蛋白（基因crz1）［32］。在GAs合成代謝途徑中，基因sqs和lss的啟動(dòng)子區(qū)域有一個(gè)CDRE序列，受CRZ1的正向調(diào)節(jié)。Xu等［35］發(fā)現(xiàn)當(dāng)在培養(yǎng)基中加入Ca2+后，參與鈣調(diào)磷脂酶信號(hào)的cam、cna、crz1和GAs合成代謝途徑的關(guān)鍵酶基因hmgr、sqs、lss的表達(dá)量均出現(xiàn)明顯上調(diào)，GAs含量增加了3.7倍，靈芝酸MK、靈芝酸T、靈芝酸S和靈芝酸Me分別增加了2.6倍、4.5倍、3.2倍和3.8倍。Na+和Mn2+具有相同作用機(jī)制，通過胞內(nèi)Ca2+濃度增加并激活鈣調(diào)磷脂酶信號(hào)從而實(shí)現(xiàn)GAs合成代謝途徑的正向調(diào)節(jié)，分別將GAs含量提高了2.8倍和2.7倍［36-37］。

3.2 活性氧信號(hào)

活性氧（reactive oxygen species，ROS）平衡調(diào)節(jié)系統(tǒng)是一種廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)的復(fù)雜調(diào)節(jié)機(jī)制，涉及多種氧化應(yīng)激相關(guān)基因，對(duì)微生物合成代謝途徑影響較大［43-44］。Glswi6是G. lucidum ACCC53264的APSES轉(zhuǎn)錄因子，其轉(zhuǎn)錄表達(dá)與靈芝菌的發(fā)育以及生物合成代謝途徑密切相關(guān)。相比于野生型菌株，Zhang等［38］發(fā)現(xiàn)Glswi6沉默菌株的NAHD氧化酶活性下降48%，H2O2含量下降50%。同時(shí)，GAs合成代謝途徑的關(guān)鍵基因hmgr、sqs、lss轉(zhuǎn)錄水平均下調(diào)，GAs產(chǎn)量降低25%。通過回補(bǔ)1 mmol/L H2O2，關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄水平和GAs的產(chǎn)量恢復(fù)至野生型菌株水平。轉(zhuǎn)錄因子GlSkn7參與細(xì)胞壁的合成、孢子形成及胞內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)，是ROS系統(tǒng)不可或缺的一部分，維持ROS的穩(wěn)態(tài)。以靈芝菌G. lucidum ACCC53264為原始菌株，通過敲除Glskn7獲得的Skn7i-5和Skn7i-7菌株，H2O2含量上升73.7%和76.4%，ROS水平是原始菌株的1.78和1.82倍，GAs分別提高了52.1%和55.9%。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)顯示hmgr轉(zhuǎn)錄水平上升56%、52%，sqs上調(diào)49%、53%，lss上調(diào)95%、93%。在突變菌株中加入5 mmol/L活性氧清除劑N-乙酰半胱氨酸（NAC），GAs濃度降低至與野生型菌株相同水平［39］。同樣地，當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子PacC沉默時(shí)，胞內(nèi)SOD、CAT、Gpx、Apx等抗氧化酶活性下降幅度超過40%，ROS水平上升幅度超過2倍，GAs積累量明顯提升［40］，而回補(bǔ)1 mmol/L NAC 和 2 mmol/L維生素C時(shí)，突變菌株的GAs水平下降并與出發(fā)菌株持平［41］。這些研究結(jié)果表明胞內(nèi)ROS水平與GAs合成代謝水平存在相關(guān)性，隨著胞內(nèi)ROS水平的變化，轉(zhuǎn)錄因子隨之變化并對(duì)GAs合成代謝途徑產(chǎn)生調(diào)控作用［45］。

3.3 細(xì)胞壁完整性信號(hào)

當(dāng)植物生存環(huán)境受到外界脅迫時(shí)，會(huì)產(chǎn)生對(duì)植物具有保護(hù)作用的次級(jí)代謝物質(zhì)，提高生存競(jìng)爭(zhēng)力［46］，而細(xì)胞壁是植物應(yīng)答外界脅迫的第一環(huán)節(jié)。細(xì)胞壁完整性（cell wall intesrity，CWI）信號(hào)由絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）模塊組成，主要參與細(xì)胞壁完整性調(diào)控。經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比、功能域和進(jìn)化樹分析，在G. lucidum HG菌株發(fā)現(xiàn)了編碼MAPK模塊的基因mapk4。與野生型菌株相比，多株mapk4沉默菌株都表現(xiàn)出生長(zhǎng)速率減慢、菌絲分叉增多、細(xì)胞壁厚度減小。關(guān)鍵基因hmgr、sqs、lss轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)明顯，鯊烯、羊毛甾醇含量分別下降55%和50%，GAs含量最大降低40%。同時(shí)，研究人員還發(fā)現(xiàn)部分mapk4沉默菌株中H2O2含量約減少70%，NADPH氧化酶家族（noxA、noxB、noxR）基因表達(dá)量降低［42］，這與Glswi6的調(diào)控路徑高度一致。

由此看來(lái)，Ca2+、ROS、CWI、NO、cAMP、JA以及其衍生物的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑并不是單獨(dú)作用，而是相互影響的，并且主要以鈣調(diào)磷脂酶信號(hào)和ROS信號(hào)為主（圖2）。其次，與以單個(gè)基因?yàn)榘悬c(diǎn)的關(guān)鍵酶過表達(dá)方法不同，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑通過影響涉及多個(gè)代謝途徑的大量基因，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)這些途徑的整體上調(diào)或下調(diào)。

圖2 靈芝菌胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)示意圖Fig. 2 Schematic diagram of intracellular signal transduction in G. lucidum

4 全局性調(diào)控因子與生物表觀遺傳的調(diào)控

不同于調(diào)控單一基因的特異性調(diào)控因子，全局性調(diào)控因子能夠同時(shí)調(diào)控多個(gè)基因簇內(nèi)的基因表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)多種次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物合成干預(yù)。生物表觀遺傳是微生物調(diào)控自身次級(jí)代謝產(chǎn)物合成的一種方式，其分子機(jī)制有DNA甲基化、羥甲基化、組蛋白修飾、染色體重塑、核小體定位以及非編碼RNA調(diào)控等。

4.1 全局性調(diào)控因子LaeA

靈芝菌中全局性調(diào)控因子LaeA可以通過激活沉默基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)增加GAs積累量的目的。賀望興等［47］發(fā)現(xiàn)振蕩培養(yǎng)和液體靜置培養(yǎng)兩種方式下LaeA表達(dá)出現(xiàn)差異，靜置培養(yǎng)下LaeA表達(dá)量和GAs含量均高于振蕩培養(yǎng)，倍數(shù)分別為3.3和9.4倍，因此研究人員猜測(cè)蛋白LaeA通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響GAs的次級(jí)代謝途徑。有人推測(cè)類似于構(gòu)巢曲霉，LaeA是與Velvet蛋白家族的2個(gè)成員形成LaeAVeA-VelB三聚體復(fù)合物從而調(diào)控著靈芝的次級(jí)代 謝［48-49］，但是真正的機(jī)制有待探索。

4.2 DNA甲基化

DNA甲基化是維持植物正常發(fā)育必須的，具有不可替代的作用。藍(lán)麗雯等［50］利用DNA甲基化抑制劑5-氮雜胞苷（5-azacytidine，5-AC）對(duì)GAs的代謝進(jìn)行誘導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)，在靈芝的液體靜置培養(yǎng)基中添加1 mmol/L 5-AC時(shí)，靈芝孢子中靈芝酸Mk、T、S、Me含量達(dá)到最高，是對(duì)照組的3-4倍。靈芝酸Mk和靈芝酸S的含量分別達(dá)到13.10和12.33 mg/g。hmgr、sqs、se和lss的表達(dá)量分別是對(duì)照組的6.26、3.10、3.42和4.32倍。同時(shí)，研究人員還發(fā)現(xiàn)全局性調(diào)控因子LaeA的表達(dá)量是對(duì)照組的2.83倍，間接證明激活LaeA的表達(dá)有利于提高GAs積累量。

4.3 組蛋白乙?；?/h3>

組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（histone acetyltransferases，HATs）可以通過開啟沉默基因?qū)崿F(xiàn)對(duì)次級(jí)合成代謝途徑的調(diào)控。辛二酰苯胺異羥肟酸（vorinostat，SAHA）能有效抑制組蛋白去乙?；福╤istone deacetylase，HDAC）的活性，從而促進(jìn)組蛋白的乙酰化。通過向培養(yǎng)基中加入180 μmol/L的SAHA，靈芝培養(yǎng)第9天時(shí)組蛋白去乙?；窻PD3水平上調(diào)，其轉(zhuǎn)錄水平是對(duì)照組的6倍，組蛋白H3乙酰化的水平無(wú)差異，組蛋白H4乙?；乃绞菍?duì)照組的1.6倍。在靈芝培養(yǎng)第6、12天時(shí)檢測(cè)GAs的含量比對(duì)照組降低36%、45%。向培養(yǎng)基中加入60 μmol/L和180 μmol/L的SAHA，在第6天檢測(cè)hmgr、sqs、se和lss基因表達(dá)量均高于空白組，而在第12天時(shí)這4個(gè)基因表達(dá)量均低于空白組。對(duì)全局性調(diào)控因子LaeA和Velvet檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同SAHA濃度、不同天數(shù)下靈芝菌的LaeA和Velvet表達(dá)均受到抑制［51］。因此猜測(cè)靈芝中的組蛋白乙?；降纳仙种屏巳终{(diào)控因子LaeA和蛋白Velvet的表達(dá)，從而導(dǎo)致GAs的積累量降低。

綜上發(fā)現(xiàn)，全局調(diào)控因子與表觀遺傳存在緊密的聯(lián)系。通過抑制DNA甲基化，全局性調(diào)控因子LaeA的表達(dá)量增加，GAs合成代謝途徑正向激活。組蛋白乙?；瘯?huì)抑制全局調(diào)控因子LaeA和Velvet的表達(dá)，導(dǎo)致GAs的積累量降低。

5 總結(jié)與展望

在GAs合成代謝途徑方面，前兩個(gè)階段的多個(gè)關(guān)鍵酶已經(jīng)被克隆表征，并得到研究。第3個(gè)階段中，目前發(fā)現(xiàn)78個(gè)CYP450可能參與到GAs骨架結(jié)構(gòu)修飾中，但是僅僅闡明cyp5150l8、cyp512U6、cyp505D13這3種基因參與下游途徑，其余CYP450s的作用機(jī)制仍不清晰，這將是未來(lái)研究的重點(diǎn)方向之一。在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑方面，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及之間存在的相互作用，未來(lái)將會(huì)聚焦到轉(zhuǎn)錄因子對(duì)GAs合成基因的影響機(jī)理上，例如利用染色質(zhì)免疫沉淀-測(cè)序等技術(shù)揭示調(diào)控元件的高維相互關(guān)系水平，并從頭注釋新的功能基因組區(qū)域。在全局性調(diào)控因子與生物表觀遺傳方面，構(gòu)建靈芝工程菌時(shí)可以通過減少DNA甲基化水平和組蛋白乙酰化水平以促進(jìn)GAs的合成代謝。

完全解析GAs的合成代謝途徑、共表達(dá)多個(gè)關(guān)鍵酶以增強(qiáng)代謝流、挖掘信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的深層作用機(jī)制、尋找合適的底盤生物實(shí)現(xiàn)其異源表達(dá)，整合轉(zhuǎn)錄、RNA加工和翻譯，以及翻譯后的修飾等多水平調(diào)控，將在靈芝深層液體發(fā)酵工藝中實(shí)現(xiàn)周期短、效價(jià)高的最終目的，并為GAs商業(yè)應(yīng)用的進(jìn)一步擴(kuò)大打下基礎(chǔ)。