程沈菊 聶 波 楊金榮 賀振新 李艷紅 羅 珊 武 坤▲

1.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，云南昆明650032；2.云南省檢驗醫(yī)學(xué)重點實驗室，云南昆明650032；3.臨床檢驗診斷省創(chuàng)新團隊，云南昆明650032；4.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科，云南昆明650032；5.云南省血液病研究中心，云南昆明650032

惡性淋巴瘤是機體造血系統(tǒng)常見的一類惡性腫瘤，目前其治療方案是主要以化療為主的綜合療法，對于部分預(yù)后不良因素較多的患者，單純化療效果較差[1-2]。自20世紀90年代開始，隨著對淋巴瘤發(fā)病機制研究的不斷深入，自體外周血造血干細胞移植（autologous hematopoietic stem cell transplantation，Auto-HSCT）在治療惡性淋巴瘤患者中取得了顯著療效[3-4]。孫穎等[5]研究表明，Auto-HSCT治療淋巴瘤能夠增強腫瘤緩解率，降低復(fù)發(fā)率并延長患者生存時間。然而由于造血干細胞自動員到采集時的環(huán)節(jié)較多，接近5%～46%患者進行外周血造血干細胞采集時難以達到移植需要的細胞數(shù)目，影響治療效果[6]。故本研究收集昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院86例惡性淋巴瘤患者的臨床資料，分析影響患者外周血造血干細胞采集的相關(guān)因素，為進一步提高患者干細胞采集效率提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年2月至2020年6月收治的86例惡性淋巴瘤患者的臨床資料，所有患者均行Auto-HSCT方案治療，其中男52例，女34例，年齡15～65歲，平均（42.06±11.37）歲。86例患者中非霍奇金淋巴瘤64例，包括彌漫性大B淋巴瘤31例、T細胞淋巴瘤8例、NK/T細胞淋巴瘤5例、間變大細胞淋巴瘤5例、其他類型15例?；羝娼鹆馨土?2例，包括結(jié)節(jié)硬化型16例、混合細胞型6例。

納入標準：①臨床資料完整；②符合惡性淋巴瘤的診斷標準[1]，并經(jīng)病理學(xué)確診；③精神狀態(tài)正常，能順利配合治療。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②妊娠、哺乳期婦女；③合并自身免疫性疾?。虎芩幬镞^敏者。

1.2 外周血造血干細胞的動員與采集

1.2.1 采集檢測儀器 德國費森尤斯COM.TEC型血細胞分離機（北京埃克森科技有限公司，批號：9008021）；美國BD FACSCantoⅡ型流式細胞儀（北京眾力挽生物科技有限公司，批號：V145687）；日本SysmexXN型血細胞分析儀（涵飛醫(yī)療科技有限公司，批號：2400324）。

1.2.2 建立靜脈通路 首先采用兩側(cè)正中或貴要靜脈進行穿刺，穿刺失敗或血管條件差者可選擇股靜脈穿刺留置雙腔管，以保證采集順利。

1.2.3 采集方法 根據(jù)患者病情的差異選擇相應(yīng)的化療方案并聯(lián)合重組人粒細胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF）（輝瑞制藥生物科技有限公司，批號：S20063065）進行動員，化療過程中密切監(jiān)測患者外周血白細胞（white blood cell，WBC）水平，當(dāng)WBC水 平 低 于1.0×109/L時 注 射rhGCSF[5～10μg/（kg·d）]，同時每天復(fù)查外周血WBC，當(dāng)外周血WBC水平升至（6～15）×109/L，并且單個核細胞（mononuclear cell，MNC）超過30%，開始造血干細胞采集。選擇血細胞分離機autoMNC程序，輸入患者性別、體重、身高、外周血WBC、血小板等相關(guān)參數(shù)，采集時根據(jù)患者具體情況隨時調(diào)整。使用ACD-A型抗凝劑（青島捷世康生物科技有限公司，批號：T2574），循環(huán)血量設(shè)為2.5～3.5倍患者血容量（量約8～12 L），全血流速為45～55 ml/min，采集時間為2～4 d。采集過程中嚴密觀察患者癥狀，一旦出現(xiàn)不良反應(yīng)需及時予以對癥處理。

1.3 觀察指標

采集結(jié)束后根據(jù)血常規(guī)計算采集液MNC數(shù)量，使用流式細胞儀技術(shù)檢測CD34+細胞百分比，同時計數(shù)采集標本有核細胞數(shù)目，CD34+細胞數(shù)量（×106/kg）=采集液白細胞總數(shù)×CD34+細胞所占有核細胞百分比/采集者體重。分析采集者每千克體重CD34+細胞數(shù)量與患者性別、年齡、淋巴瘤病理類型及分期、血常規(guī)指標、動員采集時間、化療時間、病程時間、是否輸血等因素間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 患者一般資料描述

本研究中，86例患者共行288次外周血造血干細胞采集，所有患者一般資料統(tǒng)計結(jié)果見表1。

表1 患者一般資料（±s）

表1 患者一般資料（±s）

?

2.2 不同病理類型及分期間CD34+細胞數(shù)比較

霍奇金淋巴瘤與非霍奇金淋巴瘤間，不同病理類型及分期的淋巴瘤采集者每千克體重CD34+細胞數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同病理類型及分期間CD34+細胞水平差異比較（±s）

表2 不同病理類型及分期間CD34+細胞水平差異比較（±s）

?

2.3 影響采集CD34+細胞水平單因素分析

不同性別、不同動員時間、是否輸血、外周血WBC水平采集者每千克體重CD34+細胞數(shù)量無明顯差異（P＞0.05），而患者年齡、病程時間、化療療程、有核細胞水平是影響CD34+細胞采集數(shù)的重要因素，年齡越大、病程時間越長、化療療程越多、外周血MNC越低，CD34+細胞采集數(shù)量越少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 影響CD34+細胞采集水平單因素分析（±s）

表3 影響CD34+細胞采集水平單因素分析（±s）

?

2.4 影響采集CD34+細胞水平多因素logistic回歸分析

將單因素分析有意義的指標設(shè)為自變量（賦值情況見表4），采集CD34+細胞水平高于平均值為高水平，否則為低水平，CD34+細胞采集水平設(shè)為因變量（0=高水平，1=低水平），全部納入多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示病程時間、化療療程、有核細胞水平是影響CD34+細胞采集水平的獨立性危險因素。見表5。

表4 不同指標賦值情況

表5 影響CD34+細胞采集水平多因素logistic回歸分析

3 討論

Auto-HSCT是治療白血病、淋巴瘤、骨髓增生異常綜合征等各類血液系統(tǒng)疾病的重要方法，其在患者治療的合適時期采集自身造血干細胞進行特殊處理后保存，當(dāng)患者進行放化療后進行回輸繼而促進造血功能的恢復(fù)[7-8]。喬營等[9]報道顯示確保移植成功的關(guān)鍵因素是獲取足夠數(shù)量的干細胞，以確保進行移植時達到最低閾值數(shù)，才能夠在患者體內(nèi)增殖分化。由于造血干細胞的動員到采集過程復(fù)雜，部分患者難以采集足夠數(shù)量的細胞，故探討影響Auto-HSCT細胞采集數(shù)量的因素對提高采集效率具有重要的臨床意義。目前臨床醫(yī)生多采用CD34+細胞數(shù)作為評估采集造血干細胞水平的指標[10]，本研究中筆者以CD34+細胞數(shù)量代表造血干細胞的采集水平進行分析。

本研究結(jié)果顯示，患者年齡、病程時間、化療療程、外周血MNC是影響CD34+細胞采集數(shù)量的重要因素，其中年齡越大、病程時間越長、化療療程越多、外周血MNC越低患者CD34+細胞采集數(shù)量越少，而患者性別、動員時間、是否輸血及WBC水平與CD34+細胞采集水平無關(guān)，值得臨床醫(yī)生關(guān)注。具體原因分析如下，年齡越高，CD34+細胞采集水平越低，主要由于隨著年齡的增長，患者自身骨髓儲備能力逐漸減退，同時化療的不良反應(yīng)引起骨髓抑制，提高了造成干細胞的動員采集難度[11]。因此對于老年患者，應(yīng)慎重選擇Auto-HSCT進行治療，必要時需要進行兩次動員采集，同時應(yīng)盡早進行首次動員采集[12]。

患者動員采集前的病程時間和化療療程對采集效率有一定的影響。本研究結(jié)果顯示患者病程時間越長、所經(jīng)歷的化療療程越多，CD34+細胞采集數(shù)量越少，這一結(jié)果與Cottler-Fox等[13]的研究結(jié)論一致，主要由于患者經(jīng)過多次大劑量的重復(fù)化療，引起患者多潛能造血干細胞損耗過多，同時機體骨髓造血功能的抑制作用增強，降低了骨髓再生能力，影響干細胞采集效率。本研究對CD34+細胞采集水平與患者血常規(guī)指標分析發(fā)現(xiàn)，CD34+細胞采集水平與患者外周血WBC水平無相關(guān)性，而與外周血單個核細胞的絕對值密切相關(guān)。因此患者外周血單個核細胞的絕對值能夠作為預(yù)測患者CD34+細胞水平的簡易指標，這一結(jié)果與陸華等[14]報道類似。本研究也存在一定局限性，首先本研究結(jié)果僅代表云南地區(qū)患者的研究結(jié)果，病例數(shù)有限，對于其他地區(qū)能否得到同樣的結(jié)果值得進一步研究[15]；另外本研究為回顧性分析，研究過程中可能存在極端值的情況和醫(yī)師的回顧偏倚；同時由于不同醫(yī)師的采集水平可能對結(jié)果產(chǎn)生影響，本研究未對醫(yī)師的采集水平進行量化評估。

綜上所述，對于年齡大、病程時間長、化療療程多、有核細胞數(shù)低患者，外周血造血干細胞的采集效率較低，對于淋巴瘤患者外周血干細胞采集要取得更好的效果，應(yīng)盡早進行動員，必要時需進行兩次動員采集，以提高成功采集的幾率和安全性。