陳龍 王佳陪 王敏 買莉 張萍

【摘 要】目的：分析宮頸HPVE6/E7mRNA檢查在宮頸癌篩查中與宮頸HPV-DNA檢查在宮頸癌篩查中的區(qū)別。方法：采集1084例宮頸HPVE6/E7mRNA標(biāo)本，檢測(cè)HPVE6/E7mRNA，同時(shí)檢測(cè)HPV-DNA；以病理活組織病理檢查為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)宮頸HPVE6/E7mRNA及宮頸HPV-DNA進(jìn)行，敏感性、特異性及KAPPA值等進(jìn)行對(duì)比，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：以病理活組織病理檢查為標(biāo)準(zhǔn)，839例二個(gè)分組中，HPVE6/ E7mRNA與HPV-DNA結(jié)果差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HPVE6/E7mRNA對(duì)于查出宮頸高級(jí)別以上病變優(yōu)于HPV-DNA，而在篩出宮頸低級(jí)別以上病變略差于HPV-DNA。結(jié)論：宮頸癌篩查中檢測(cè)HPVE6/E7mRNA對(duì)于宮頸癌篩查具有一定的臨床意義，是HPV-DNA檢查的補(bǔ)充。

【關(guān)鍵詞】宮頸癌篩查；HPVE6/E7mRNA；HPV-DNA

研究發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒（humanpapillomaviruse，HPV）是引起宮頸癌和宮頸癌前病變的罪魁禍?zhǔn)?。因此，?duì)于HPV的檢測(cè)是對(duì)宮頸病變篩查的常見手段。HPV病毒的基因片段包括L區(qū)和E區(qū)，其中E6/E7是致癌基因，HPV通過產(chǎn)生E6/E7蛋白抑制細(xì)胞P53和Rb通路促使細(xì)胞無規(guī)則生長(zhǎng)，導(dǎo)致病變發(fā)生。而從基因DNA到能實(shí)施作用的蛋白質(zhì)，必然經(jīng)過mRNA的介入。因此，采用HPVE6/E7mR NA檢測(cè)是否存在致病性更合理，從而提示病毒活動(dòng)度及致癌風(fēng)險(xiǎn)。本研究旨在分析高危人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7mRNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的意義及與HPV-DNA檢查中的區(qū)別。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2016年10月至2020年6月在銀川市婦幼保健院宮頸細(xì)胞學(xué)刮取標(biāo)本共1084例，進(jìn)行HPVE6/E7mRNA檢查，并行HPVDNA檢查，其中839例行活組織病理學(xué)檢查。整體選取患者年齡18歲～77歲，平均年齡（39.13±22.39）歲。

1.2 分組

第一分組：對(duì)于活檢高級(jí)別及癌癥分為陽性組，活檢低級(jí)別及炎癥分為陰性組。第二分組：對(duì)于活檢為低級(jí)別、高級(jí)別及癌癥為陽性組，活檢為炎癥分為陰性組。

2 方法

2.1 mRNA檢測(cè)

將宮頸刮取標(biāo)本，以3000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，去上清液，用2毫蒸餾水清洗后再離心，去上清液，加入裂解劑，65℃水浴30分鐘，得到裂解液。將裂解液加入2.5mol/LNaOH，55℃水浴30分鐘，加入終止反應(yīng)液終止反應(yīng)，放95℃加熱5分鐘。2）RNA檢測(cè)：從前述已制備好的標(biāo)本裂解液中取出實(shí)驗(yàn)所需量，根據(jù)10：1（標(biāo)本量：2.5mol/LNaOH）的比例加入2.5mol/LNaOH，55℃水浴30分鐘，加入終止反應(yīng)液，95℃的溫箱水浴中加熱5分鐘，并信號(hào)放大及加入熒光染色，再放入冷光儀分析得出結(jié)果。

2.2 DNA檢測(cè)

1.使用宮頸脫落細(xì)胞采集器采集的樣本提取800ul～1000ul，按順序加入到離心管中，并在離心管蓋上標(biāo)明編號(hào)。2.把離心管放入高速離心機(jī)，13000轉(zhuǎn)/分鐘 ，離心三分鐘。3.吸掉上清，加入500ul細(xì)胞保存液，振蕩重懸細(xì)胞直至細(xì)胞完全散開，上高速離心機(jī)離心三分鐘。4.吸掉上清，加入細(xì)胞裂解液50ul，充分振蕩重懸細(xì)胞，煮沸10分鐘（此過程上清盡量吸干凈）。5.將煮沸的樣本上高速離心機(jī)13000轉(zhuǎn)/10分鐘，保留上清備用。6.從試劑盒中取出PCR混合液，室溫下避光解凍，解凍后將DNA聚合酶（0.5ul）分別加入到每管試劑中，振蕩混勻，離心8000轉(zhuǎn)/10s。7.將配好的擴(kuò)增試劑充分混勻，8000轉(zhuǎn)/分鐘10s，然后取18ul分別加入到所對(duì)應(yīng)的八連管中蓋好蓋。8.在對(duì)應(yīng)的PCR反應(yīng)管中分別加入處理好的標(biāo)本。9.放入熒光PCR檢測(cè)儀內(nèi)。按設(shè)置好的程序運(yùn)行，并記錄結(jié)果。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)。不同病理級(jí)別E6E7mRNA及HPVDNA檢出率差別采用配對(duì)2χ檢驗(yàn)。并計(jì)算診斷敏感度、特異性、陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值等由SAS9.0軟件編程計(jì)算。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié)果

3.1 HPVE6/E7mRNA陽性率為56.73%，HPV DNA陽性率為42.31%。

3.2 在第一組中HPVE6/E7mRNA及HPV-DNA的陽性對(duì)比，見表1。

3.3 在第二組中HPVE6/E7mRNA及HPV-DNA的陽性對(duì)比，見表2。

3.4 在第一分組中HPVE6/E7mRNA靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽性預(yù)測(cè)值、KAPPA值、約登指數(shù)及診斷符合率分別為92.58%，56.72%，95.32%，44.54%，0.37，0.49，66.51%，而HPV-DNA靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽性預(yù)測(cè)值、KAPPA值、約登指數(shù)及診斷符合率分別為57.21%，63.28%，79.75%，36.90%，0.17，0.20，61.62%。

3.5 在第二分組中中HPVE6/E7mRNA靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽性預(yù)測(cè)值、KAPPA值、約登指數(shù)及診斷符合率分別為64.45%，58.51%，45.45%，75.42%，0.21，0.23，62.46%，而HPV-DNA靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽性預(yù)測(cè)值、KAPPA值、約登指數(shù)及診斷符合率分別為52.60%，78.01%，45.45%，82.54%，0.26，0.31，61.14%。

4 討論

4.1 在不同組中HPVE6/E7mRNA和HPV-DNA結(jié)果的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.2 第一分組中HPVE6/E7mRNA與HPV-DNA結(jié)果對(duì)比發(fā)現(xiàn)HPVE6/ E7mRNA從靈敏度、陰性預(yù)測(cè)值、KAPPA值及約登指數(shù)均高于HPV- DNA，而特異性及陽性預(yù)測(cè)值兩者差別不大，第一分組是將小于等于低級(jí)別病變與高于且等于高級(jí)別病變分開，所以對(duì)于宮頸高級(jí)別病變的檢出HPVE6/E7mRNA檢查要優(yōu)于HPV-DNA檢查。

4.3 第二分組中HPVE6/E7mRNA與HPV-DNA結(jié)果對(duì)比中發(fā)現(xiàn)。HPV-DNA從特異性、陽性預(yù)測(cè)值、KAPPA值及約登指數(shù)均高于HPVE6/ E7mRNA，而靈敏度HPVE6/E7mRNA高于HPV-DNA，陰性性預(yù)測(cè)值兩者差別不大，第二分組是將炎癥與高于且等于低級(jí)別病變分開，所以對(duì)于宮頸病變的檢出檢查HPV-DNA要優(yōu)于HPVE6/E7mRNA檢查。

綜上所述，HPVE6/E7mRNA及HPV-DNA做為宮頸病變的篩查方法，在檢出宮頸高級(jí)別及以上病變中HPVE6/E7mRNA更具優(yōu)勢(shì)，而HPVDNA在檢出宮頸病變中更具優(yōu)勢(shì)。因此，HPVE6/E7mRNA檢查是HPVDNA很好的一個(gè)補(bǔ)充。

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