但文超，劉子彰，何慶勇，李 萍，張 輝，陳 鑫

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院 北京100053；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 北京100029）

慢性膽囊炎是指膽囊的慢性炎癥，多由膽囊結(jié)石誘發(fā)，也可由感染、急性膽囊炎反復(fù)發(fā)作等因素所致[1]，臨床癥狀以反復(fù)右上腹疼痛不適、噯氣、腹脹、厭食油膩為主。隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變，慢性膽囊炎發(fā)病率不斷增加。目前國內(nèi)尚缺乏權(quán)威的流行病學(xué)資料，一般認(rèn)為[2]成人發(fā)病率為0.78%-3.91%，發(fā)病率隨年齡增長而上升，女性發(fā)病率高于男性。臨床醫(yī)生往往更關(guān)注可危及生命的急性膽囊炎，對于病程較長、常遷延難愈的慢性膽囊炎研究較少。慢性膽囊炎最新診療共識意見缺乏推薦強(qiáng)度較高的口服藥物，證據(jù)等級偏下?，F(xiàn)階段針對慢性膽囊炎的治療多以促進(jìn)膽汁分泌、抗感染、解痙鎮(zhèn)痛等對癥治療為主，缺乏遠(yuǎn)期療效的評估[3]。若患者慢性膽囊炎癥狀明顯、反復(fù)發(fā)作，建議行腹腔鏡膽囊切除術(shù)等外科手術(shù)[4]，然而術(shù)后可能出現(xiàn)Oddi括約肌功能障礙（sphincter of Oddi dysfunction，SOD）、膽囊切除術(shù)后綜合征等[5]，降低患者生活質(zhì)量。

中醫(yī)藥治療慢性膽囊炎歷史悠久，遠(yuǎn)期療效較佳，可以顯著提高患者生活質(zhì)量。目前已有中醫(yī)藥治療慢性膽囊炎的共識意見[6]，但對于中醫(yī)中藥治療慢性膽囊炎的數(shù)據(jù)挖掘較少。中醫(yī)突出個體治療，強(qiáng)調(diào)辨證用藥，更豐富的用藥選擇對于提高臨床療效具有重要意義。國家專利中藥復(fù)方作為現(xiàn)代組方選藥、新藥上市的一個重要組成部分，多為醫(yī)生用藥智慧的匯聚，長期臨床經(jīng)驗(yàn)的結(jié)晶，具備較強(qiáng)的可重復(fù)性和適用性。本研究擬通過挖掘中治療慢性膽囊炎的中藥復(fù)方專利配伍規(guī)律，以冀為臨床治療慢性膽囊炎提供新的用藥參考。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源

登入“國家知識產(chǎn)權(quán)局-中國專利公布公告”界面（http://epub.sipo.gov.cn/），在其“高級查詢”的“專利類型”中選擇“發(fā)明授權(quán)”與“發(fā)明公布”，并在欄目下方的“名稱”或“摘要”選項(xiàng)中以“膽囊炎”為關(guān)鍵詞，并限定分類號為“A61P OR A61K”進(jìn)行檢索。對初步檢索結(jié)果進(jìn)行合并，篩選后得到最終數(shù)據(jù)。檢索時(shí)段跨度為建庫至2020年6月31日。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：干預(yù)慢性膽囊炎的中藥復(fù)方專利；干預(yù)慢性膽囊炎含中藥萃取物的專利；專利項(xiàng)目名稱未明確說明干預(yù)慢性膽囊炎，但其摘要或詳情頁中說明可干預(yù)慢性膽囊炎的專利。

排除標(biāo)準(zhǔn)：非干預(yù)慢性膽囊炎的專利，如“一種治療急性膽囊炎的中藥湯劑”；排除食品、飲品、保健品類專利，如“一種治療膽囊炎的綠豆保健茶的制備方法”；使用方法為外用的專利，如“治療慢性膽囊炎的外用中藥膏劑”；治療病種出現(xiàn)合并病的專利，如“一種治療糖尿病性膽囊炎的中藥組合”。

1.3 數(shù)據(jù)規(guī)范及錄入

藥物名稱規(guī)范優(yōu)先參照2020年版《中華人民共和國藥典》[7]，如“蟬衣”更改為“蟬蛻”，“川穹”更改為“川芎?！比纭吨腥A人民共和國藥典》未收載，則按照《中藥大辭典》[8]、《中華本草》[9]規(guī)范。復(fù)方專利中若中藥組成相同但劑型、制備工藝相異，該藥物組合僅錄入1次。按照雙盲錄入原則展開錄入工作并校對，把控2次數(shù)據(jù)結(jié)果相異率在1%以下。

1.4 數(shù)據(jù)與網(wǎng)絡(luò)分析

運(yùn)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行藥物頻數(shù)統(tǒng)計(jì)和系統(tǒng)聚類分析，借助IBM SPSS Modeler 18.0軟件建模后實(shí)施Apriori關(guān)聯(lián)規(guī)則分析?？紤]到中藥使用概率并非均等，且Apriori算法評判標(biāo)準(zhǔn)相對單一的不足，故通過Cytoscape 3.8[10]構(gòu)建中藥共現(xiàn)核心復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，計(jì)算中藥在網(wǎng)絡(luò)中的拓?fù)鋵W(xué)屬性值，并提取密集連接的中藥集群。

2 結(jié)果

2.1 中藥專利公布情況

經(jīng)初步檢索得到665項(xiàng)專利，篩選后得到432項(xiàng)，所納入專利公布時(shí)段為1992年10月至2019年11月。432項(xiàng)專利年度公布數(shù)量變化趨勢見圖1。圖1表明干預(yù)慢性膽囊炎專利復(fù)方的研制漸受關(guān)注。近2年數(shù)據(jù)下降可能與部分專利審核工作尚未完成有關(guān)。

圖1 1992年-2019年干預(yù)慢性膽囊炎中藥復(fù)方專利公布情況

2.2 藥物頻數(shù)

432項(xiàng)專利共涉及藥物1049味，所納入單項(xiàng)專利藥味數(shù)最多為50味，平均（13±5.83）味，高頻藥物有郁金（179次，41.44%）、柴胡（163次，37.33%）、金錢草（151次，34.95%）、茵陳（136次，31.48%）等（表1）。統(tǒng)計(jì)所納入專利中藥四氣五味信息，復(fù)方專利干預(yù)慢性膽囊炎的中藥多歸肝、胃二經(jīng)，性味以寒、苦居多（圖2）。

表1 432項(xiàng)中藥復(fù)方專利干預(yù)慢性膽囊炎高頻藥物（≥60次）

圖2 中藥四氣五味及歸經(jīng)統(tǒng)計(jì)（頻數(shù)≥3）

2.3 中藥的關(guān)聯(lián)分析

分析錄入的432項(xiàng)專利中的藥物組合，運(yùn)用Apriori模型，設(shè)置條件支持度≥10%，規(guī)則置信度≥70%，最大前項(xiàng)數(shù)設(shè)定為2。統(tǒng)計(jì)得出最小支持度10.88%，最大支持度為37.50%。支持度越高，對應(yīng)的規(guī)則出現(xiàn)頻率越高。所得具有較強(qiáng)關(guān)聯(lián)規(guī)則的藥對及角藥組合，見圖3、表3。

圖3 二項(xiàng)關(guān)聯(lián)分析

表3 三項(xiàng)關(guān)聯(lián)分析（支持度≥10%，置信度≥75%）

2.4 中藥核心復(fù)雜共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

為分析各個中藥在整體網(wǎng)絡(luò)中的作用并挖掘核心藥物關(guān)系，利用Cytoscape 3.8軟件構(gòu)建中藥共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)，并計(jì)算中藥在網(wǎng)絡(luò)中的拓?fù)鋵W(xué)特征，包括中藥連接度（Degree）、中藥接近中心性（Closeness Centrality，CC）、中藥中介中心性（Between Centrality，BC）。中藥連接度越高，代表其在整體網(wǎng)絡(luò)中作用越強(qiáng)。為更直觀的展示網(wǎng)絡(luò)，去除頻數(shù)為2的中藥，得到網(wǎng)絡(luò)1，計(jì)算各個中藥在網(wǎng)絡(luò)1中的Degree值的中位數(shù)，記為k1，選取Degree值大于2倍k1的節(jié)點(diǎn)重新構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)2。分別計(jì)算各個中藥在網(wǎng)絡(luò)2中的Degree值、BC值、CC值的中位數(shù)，分別記為a1，b1，c1。選取Degree值、BC值、CC值分別大于a1，b1，c1的中藥，構(gòu)建最終核心網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)越大，代表中藥Degree值越高，中藥之間連線越粗代表中藥的共現(xiàn)次數(shù)越高。核心中藥網(wǎng)絡(luò)篩選過程見圖4，最終核心網(wǎng)絡(luò)關(guān)系見圖5。核心中藥拓?fù)鋵傩灾狄姳?。

圖4 中藥復(fù)方專利干預(yù)慢性膽囊炎的核心中藥網(wǎng)絡(luò)篩選示意圖

圖5 中藥復(fù)方專利干預(yù)慢性膽囊炎的核心中藥網(wǎng)絡(luò)

表4 中藥復(fù)方專利干預(yù)慢性膽囊炎核心中藥網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵傩灾担―egree>150）

對核心網(wǎng)絡(luò)中藥進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，分析結(jié)果及藥物組合見圖6，結(jié)合中醫(yī)內(nèi)科學(xué)，當(dāng)歐式距離平方為18時(shí)，得出聚類得出9項(xiàng)，其中2味中藥以上的聚類項(xiàng)有4類（表5）。

表5 核心中藥聚類分析結(jié)果

圖6 中藥聚類分析結(jié)果

2.5 潛在中藥集群分析

配伍是中藥與方劑間的紐帶。復(fù)方專利不但具備有效性，其組方亦有一定創(chuàng)新性，復(fù)方專利涉及的中藥品類數(shù)目遠(yuǎn)高于醫(yī)生個體臨床常用中藥集合的數(shù)目。挖掘網(wǎng)絡(luò)中聯(lián)系緊密性強(qiáng)的子網(wǎng)絡(luò)有助于新藥及新方配伍的研制。通過MCODE圖形聚類法能有效尋找共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)中高度互聯(lián)的區(qū)域[11]，聚類所得專利中臨床非常用藥物高度互聯(lián)子網(wǎng)絡(luò)見圖7，其中Score值越高代表子網(wǎng)絡(luò)中藥互聯(lián)強(qiáng)度越高。

圖7 中藥復(fù)方專利中臨床非常用藥物高度互聯(lián)子網(wǎng)絡(luò)圖

3 討論

慢性膽囊炎在中醫(yī)學(xué)可歸屬于“膽脹”、“脅痛”、“腹痛”、“黃疸”等范疇，《靈樞·脹論第三十五》中提出了慢性膽囊炎的癥狀特點(diǎn)，包括“膽脹者，脅下痛脹，善太息”等。慢性膽囊炎形成的基本病因病機(jī)多為蟲石阻滯、感受外邪、飲食不調(diào)、情志不遂、勞傷過度等因素誘使肝膽疏泄失職，膽腑通降受阻，發(fā)為膽脹。據(jù)最新中醫(yī)治療膽囊炎的共識意見[6]，其常見證型可分為肝膽氣滯、肝郁脾虛、肝膽濕熱、膽熱脾寒等證。臨證主要辨治大法多采用疏肝理氣、疏肝健脾、清熱利濕、溫脾通陽。

研究納入專利432項(xiàng)，包含1049味藥物，通過頻次分析及復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析，得到高頻藥物有郁金、茵陳、柴胡、金錢草等。慢性膽囊炎核心病理為膽腑通降不利，濕熱瘀血蘊(yùn)于局部。而高頻藥物郁金既可降氣利膽，又可入血分而清熱，其藥效與慢性膽囊炎病機(jī)對應(yīng)關(guān)系可謂絲絲入扣。根據(jù)性狀不同，現(xiàn)今臨床所用郁金可分溫郁金、黃絲郁金、桂郁金、綠絲郁金?，F(xiàn)代藥理研究揭示了郁金具有止血、促進(jìn)膽汁分泌、保肝、抗炎鎮(zhèn)痛[6]等作用。動物實(shí)驗(yàn)表明，四種郁金均能明顯抑制兔體內(nèi)血小板聚集，桂郁金可明顯降低ANIT所致黃疸小鼠模型血清中總膽紅素、谷草轉(zhuǎn)氨酶等含量[13]，桂郁金醇提物可明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹[14]。專利多用此藥，不無道理。柴胡味苦性平微寒，《珍珠囊》載有“膽痹非柴胡梢子不能除”的論述。柴胡味薄氣升，可散肝郁、利膽腑，已被廣泛應(yīng)用于各類肝膽疾患。柴胡的現(xiàn)代藥理研究頗多，其具有解熱鎮(zhèn)痛、保肝、抗病毒等多種活性[15]，如動物實(shí)驗(yàn)表明柴胡及醋柴胡均可減輕四氯化碳造成的小鼠肝損傷，并能降低小鼠的谷草轉(zhuǎn)氨酶與谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平[16]。

茵陳、金錢草作為治療肝膽疾病的常用藥淵源已久，《神農(nóng)本草經(jīng)·上品》中記載茵陳：“味苦，平。主風(fēng)、濕、寒、熱邪氣，熱結(jié)黃疸?！秉S元御在《長沙藥解·卷四》中提到茵陳“利水道而泄?jié)褚?，消瘀熱而退黃疸”?！秱摗分幸砸痍悶橐幍囊痍愇遘呱?、茵陳蒿湯用治黃疸的學(xué)術(shù)思想沿用至今。現(xiàn)代研究闡釋了[17]茵陳主要是通過增強(qiáng)肝細(xì)胞功能、促進(jìn)膽囊收縮與膽汁分泌、膽汁酸外排發(fā)揮利膽作用。亦有動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)茵陳可以改善膽結(jié)石豚鼠模型的膽囊損傷，且體外豚鼠膽囊肌條的收縮反應(yīng)好轉(zhuǎn)。茵陳含有的綠原酸可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)線粒體能量代謝預(yù)防脂多糖誘導(dǎo)的慢性肝損傷[18]。金錢草其味甘、苦，性涼，《本草綱目拾遺·卷五草部下》載其：“……黃疸初起，又治脫力虛黃”。其多采于農(nóng)歷三月，為春令生發(fā)之時(shí)，功擅清肝利膽，利濕退黃。金錢草可以降低膽汁黏度，促進(jìn)膽汁流動，抑制膽內(nèi)結(jié)石生長，并且可以通過抗炎作用減少肝膽系統(tǒng)的內(nèi)皮細(xì)胞壞死[19]。動物實(shí)驗(yàn)觀察到金錢草水提取物不但可以減輕豚鼠膽囊炎癥狀，更能改善膽囊組織病變程度[20]。

就藥物性味歸經(jīng)而言，復(fù)方專利的中藥以寒性最多，溫性其次。味苦中藥居首，甘、辛分列其次。歸屬肝經(jīng)的藥物最多，其次分別為胃、肺、脾等。性味歸經(jīng)的特點(diǎn)是由于專利復(fù)方中出現(xiàn)的高頻藥物決定的。如柴胡味苦性寒，郁金味辛苦性寒，金錢草甘淡性平，三者性味涵蓋了最多出現(xiàn)的苦、甘、辛味，且均為寒性藥，均入肝、膽經(jīng)?，F(xiàn)代名老中醫(yī)的用藥經(jīng)驗(yàn)也體現(xiàn)了慢性膽囊炎處方性味歸經(jīng)的特點(diǎn)，如謝晶日常用柴胡配伍郁金、金錢草，苦配辛甘，以利氣機(jī)、清濕熱，促進(jìn)膽腑通暢[21]。

通過關(guān)聯(lián)規(guī)則可知，復(fù)方專利常用的對藥有郁金-柴胡、柴胡-白芍、柴胡-黃芩、郁金-金錢草、郁金-茵陳，置信度比較高的角藥組合有：川楝子-金錢草-郁金、白芍-甘草-柴胡、川楝子-柴胡-郁金、大黃-金錢草-郁金、川楝子-金錢草-柴胡等。這些對藥、角藥基本是臨床常用的藥對組合，功用多為清熱利濕、疏肝止痛，適用于慢性膽囊炎各種證型。如：“柴胡-郁金”組合行氣活血止痛，適用于氣滯血瘀證型膽囊炎；“柴胡-黃芩”組合疏利與清熱并重，佐以溫藥適用于膽熱脾寒證；“白芍-柴胡-甘草”組合可養(yǎng)陰柔肝止痛，為肝陰不足常用藥物組合；“川楝子-金錢草-柴胡”組合疏利肝膽，適用于肝膽氣滯證型；“大黃-金錢草-郁金”組合可清熱利濕，為肝膽濕熱證型的常用角藥。

核心聚類藥物組合反映了中藥復(fù)方專利中較多采用的基礎(chǔ)方，對于慢性膽囊炎具有較好的治療作用。通過聚類分析，得出了4個常用藥物組合，分別為：①“柴胡、白芍、川楝子、郁金、金錢草、木香、枳殼、延胡索、黃芩、茵陳、大黃、枳實(shí)”②“香附、青皮、陳皮”③“雞內(nèi)金、金銀花”④“茯苓、白術(shù)”。核心聚類藥物組合①即為大柴胡湯、顛倒木金散、金鈴子散的合方化裁。大柴胡湯在中醫(yī)治療膽囊炎指南中推薦程度極高[22]，為基本底方；顛倒木金散出自《醫(yī)宗金鑒·雜病心法要訣》，以木香行氣、郁金解郁，加強(qiáng)肝膽疏泄功能；金鈴子散由川楝子、延胡索組成，為疏肝止痛名方。該藥物組合在保留大柴胡湯的核心藥物基礎(chǔ)上，去半夏、生姜、大棗，增木香、郁金以行氣活血解郁；增延胡索、川楝子以清熱止痛，加金錢草以清肝利膽。此藥物組合行氣血，散肝郁，利膽濕，降腑氣，定疼痛，適用于氣滯血瘀、肝郁氣滯、肝膽濕熱等多種證型，故此組方可作為臨床基本方與其他中藥配伍組合。核心聚類藥物組合②為香附、陳皮、青皮角藥，青、陳皮均可化痰，青皮疏肝破氣，陳皮健脾和胃，配合香附理氣止痛，可適用于膽熱脾寒、脾胃氣虛等多種證型。核心聚類藥物組合③為雞內(nèi)金、金銀花對藥。雞內(nèi)金健脾消食、化堅(jiān)消石，金銀花清熱解毒，二者相伍，針對膽囊炎熱郁化積的病理環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，臨床可廣泛應(yīng)用于肝膽濕熱等諸多證型。核心聚類藥物組合④為茯苓、白術(shù)，二者相伍，健脾利濕，在膽囊炎的治療中，深和仲景“見肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾”之意，可應(yīng)用于脾虛或氣虛等各種證型。

專利復(fù)方具有一定創(chuàng)新性，且用藥品種極為豐富，包含大量臨床非常用藥物。本次研究通過MCODE圖形聚類法，發(fā)現(xiàn)6組臨床非常用的潛在藥物組合，分別為“鷹不泊-馬絆草-過山楓-寒莓根-槐角-小白撐-草問荊”、“臭草-波棱瓜-水楊柳-糙蘇-連錢草-丁香”、“白首烏-簕莧菜-桑寄生-墨旱蓮-角茴香-朱蘭”等。其中，“鷹不泊-馬絆草-過山楓-寒莓根-槐角-小白撐-草問荊”網(wǎng)絡(luò)中藥物互聯(lián)度最高。鷹不泊味辛溫，可活血止痛，利水消腫。馬絆草味甘性涼，《中華本草》[9]載其可清熱利尿，退黃。過山楓味苦性涼，功可祛風(fēng)除濕，瀉熱利膽。寒莓根味苦、酸，性寒，可清熱解毒，活血止痛，《中藥大辭典》[23]載其可治療胃痛吐酸、黃疸肝炎等?；苯菫闆鲅罚涑裏?、散結(jié)清火之功用適于肝膽郁熱慢性膽囊炎。該組合中藥物相關(guān)研究相對較少，臨床應(yīng)用不廣泛，但其性味歸經(jīng)及功能主治與慢性膽囊炎病因病機(jī)相符合，值得進(jìn)一步研究。

本研究根據(jù)國家專利數(shù)據(jù)庫干預(yù)慢性膽囊炎的中藥復(fù)方專利數(shù)據(jù)分析了潛在配伍規(guī)律。不足之處在于因較多專利未能對藥物劑量完全公示或僅說明劑量區(qū)間，故未能分析量效關(guān)系。且由于數(shù)據(jù)時(shí)間跨度較大，專利申報(bào)要求變更等問題，亦未能對適用證型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，后期研究將結(jié)合藥量及不同證型，以及名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行深入研究，以冀為治療慢性膽囊炎的臨床用藥提供參考，為臨床研發(fā)治療慢性膽囊炎的新藥奠定前期基礎(chǔ)。