肖紅艷 屈金濤,2 凌 浩 張紫陽(yáng) 何幼寬 劉懿慧 張佩華*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410128；2.城步羴牧牧業(yè)有限公司，邵陽(yáng) 422500)

隨著抗生素長(zhǎng)期使用帶來(lái)的細(xì)菌耐藥性和藥物殘留等問(wèn)題，國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)出公告，自2020年1月1日起，退出除中草藥外的所有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑品種[1]。因此，尋找更為安全的綠色飼料添加劑已成為目前的研究熱點(diǎn)。茶多酚是從茶葉及茶葉副產(chǎn)品中提取的多酚類物質(zhì)，是一種天然的抗氧化劑，主要成分包括兒茶素、黃酮類和酚酸類等有機(jī)化合物[2]。茶多酚具有抗菌、抗氧化、改善肉品質(zhì)、提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能及機(jī)體免疫力等功能[3-6]。Wang等[5]研究表明，飼糧中添加200 mg/kg的茶多酚可提高蛋雞產(chǎn)蛋性能，改善料蛋比、蛋品質(zhì)以及內(nèi)臟形態(tài)。Zou等[7]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.06 g/kg BW的茶多酚可以改善黃羽肉雞的肉品質(zhì)，促進(jìn)腸道有益菌的生長(zhǎng)，對(duì)生產(chǎn)性能沒(méi)有影響。Ahmed等[8]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加綠茶提取物能夠提高山羊的日增重，改善其肉品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分，改變羊肉脂肪酸的組成，提高肉的氧化穩(wěn)定性。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于茶多酚在畜禽上的研究主要集中在豬、家禽等方面，而在反芻動(dòng)物特別是奶山羊方面研究鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究茶多酚對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能、血液指標(biāo)和抗氧化能力的影響，探討其在奶山羊上的應(yīng)用效果，為茶多酚在奶山羊養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地址和試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2020年6—7月在湖南省邵陽(yáng)市城步苗族自治縣某牧場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)動(dòng)物為西農(nóng)薩能奶山羊。茶多酚為湖南某公司生產(chǎn)，提取原料為綠茶葉，主要成分及含量為：茶多酚50%，水分5%，咖啡堿6.84%，茶多糖3.5%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇24只體重[(55.04±8.22)kg]、泌乳天數(shù)[(180±4)d]、產(chǎn)奶量[(1.50±0.16)kg]、胎次(2～3胎)相近的健康西農(nóng)薩能奶山羊作為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分成2組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3只羊。對(duì)照組飼喂全混合日糧(TMR)，試驗(yàn)組在TMR中添加5.71 g/kg茶多酚(參考張培軍[9]、洪興華等[10]、陳明等[11]、Ma等[12]的研究結(jié)果確定茶多酚添加量)。試驗(yàn)期52 d，其中預(yù)試期10 d，正試期42 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧與飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2007)奶山羊的營(yíng)養(yǎng)需要配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。奶山羊采用小欄飼養(yǎng)，每天08:00和16:00各飼喂1次TMR，保證每欄有5%的剩料。自由采食、自由飲水。每天07:00和18:00進(jìn)行擠奶。其他飼養(yǎng)管理按照羊場(chǎng)的原有規(guī)定進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.4 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生產(chǎn)性能的測(cè)定

正試期每天記錄每只羊的產(chǎn)奶量；每天準(zhǔn)確記錄飼喂量和剩料量，測(cè)定飼糧中的干物質(zhì)含量，以欄為單位計(jì)算每只羊的干物質(zhì)采食量。

1.4.2 奶樣的采集與測(cè)定

在正試期第21天和第42天每頭羊按早、晚產(chǎn)奶量=6∶4(體積比)的比例采集奶樣100 mL，添加防腐劑，混勻后分裝至50 mL離心管，用于乳成分測(cè)定。乳糖率、乳脂率、乳蛋白率以及乳中非乳脂固體和尿素氮含量使用FOSS乳成分分析儀(Milko canTMFT6000)測(cè)定，乳中體細(xì)胞數(shù)使用利拉伐DCC體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定。

1.4.3 血樣的采集與測(cè)定

在正試期第21天和第42天晨飼前從頸部靜脈采集血液，使用不含抗凝劑的5 mL真空采血管收集血液，633×g離心15 min后，吸取血清分裝于1.5 mL離心管中，-80 ℃保存?zhèn)溆?。使用科華卓越450全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性。使用試劑盒測(cè)定血清抗氧化指標(biāo)，包括總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4.4 血細(xì)胞指標(biāo)的測(cè)定

在正試期第21天和第42天晨飼前使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管從頸部靜脈采集血液5 mL，于采血后2 h內(nèi)采用全自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀(光電MEK-7222K)測(cè)定血細(xì)胞指標(biāo)。包括白細(xì)胞(white blood cell，WBC)、中性粒細(xì)胞(neutrophils，NEUT)、淋巴細(xì)胞(lymphocyte，LYM)、單核細(xì)胞(monocyte，MONO)、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils，EO)、嗜堿性粒細(xì)胞(basophils，BASO)、紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)數(shù)量。

1.4.5 飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的測(cè)定

正試期每周采用四分法收集飼糧樣500 g，稱重后在65 ℃烘箱中烘48 h，計(jì)算初水分含量后粉碎，過(guò)40目篩用于飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的測(cè)定。飼糧中的干物質(zhì)含量根據(jù)GB/T 6435—2006測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量根據(jù)GB/T 6432—2018測(cè)定，粗脂肪含量根據(jù)GB/T 6433—2006測(cè)定，粗灰分含量根據(jù)GB/T 6438—2007測(cè)定，鈣含量根據(jù)GB/T 6436—2018測(cè)定，磷含量根據(jù)GB/T 6437—2018測(cè)定，中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量根據(jù)GB/T 6434—2006測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)先用Excel 2010進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)整理，然后用SPSS 24.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，然后采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P<0.05為差異顯著，0.05≤P<0.10為有差異趨勢(shì)。

2 結(jié) 果

2.1 茶多酚對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，對(duì)照組和茶多酚組之間奶山羊的干物質(zhì)采食量和產(chǎn)奶量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 茶多酚對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能的影響

2.2 茶多酚對(duì)奶山羊乳成分的影響

由表3可知，第21天，茶多酚組的乳中尿素氮含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，乳中體細(xì)胞數(shù)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；第42天，茶多酚組的乳中體細(xì)胞數(shù)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，乳中尿素氮含量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。對(duì)照組和茶多酚組之間乳脂率、乳蛋白率、乳糖率和乳中非乳脂固體含量在第21天和第42天均差異不顯著(P>0.05)。

表3 茶多酚對(duì)奶山羊乳成分的影響

2.3 茶多酚對(duì)奶山羊血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，第21天，茶多酚組的血清MDA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，茶多酚組的血清T-SOD和GSH-Px活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，對(duì)照組和茶多酚組之間血清T-AOC無(wú)顯著差異(P>0.05)。第42天，與對(duì)照組相比，茶多酚組的血清GSH-Px活性有提高的趨勢(shì)(P=0.065)，對(duì)照組和茶多酚組之間血清T-SOD、T-AOC活性和MDA含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 茶多酚對(duì)奶山羊血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 茶多酚對(duì)奶山羊血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，第21天，對(duì)照組和茶多酚組之間血清TP、ALB含量及AST、ALP活性無(wú)顯著差異(P>0.05)。第42天，與對(duì)照組相比，茶多酚組的血清AST活性有提高的趨勢(shì)(P=0.067)，對(duì)照組和茶多酚組之間血清TP、ALB含量及ALP活性無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5 茶多酚對(duì)奶山羊血清生化指標(biāo)的影響

2.5 茶多酚對(duì)奶山羊血細(xì)胞指標(biāo)的影響

由表6可知，對(duì)照組和茶多酚組之間血液白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和紅細(xì)胞數(shù)量在第21天和第42天均無(wú)顯著差異(P>0.05)。第42天，茶多酚組的血液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表6 茶多酚對(duì)奶山羊血細(xì)胞指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 茶多酚對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能的影響

茶多酚作為一種綠色飼料添加劑，在畜禽飼糧中適量添加可改善動(dòng)物的生產(chǎn)性能，提高產(chǎn)品品質(zhì)[13]。Wang等[5]研究報(bào)道，飼糧中添加茶多酚對(duì)蛋雞的平均日采食量無(wú)顯著影響。Gessner等[14]在奶牛上的研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加綠茶提取物不會(huì)影響奶牛的干物質(zhì)采食量。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚對(duì)奶山羊干物質(zhì)采食量無(wú)顯著影響，造成這種結(jié)果的原因可能是由于茶多酚具有苦澀味，并且含有單寧、咖啡堿、鞣酸等物質(zhì)，影響了飼糧的適口性[13,15]，進(jìn)而影響了奶山羊的采食量。產(chǎn)奶量是反映奶山羊生產(chǎn)性能的重要指標(biāo)。Winkler等[16]研究結(jié)果顯示，飼糧中添加綠茶和姜黃素提取物有提高奶牛產(chǎn)奶量的趨勢(shì)，并能顯著提高奶牛的能量校正乳。Ma等[12]研究報(bào)道，飼糧中添加茶多酚可以改善高酮血癥奶牛的產(chǎn)奶量和健康狀況。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚對(duì)奶山羊產(chǎn)奶量無(wú)顯著影響，可能原因是試驗(yàn)動(dòng)物不同，具體原因還有待進(jìn)一步研究。

3.2 茶多酚對(duì)奶山羊乳成分的影響

乳中體細(xì)胞數(shù)可以反映奶山羊乳房的健康狀況和生鮮乳的質(zhì)量。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚顯著降低了乳中體細(xì)胞數(shù)，說(shuō)明茶多酚對(duì)奶山羊乳房健康有積極作用。Ma等[17]研究表明，茶多酚能夠抑制活性氧(ROS)和MDA產(chǎn)生，提高抗氧化酶的活性，保護(hù)牛乳腺上皮細(xì)胞免受氧化損傷。同時(shí)，茶多酚具有較強(qiáng)的抗炎、抗菌和免疫調(diào)節(jié)作用[13]。因此，推測(cè)茶多酚可能是通過(guò)提高機(jī)體的抗氧化能力和免疫力，降低乳中體細(xì)胞數(shù)。乳中尿素氮含量可以反映出動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的利用效率。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚提高了乳中尿素氮含量，推測(cè)茶多酚可能促進(jìn)了瘤胃微生物對(duì)飼糧粗蛋白質(zhì)的降解。

3.3 茶多酚對(duì)奶山羊血清抗氧化指標(biāo)的影響

體內(nèi)ROS的生成與抗氧化酶的產(chǎn)生是一種動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系，當(dāng)平衡被打破時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，造成氧化應(yīng)激，從而引起多種疾病的發(fā)生[13]。T-AOC是評(píng)定機(jī)體抗氧化能力的綜合指標(biāo)，超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和GSH-Px等抗氧化酶在保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷方面起著重要作用，在一定范圍內(nèi)活性越高表明機(jī)體的抗氧化能力越強(qiáng)[18]。MDA是脂質(zhì)氧化的終產(chǎn)物，血清中MDA含量越低，機(jī)體受到的氧化損傷就越小。張培軍[9]研究表明，飼糧中添加茶多酚能顯著提高奶牛血清T-AOC和GSH-Px活性，顯著降低血清MDA含量。Shah等[6]研究報(bào)道，飼喂4%茶樹(shù)的枝葉(BLTT)能顯著提高南江黃山羊血清SOD和GSH-Px活性，降低血清MDA含量。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚可顯著提高血清中GSH-Px和T-SOD活性，降低血清MDA含量，與前人的研究結(jié)果基本一致。其原因可能是飼糧中添加茶多酚后，提高了血清中抗氧化酶的活性，降低機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，進(jìn)而提高了奶山羊的抗氧化功能[2]。

3.4 茶多酚對(duì)奶山羊血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)的變化能夠評(píng)估機(jī)體的健康水平及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝情況。血清AST活性是反映機(jī)體肝臟功能的重要指標(biāo)[19]。AST能夠調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)代謝水平提高或肝臟功能受損時(shí)，血清AST活性升高[19]。本試驗(yàn)中，茶多酚組奶山羊血清AST活性有提高的趨勢(shì)，但處于正常范圍內(nèi)[20]，推測(cè)茶多酚組血清AST活性的升高并不是肝功能受到損傷，而是促進(jìn)了機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝。李樺等[21]研究表明，茶多酚具有調(diào)節(jié)機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的作用。血清ALP也是檢測(cè)肝臟功能的一個(gè)重要指標(biāo)，當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)，肝細(xì)胞膜通透性加大，從而導(dǎo)致血清ALP活性升高[22]。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚對(duì)奶山羊血清AST和ALP活性無(wú)顯著影響，說(shuō)明飼糧中添加茶多酚不會(huì)對(duì)奶山羊的肝功能產(chǎn)生負(fù)面影響。

3.5 茶多酚對(duì)奶山羊血細(xì)胞指標(biāo)的影響

血細(xì)胞作為血液中最基本的檢查指標(biāo)，可通過(guò)血液中細(xì)胞的增多或減少來(lái)反映機(jī)體的健康狀況和預(yù)測(cè)疾病的發(fā)生[23]。血細(xì)胞中的白細(xì)胞是體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，主要包括單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性和嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，在抵抗異物入侵機(jī)體、產(chǎn)生抗體、介導(dǎo)免疫應(yīng)答方面發(fā)揮重要作用[24]。嗜酸性粒細(xì)胞在白細(xì)胞中的比例較小，通常存在于呼吸道和消化道內(nèi)，在介導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲(chóng)感染和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用[25]。研究表明，當(dāng)機(jī)體感染寄生蟲(chóng)時(shí)，體內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增多[26]。Zhong等[27]研究表明，茶多酚能夠抑制捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)的感染，提高宿主的抵抗力。本試驗(yàn)中，飼糧中添加茶多酚降低了血液中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量，對(duì)其他血細(xì)胞指標(biāo)無(wú)顯著影響，說(shuō)明茶多酚對(duì)動(dòng)物的健康無(wú)負(fù)面影響。目前，茶多酚對(duì)血細(xì)胞指標(biāo)影響的研究較少，具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加茶多酚能提高奶山羊的抗氧化功能，降低乳中體細(xì)胞數(shù)。