張配配 校 黃選洋 譯

摘? 要：全基因組序列數(shù)據(jù)的使用在家畜育種計劃中具有巨大的潛力，可以提高發(fā)現(xiàn)變異基因的能力，同時能更準確和更持久地預測育種值而不是標記陣列。要了解家畜基因組序列數(shù)據(jù)的全部潛力，需要從大量的個體，甚至要從數(shù)百萬個個體上獲得基因組序列和表型數(shù)據(jù)，從而準確地估測構成數(shù)量性狀基礎的大量致病變異的影響。

關鍵詞：全基因組;標記陣列;估測;變異;雜交剝離

中圖分類號：S813.3 文獻標志碼：C 文章編號：1001-0769（2021）04-0012-03

低成本的測序策略結合估測法（imputation），能夠以負擔得起的成本為大量個體生成所需基因組序列的信息。低覆蓋率使研究人員對大量個體進行基因組測序成為可能，這可以提高變異的發(fā)現(xiàn)率，特別是低頻率的變異，并能加強根據(jù)基因組序列數(shù)據(jù)對整個群體的估測。

本文介紹了我們在一項研究中所采用的策略，該研究對來自9個商業(yè)品系的7 848頭豬進行了全基因組測序，這些品系大部分處于低覆蓋率范圍。隨后，我們證明，將該測序策略與“雜交剝離”估測法相結合，是一種可為大群家畜純種系譜產(chǎn)生全基因組序列數(shù)據(jù)的有效策略。最后，我們測試了這些大數(shù)據(jù)集對合成表型的基因組預測的優(yōu)勢。

1? 材料和方法

1.1 測序策略

我們對Genus plc公司的9個商業(yè)品系（PIC豬商業(yè)品系，公司位于美國田納西州亨德森縣）的7 848頭豬的全基因組進行了測序。測序時，我們從每個品系中選擇約2%（1.7%～2.5%）的豬。結果表明，大多數(shù)豬處于低覆蓋率，目標覆蓋率為1倍或2倍，一小部分豬處于較高的覆蓋率，分別為5倍、 15倍或30倍。個體的平均覆蓋率為4.1倍，但中位數(shù)為1.5倍。我們使用三步策略選擇個體和這些個體的覆蓋范圍：

第一步：在純種系譜中貢獻最多基因型后代的父系和母系分別擁有2倍和1倍的覆蓋率。

第二步：AlphaSeqOpt法第1部分用于識別在種群單倍型中占有最大比例的單倍型個體，并在控制總成本的前提下，為它們及其祖先分配一個介于0倍至30倍的最優(yōu)水平的測序覆蓋。

第三步：AlphaSeqOpt法第2部分用于識別累計覆蓋率低（低于10倍）的單倍型個體，并對這些個體進行1倍測序，以增加單倍型的累計覆蓋率（即大于或等于10倍）。

AlphaSeqOpt法使用根據(jù)階段性標記陣列基因型推斷的單倍型。

1.2 發(fā)現(xiàn)變異

將測序結果與Sscrofa 11.1參考基因組進行比對，利用一個基于GATK 3.8的Haplotype-Caller工具的數(shù)據(jù)來源找出變異。為了避免在應用低覆蓋率序列數(shù)據(jù)時對GATK引入的參考等位基因產(chǎn)生誤差，我們利用堆積函數(shù)提取了支持該等位基因的讀取數(shù)，結果從這9個品系中共發(fā)現(xiàn)了6 000萬個單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）。

1.3 估測全基因組序列數(shù)據(jù)

使用商業(yè)標記陣列對每個群體中的大多數(shù)個體進行基因分型，擁有15 000個低密度（Low Density，LD）或75 000個高密度（High Density，HD）全基因組標記。正如用AlphaPeel法測算的那樣，采用雜交剝離估測法分別估測每個群體的全基因組序列。該方法通過兩階段，降低估測成本：

· 多軌跡迭代剝離，可以根據(jù)數(shù)組中的該標記估計分離概率。

· 改進的單位點迭代剝離，可以基于序列數(shù)據(jù)旁側數(shù)組的該標記的估測值，利用該序列數(shù)據(jù)大致估計任何其他變異位點上的分離概率。由于每條染色體中重組基因的數(shù)量有限，以及附近標記共同被遺傳的概率很高，這種大致估測的精度損失可以忽略不計。9個品系估測出的豬總數(shù)約為35萬頭。

為了評估估測的準確性，我們使用了來自4個大小不同的群體在高覆蓋率（15倍或30倍）下測序的284個個體。被檢測個體的序列數(shù)據(jù)用留一法設計（leave-one-out design）可以完全掩蓋。將估測的等位基因劑量與獲得完整數(shù)據(jù)的等位基因劑量進行比較，認為是“真”值。

1.4 基因組的預測

我們在一個擁有3萬個個體的品系中檢測了基因組預測的準確性，這些個體的估測基因型為1 600萬個SNPs。正如在AlphaBayes軟件中預測的那樣，使用嶺回歸（ ridge regression）模型預測基因組。

利用該模式測試了22 318個個體，驗證了1 458個個體。對9個具有不同遺傳力和數(shù)量性狀核苷酸（Quantitative Trait Nucleotides，QTN）的合成性狀進行基因組預測。

使用4組標記進行基因組預測：從陣列中預選5.7萬個標記（HD），從基于LD修剪的序列數(shù)據(jù)中預選24.8萬個變體[全基因組測序（Whole Genome Sequencing，WGS）_LD，WGS_LD]，從基于單標記回歸結果[（WGS_基于總數(shù)據(jù)的孟德爾隨機化（Summary data-based Mendelian Randomization，SMR），WGS_SMR]的序列數(shù)據(jù)中預選18.3萬個變體，或通過僅每保留第200個變體（WGS_200）從該序列數(shù)據(jù)中預選6.7萬個變體?；蚪M估計育種值（Genomic Estimated Breeding Value，gEBV）的準確性是根據(jù)該驗證數(shù)據(jù)集中gEBV與合成表型之間的相關性來估計的。

2? 結果和討論

2.1 估測的準確性

對大多數(shù)受試個體而言，真實數(shù)據(jù)的估測精度較高（圖1）。平均個體劑量相關性為0.94，中位數(shù)為0.97，四分位數(shù)范圍為0.94～0.98。一些屬于該純種系譜最早幾個世代的最古老的個體（位于系譜的前20%）具有很低的估測精度，因為它們無法提供其直系祖先的信息，或能夠提供的信息極少，這影響了估測精度。

較晚幾個世代的個體（位于系譜中前20%的后面）有更高的估測精度，平均劑量相關性為0.97，變異性更低：中位數(shù)為0.98，四分位數(shù)間距為0.96～0.99。

個體的標記陣列密度與用標記陣列基因分型獲得的直系祖先的數(shù)量相矛盾，但對稍后幾個世代的個體而言，標記陣列密度的HD和LD之間無顯著差異，種群大小對估測精度的影響無明顯的傾向性。

2.2 基因預測

在某些情況下，與標記陣列相比，序列數(shù)據(jù)能夠提供更好的預測精度，但其優(yōu)勢取決于該性狀的遺傳結構。

表1列出了9個合成性狀的基因組預測精度。當QTN的數(shù)量較小時，可以識別能支撐該性狀的遺傳變異的變體（variants）具有足夠的統(tǒng)計功效（statistical power），使用這些變體（WGS_SMR）進行預測的準確性高于用來自商業(yè)標記陣列（HD）的標記進行預測的。這與之前的觀察結果一致，添加一個或幾個具有較大作用的標記作為預測因子可以提高該標記序列的預測精度。

當QTN的數(shù)量較大時，WGS_SMR的性能比HD的差。在這種情況下，從序列數(shù)據(jù)中選擇的其他變異集可能（略微）比商業(yè)標記序列更有利，因為它們不會像商業(yè)標記序列那樣受到確定偏倚（ascertainment bias）的影響。

這些結果部分是由于目前使用商業(yè)標記陣列進行基因組選擇已經(jīng)獲得了很高的預測準確性，且與其他研究結果一致。后者發(fā)現(xiàn)，與HD標記陣列相比，序列數(shù)據(jù)在基因組預測上沒有改善或只有微小的變化。有待確定的是，結果是否會因以下原因而得到改善：來自多個品種的數(shù)據(jù)，使用多品種測試和更大的測試集，或比嶺回歸更適合于大規(guī)模開發(fā)序列數(shù)據(jù)的基因組預測方法。

3? 結論

無論種群的規(guī)模多大，只要個體與具有標記陣列或序列數(shù)據(jù)的親緣聯(lián)系在一起，同時該親緣有足夠多的信息，恰當?shù)臏y序策略和“雜交剝離”的結合是在大群的純種系譜中生成全基因組序列數(shù)據(jù)的一種有效方法。

目前尚不清楚，這些帶有估測序列數(shù)據(jù)的大數(shù)據(jù)集是否能夠提高基因組預測的準確性。

原題名：Sequence data for genomic prediction in livestock breeding（英文）

原作者：Roger Ros-Freixedes等（愛丁堡大學）