王裕霞 廖煥琴 陳新宇 潘 文 張衛(wèi)華 徐 放 曹廣華

(廣東省森林培育與保護利用重點實驗室/廣東省林業(yè)科學研究院 廣州 510520)

竹蓀(Dictyophora indusiata) 又名竹笙、竹參、仙人傘、網(wǎng)紗菇等，為竹蓀屬(Dictyophora)[1]名貴大型食用菌，味道鮮美、脆嫩爽口，富含粗蛋白、多糖、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，尤其是含有21 種氨基酸，其中包括8 種人體必需氨基酸，而且還能散發(fā)多種揮發(fā)性成分，使其具有獨特的氣味，是人們喜歡的美味佳肴。竹蓀不僅具有食用價值，還具備相當高的藥用價值，其具有抗腫瘤[2]、抗氧化[3]、調(diào)節(jié)免疫以及降血脂[4]等功效，在國際市場上享有很高的聲譽，擁有廣闊的發(fā)展前景。

雖然國內(nèi)外關(guān)于竹蓀化學成分、生物活性、藥理和保健作用的研究不少，為竹蓀開發(fā)成醫(yī)藥產(chǎn)品、保健產(chǎn)品和天然防腐劑等提供了科學依據(jù)，也不乏有關(guān)竹蓀在食品、藥品、保健品、化妝品等方面的應(yīng)用發(fā)明專利，但目前并未開發(fā)出商品，主要還是作為真菌食用。

傳統(tǒng)方式林下種植竹蓀存在病蟲害較嚴重、采收不方便、不易管理以及生產(chǎn)效率不高等問題。包金亮等[5]對傳統(tǒng)竹蓀栽培步驟進行了優(yōu)化，將原有的13 道工序縮短為9 道(備料—攪拌—裝袋—滅菌—播種—培養(yǎng)—覆土—出菇—采收)，縮短了栽培周期，提高了經(jīng)濟效益。蘭云龍等[6]研究認為，生料畦栽法和菌絲壓塊法不適用于紅托竹蓀的栽培，而菌棒栽培法抗逆性強、產(chǎn)量高，栽培紅托竹蓀獲得成功。應(yīng)國華等[7]在低海拔竹林下采用菌棒栽培紅托竹蓀，認為只要栽培季節(jié)、菌棒配方及栽培管理技術(shù)把握得當，可以取得高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)(干紅托竹蓀產(chǎn)量約0.16 kg/m2)，栽培技術(shù)具有很好的推廣價值。本項目組的研究已表明[8]，在改良的配方基質(zhì)中當添加0.5～4.0 mg/kg 的外源硒時，可促進菌棒菌絲體生長，而且在培養(yǎng)基質(zhì)中添加適量的外源硒肥對提高棘托竹蓀菌絲體先端谷胱甘肽過氧化物酶活性有顯著作用，可以提高菌種的生長活性與抗逆能力。

本研究通過在竹林下開展竹蓀富硒菌棒覆土栽培試驗，研究不同基質(zhì)配方與硒濃度處理及菌棒不同覆土方式對竹蓀產(chǎn)量和品質(zhì)影響，以期找出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的竹蓀菌棒栽培技術(shù)。

1 試驗地概況

試驗地設(shè)在廣東省林業(yè)科學研究院科研基地的小葉龍竹林下，基地位于北緯23°11′54″、東經(jīng)113°22′19″，地處亞熱帶沿海，屬海洋性亞熱帶季風氣候，具有溫暖多雨、光熱充足、夏季長、霜期短的特征。全年平均氣溫22.8 ℃，年均降雨量2 033.5 mm，年均降雨天數(shù)152 d，年均日照長度1 752.9 h，年均相對濕度77%。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

供試菌株為棘托竹蓀D-古優(yōu)1 號，引自福建古田；硒肥為鄭州普天農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)的“硒時代”高效硒肥。

常規(guī)基質(zhì)配方(A):木糠80%，麥麩18%，石灰粉1%，石膏粉1%；改良基質(zhì)配方(B):木糠60%，棉籽殼19%，米糠19%，石灰粉1%，石膏粉1%。栽培覆土:黃心土與木糠的混合土。

2.2 試驗設(shè)計

2.2.1 富硒菌棒配方對比栽培試驗

試驗設(shè)6 個處理，分別為:常規(guī)基質(zhì)配方不添加硒肥 (A0)，改良基質(zhì)配方不添加硒肥(B0) 以及改良基質(zhì)配方添加硒肥至含硒質(zhì)量分數(shù)分別為0.5 mg/kg (B0.5)、1.0 mg/kg (B1)、1.5 mg/kg (B1.5)、2.0 mg/kg (B2)。

按上述配方把各種材料混合拌勻后，加水調(diào)整基料的含水量至70%，同時按試驗處理的需要加入硒肥至所要求的濃度。將拌好的基質(zhì)堆漚20～24 h 后，用22 cm × 38 cm 的聚丙烯塑料袋裝袋，每袋裝約2.0 kg 的基質(zhì)?；|(zhì)pH 值約為6.5。每個處理菌袋數(shù)為100 袋，共600 袋。100℃下常壓滅菌16 h。待菌袋溫度降至室溫后無菌接種。接種后菌棒培養(yǎng)50 d，大部分菌絲已長至滿袋，此時在各處理中選取生長較為均勻的菌棒各60 棒進行林下栽培對比試驗。

在郁閉度約為0.7 的小葉龍竹林內(nèi)選取平緩的場地建畦，土壤為沙質(zhì)壤土，pH 值約為6.0。按完全隨機區(qū)組試驗設(shè)計，設(shè)6 個處理3 個重復(fù)共設(shè)18 塊畦床，每畦為1 個試驗處理，畦床長3.0 m、寬1.1 m，種植20 個菌棒共40 kg 的菌種。將20 個菌棒脫袋后按每列10 棒分2 列平鋪于畦床表面，列間距約30 cm，覆蓋上厚3～5 cm的黃心土與木糠的混合土(每個處理木糠用量為干質(zhì)量18 kg)，形成雙列龜背形畦床。最后在畦床上搭建高約0.8 m 的小拱棚覆膜以保證溫濕度，并在小拱棚內(nèi)均勻布裝微噴設(shè)施。

試驗期間保持畦床覆土濕潤，小拱棚內(nèi)空氣濕度控制在菌絲體生長期為70%～90%、在子實體成熟期為90%以上。2020 年5 月下旬種植，7月上旬竹蓀子實體開始開裙產(chǎn)出。

2.2.2 菌棒覆土方式栽培試驗

按2.2.1 中方法制作基質(zhì)，配方B1 菌棒500個，待菌絲長至滿袋后選取其中生長較為均勻的菌棒360 個進行林下菌棒覆土方式栽培對比試驗。試驗場地條件同2.2.1。設(shè)3 個不同覆土方式處理，3 個重復(fù)。處理1 為雙列龜背形，處理2 為三列淺溝形，處理3 為三列平面形。畦床長4.5 m、寬1.1 m，每塊畦床為1 個處理，雙列、三列分別種植30 個和45 個菌棒，每列15 棒。將菌棒按雙列(處理1) 或三列(處理2、3) 排列于畦床表面，雙列者列間距約30 cm，三列者列間距約18 cm。以黃心土與木糠混合土(每個處理木糠用量為干質(zhì)量27 kg) 覆蓋菌棒表面，覆土厚3～5 cm。最終分別形成雙列龜背形、三列淺溝形及三列平面形3 個不同覆土方式處理的畦床。

種植后管理方式同2.2.1。2020 年6 月下旬種植，8 月上旬竹蓀子實體開始開裙產(chǎn)出。

2.3 生長數(shù)據(jù)調(diào)查與統(tǒng)計

2.3.1 不同基質(zhì)配方菌棒栽培對比試驗

菌棒種植后，觀察菌絲生長狀況、菌蕾原基形成時間、竹蓀開裙時間，并于7 月初至8 月底于清晨摘取當天即將開裙的成熟竹蓀蛋并記錄數(shù)量。同時在產(chǎn)出盛期從各處理中選取中等大小的成熟竹蓀蛋各60 個分別進行稱重，以獲得各處理竹蓀蛋的平均質(zhì)量。于產(chǎn)出盛期內(nèi)取樣檢測硒元素含量，計算基質(zhì)生物轉(zhuǎn)化率(即:子實體鮮質(zhì)量/基質(zhì)干質(zhì)量) 及外源硒肥硒元素轉(zhuǎn)化率(子實體硒含量/基質(zhì)外源硒含量)。于9 月中旬后對A0、B0、B1 各處理分別取個體大小均勻、生長狀態(tài)良好的新鮮竹蓀蛋與開裙竹蓀(含菌柄及菌裙) 各3 個檢測硒元素、粗蛋白及粗多糖含量。統(tǒng)計各處理竹蓀產(chǎn)量與硒含量數(shù)據(jù)。

2.3.2 菌棒覆土方式栽培試驗

于8 月初及8 月底調(diào)查所有處理長出的竹蓀子實體數(shù)量，計算各處理竹蓀產(chǎn)量和基質(zhì)生物轉(zhuǎn)化率。

2.4 測定方法

蛋白質(zhì)含量測定:參照《食品中蛋白質(zhì)的測定》 (GB 5009.5—2016)[9]。粗多糖含量測定:參照《食用菌中總糖含量的測定》(GB/T 15672—2009)[10]。硒元素含量測定:參照《食品中多元素的測定》 (GB 5009.268—2016)[11]。水分含量測定:參照《食品安全國家標準 食品中水分的測定》 (GB 5009.3—2016)[12]。

2.5 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用Microsoft excel 2016 軟件對原始數(shù)據(jù)進行整理與繪圖。利用R 語言[13]“agricolae”程序包進行單因素方差分析，并采用Duncan 法進行檢驗差異顯著性分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 菌棒基質(zhì)配方及含硒量對竹蓀子實體數(shù)量的影響

不同配方及硒含量基質(zhì)處理所產(chǎn)出的竹蓀子實體數(shù)量情況如圖1?？梢?，常規(guī)基質(zhì)配方(A0) 產(chǎn)出的數(shù)量最少，改良基質(zhì)配方產(chǎn)出數(shù)量明顯增加，改良基質(zhì)配方添加硒肥后所有處理的產(chǎn)出數(shù)均顯著增加，而且隨著基質(zhì)中硒濃度的增加，竹蓀產(chǎn)出數(shù)量逐漸增加，在添加硒質(zhì)量分數(shù)1.5 mg/kg (B1.5) 時達到最大值，然后又有所降低。說明不同基質(zhì)配方及硒濃度竹蓀菌棒在林下進行埋棒覆土栽培，產(chǎn)出子實體數(shù)量有所不同。

圖1 不同基質(zhì)及硒濃度處理的菌棒產(chǎn)出竹蓀子實體數(shù)量Fig.1 The fruit body number of D. indusiate generated from the sticks treated with different matrix and selenium contents

方差分析結(jié)果顯示，各處理間的差異達極顯著水平(P<0.01)；多重比較結(jié)果表明，處理B1.5 位于最大值，處理B1 與B1.5 及B2 間無顯著差異，處理B0.5 與各處理間均有顯著差異，處理B0 及A0 與各處理間亦有顯著差異，B0 處理所產(chǎn)出子實體數(shù)量比A0 處理增加了51.9%。說明采用合適的基質(zhì)配方及硒濃度可以明顯增加竹蓀菌棒林下栽培產(chǎn)出子實體的數(shù)量。

3.2 不同基質(zhì)配方及硒濃度的竹蓀產(chǎn)量

在竹蓀產(chǎn)出盛期取樣稱重，獲得各處理竹蓀子實體個體平均質(zhì)量，計算得到各處理竹蓀總產(chǎn)量及子實體生物轉(zhuǎn)換率(表1)。可知，各處理竹蓀子實體產(chǎn)量分別為6.81、10.24、21.8、27.64、29.54、26.14 kg，其中處理A0 最低，處理B0 比A0 增加了50.4%，說明改良基質(zhì)配方與常規(guī)配方相比具有明顯增產(chǎn)效果；在改良基質(zhì)配方中添加硒濃度為0.5～2.0 mg/kg 時均可明顯增加竹蓀子實體產(chǎn)量，其中處理B1.5 產(chǎn)量最高，比B0 增加了195.30%。結(jié)果表明在菌棒基質(zhì)中添加合適濃度的硒肥可較大程度地提高竹蓀子實體產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率。

表1 不同基質(zhì)配方及硒濃度處理的竹蓀子實體產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率Tab.1 The fruiting body yield and biotransformation rate of D. indusiate treated with different matrix and selenium contents

3.3 菌棒基質(zhì)配方及硒濃度對竹蓀花中硒含量的影響

表2 表明，在6 個處理中，第1 潮竹蓀花硒含量以B2 最高、為9.79 mg/kg，B1.5 次之、為9.05 mg/kg，均顯著高于除B1 之外的其他處理，B1 為8.05 mg/kg、顯著高于A0 的1.54 mg/kg 和B0 的2.58 mg/kg。A0 與B0 處理為最低且二者間無顯著差別。比較B0.5、B1、B1.5、B2 處理中第2 潮竹蓀花含硒量可見，處理B2 和B1.5 最高，均顯著高于處理B0.5，且與處理B1 差異不明顯?？疾旄魈幚淼奈D(zhuǎn)化率指標發(fā)現(xiàn):第1 潮竹蓀花硒轉(zhuǎn)化率處理B1 最高、為10.93%，處理B0.5為10.17%，顯著高于處理B2 的5.99%，處理B1.5、B0.5、B1 三者間無顯著差別；第2 潮竹蓀花硒轉(zhuǎn)化率處理B1.5 最高、為5.19%，處理B0.5 最低、為2.79%，處理B1.5、B1、B2 間三者間無顯著差別；綜合第1、2 潮竹蓀花硒轉(zhuǎn)化率可見，處理B1 最高、為15.36%，處理B1.5、B1分別為13.65%、12.97%，處理B2 最低、為9.70%，表明在改良基質(zhì)配方添加硒質(zhì)量分數(shù)為0.5、1.0、1.5、2.0 mg/kg 4 個濃度處理中，添加1.0 mg/kg 處理的菌棒產(chǎn)出竹蓀花硒轉(zhuǎn)換率最高。

表2 菌棒不同基質(zhì)配方及硒濃度處理竹蓀花硒含量與硒轉(zhuǎn)化率Tab.2 The selenium content and transformation rate in flowers of D. indusiate treated with different matrix and selenium contents

3.4 不同基質(zhì)處理竹蓀蛋與竹蓀花硒含量及主要營養(yǎng)成分

對A0、B0、B1 處理的竹蓀蛋與竹蓀花分別進行硒元素、粗蛋白、粗多糖含量測定，結(jié)果如圖2?？梢姡贐0、B1 處理中竹蓀花硒含量比竹蓀蛋分別高5%及26%。B1 處理竹蓀蛋及竹蓀花硒含量明顯高于其他2 個處理。B1 處理竹蓀蛋及竹蓀花粗蛋白含量均高于其他2 個處理，A0 處理竹蓀蛋與竹蓀花粗蛋白的含量最低；3 個處理的竹蓀蛋粗蛋白含量高于竹蓀花，其中B1 處理竹蓀蛋粗蛋白量高達36.2 g/100 g，是竹蓀花的1.51 倍。B1 處理竹蓀蛋與竹蓀花粗蛋白含量分別是A0 處理竹蓀蛋的1.71 和1.41 倍。B0 處理竹蓀蛋與竹蓀花的粗蛋白含量是A0 處理的1.21和1.29 倍。說明改良基質(zhì)配方有利于竹蓀蛋及竹蓀花中粗蛋白的形成，并且在基質(zhì)中加入硒質(zhì)量分數(shù)1.0 mg/kg 的硒肥，可以明顯增加竹蓀子實體中粗蛋白的含量。

圖2 不同基質(zhì)處理菌棒竹蓀蛋與竹蓀花硒元素及主要營養(yǎng)成分含量Fig.2 The content of selenium and main nutrients in eggs and flowers of D. indusiate treated with different matrix

A0、B0、B1 處理竹蓀蛋的粗多糖含量均高于竹蓀花，其中B0 處理竹蓀蛋粗多糖最高為39.0 g/100 g，是其竹蓀花的1.61 倍，且分別是A0 及B1 處理竹蓀蛋的4.81 和1.35 倍；B0 及B1處理竹蓀花中粗多糖含量大體相同，均約為A0處理的3.5 倍，說明B0 處理的基質(zhì)配方對提高竹蓀蛋中粗多糖的含量有極顯著的效果。

3.5 不同覆土方式對菌棒竹蓀蛋產(chǎn)量的影響

由表3 可見，3 種覆土方式的每個菌袋第1潮長出的竹蓀蛋平均個數(shù)以雙列龜背形及三列淺溝形處理較多，顯著高于三列平面形覆土方式。而雙列龜背形與三列淺形處理間差異不明顯。整個產(chǎn)出期內(nèi)每個菌棒平均竹蓀蛋產(chǎn)量以雙列龜背形最高，為1.40 kg，三列平面形處理最低，前者是后者的1.56 倍，單位面積平均產(chǎn)量以三列淺溝形處理最高、為10.27 kg/m2，其分別是三列平面形及雙列龜背形處理的1.26 倍和1.22 倍。雙列龜背形與三列平面形2 個處理間產(chǎn)量差異不明顯。說明在竹林下采用三列淺溝形菌棒覆土栽培模式，可以提高單位面積林地竹蓀子實體產(chǎn)量。

表3 菌棒不同覆土方式處理竹蓀蛋產(chǎn)量與生物轉(zhuǎn)化率Tab.3 The egg yield and biotransformation rate of D. indusiate treated with different casing method

3 個處理中以雙列龜背及三列淺溝形處理的生物轉(zhuǎn)化率較高，分別為93.0%及94.14%，是三列平面形處理的1.24 及1.26 倍。說明雙列龜背形及三列淺溝形覆土方式比三列平面形覆土方式更有利于林下竹蓀菌棒栽培達到豐產(chǎn)的目的。

4 結(jié)論與討論

1) 不同基質(zhì)配方對竹蓀菌棒竹林下覆土栽培的產(chǎn)量有顯著影響，本試驗采用改良基質(zhì)配方制作的菌棒產(chǎn)出竹蓀子實體個數(shù)及個體質(zhì)量分別比常規(guī)配方提高了51.9%和50.4%。

2) 基質(zhì)添加不同硒肥濃度對竹林下竹蓀菌棒覆土栽培產(chǎn)量有明顯影響。在質(zhì)量分數(shù)低于2.0 mg/kg 時，竹蓀子實體產(chǎn)量隨著硒濃度的增加而逐漸增加，在濃度為1.5 mg/kg 時達到最大值后，在2.0 mg/kg 時有所降低。基質(zhì)中添加硒質(zhì)量分數(shù)1.5 mg/kg 硒肥比不添加硒肥產(chǎn)量提高了195.3%。已有相關(guān)研究指出，基質(zhì)中適宜濃度的硒對食用菌的生長有促進作用，可以顯著提高期子實體產(chǎn)量[14－15]。本研究結(jié)果表明，基質(zhì)中外源硒添加量在2.0 mg/kg 以內(nèi)是叢生竹林下竹蓀富硒菌棒覆土栽培比較合適的濃度。

3) 基質(zhì)中添加硒質(zhì)量分數(shù)為1.0～2.0 mg/kg的硒肥可以較顯著地提高竹蓀花的硒含量，其中干物質(zhì)中硒含量平均值從約2.5 mg/kg 提高到8.05～13.3 mg/kg，外源硒利用率達到9.7%～15.36%。在其他種類富硒食用菌栽培中，子實體中硒含量與硒加入量呈正相關(guān)[16－19]，本試驗結(jié)果亦表現(xiàn)出這一規(guī)律性。

4) 不同基質(zhì)配方對竹蓀蛋與竹蓀花中粗蛋白及粗多糖含量有明顯影響。改良配方竹蓀蛋與竹蓀花的粗蛋白含量是常規(guī)配方的1.21 和1.29 倍，其粗多糖含量是常規(guī)配方的4.81 及3.51 倍。

5) 改良配方基質(zhì)中添加硒質(zhì)量分數(shù)為1.0 mg/kg 的硒肥，與不添加硒肥相比較，竹蓀蛋與竹蓀花中蛋白質(zhì)的含量分別增加40.9%和14.3%。改良配方基質(zhì)中添加硒質(zhì)量分數(shù)為1.0 mg/kg 硒肥后，產(chǎn)出竹蓀蛋中粗多糖含量下降了26.2%，竹蓀花中的粗多糖含量幾乎不變。梁英等[20－21]報道富硒木耳及香菇子實體中粗蛋白含量明顯提高，胡國元等[22]報道金針菇富硒培養(yǎng)可提高菌絲多糖含量。趙鐳等[23]報道硒可以明顯提高靈芝中多糖、蛋白質(zhì)的含量。本試驗顯示，竹蓀蛋硒含量為7.7 mg/kg 時其粗多糖含量有所下降，具體原因有待進一步研究探討。

6) 三列淺溝形和雙列龜背形2 種覆土方式有利于竹蓀菌棒林下栽培產(chǎn)量的增加。雙列龜背形覆土方式提高了單個菌棒的竹蓀產(chǎn)量，三列淺溝形覆土方式則可增加單位種植面積的產(chǎn)量，雙列龜背形和三列淺溝形兩者間基質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化率大體一致，均超過了90%。