張軼華，于 洲，王 柳，高燕霞

（1. 河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050200； 2. 石家莊四藥有限公司，河北 石家莊 052165）

甲苯磺酸索拉菲尼屬新型多靶點(diǎn)抗腫瘤藥物，可同時(shí)作用于腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管，具有雙重抗腫瘤作用，既可阻斷由RAF／MEK／ERK（信號(hào)級(jí)聯(lián)通路，一條有絲分裂原活化蛋白激酶通路）介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路而直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖，又可通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）受體而阻斷腫瘤新生血管形成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。其原料在合成過(guò)程中共用到乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃和N，N－二甲基甲酰胺（DMF）6 種有機(jī)溶劑，包括人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[1]規(guī)定的二類溶劑和三類溶劑。氣相色譜法已廣泛用于藥物殘留溶劑的測(cè)定[2－13]，但對(duì)于沸點(diǎn)較高殘留溶劑的測(cè)定仍有困難。離子液體是一類新型綠色溶劑，具有溶解性強(qiáng)、無(wú)蒸氣壓、幾乎不揮發(fā)、熱穩(wěn)定性好等特性[14]，可較好地解決這一問(wèn)題。本研究中建立了氣相色譜法，以離子液體作為溶劑，采用頂空進(jìn)樣方式同時(shí)測(cè)定前述6 種有機(jī)溶劑殘留。該方法操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)限低、重復(fù)性好，擴(kuò)展了頂空氣相色譜法在藥物有機(jī)溶劑殘留測(cè)定中的應(yīng)用范圍?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

6890 型全自動(dòng)氣相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；UHPN2－600C 型氮?dú)獍l(fā)生器、H2PEM－100 型氫氣發(fā)生器（美國(guó)Parker 公司）。

1.2 試藥

乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF（色標(biāo)，天津精細(xì)化工研究院）；1－丁基－3－甲基咪唑四氟硼酸鹽（上海紫一試劑廠，批號(hào)為K180201）；甲苯磺酸索拉非尼原料（石藥控股集團(tuán)有限公司，批號(hào)分別為150301，150302，150303）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP－5 毛細(xì)管色譜柱（30 m ×0.32 mm，1 μm）；固定液：5%苯基－甲基聚硅氧烷；溶劑：1－丁基－3－甲基咪唑四氟硼酸鹽離子液體；檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器（FID）；載氣：氮?dú)?；程序升溫：起始溫度?0 ℃，以20 ℃／min 的速率升至220 ℃，維持3 min；氣化室溫度：200 ℃；檢測(cè)器溫度：220 ℃；頂空瓶溫度：80 ℃；平衡時(shí)間：30 min；流速：2.0 mL／min；分流比：10 ∶1；進(jìn)樣量：1.0 mL；進(jìn)樣方式：頂空進(jìn)樣。

2.2 溶液制備

取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃和DMF 各適量，精密稱定，用離子液體稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.5，0.5，0.06，0.5，0.072，0.088 mg／mL 的溶液，即得混合對(duì)照品溶液。取樣品適量，精密稱定，加離子液體溶解并稀釋，制成質(zhì)量濃度約為100 mg／mL 的溶液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 mL，置20 mL 頂空瓶，密塞。按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，詳見(jiàn)圖1。結(jié)果各色譜峰分離完全，分離度均大于1.8。

線性關(guān)系考察：取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃和DMF 各適量，精密稱定，用離子液體依次定量稀釋成上述成分質(zhì)量濃度約為1，1，0.12，1，0.14，0.18 mg／mL 的混合溶液；用離子液體逐級(jí)稀釋，制成質(zhì)量濃度為0.01，0.05，0.1，0.2，0.5，1 mg／mL（按乙醇計(jì)）的系列混合對(duì)照品溶液。按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、待測(cè)成分質(zhì)量濃度（C，mg／mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程與線性范圍。詳見(jiàn)表1。

圖1氣相色譜圖Fig.1 GC chromatograms

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n ＝6）Tab.1 Results of linear relation test（n ＝6）

檢測(cè)限與定量限考察：分別精密量取線性關(guān)系考察項(xiàng)下0.5 mg／mL（按乙醇計(jì)）的混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，并按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比(S／ N)為3 ∶1 和10 ∶1 時(shí)分別計(jì)算檢測(cè)限和定量限。結(jié)果，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的檢測(cè)限分別為0.67，0.57，1.21，0.52，0.47，12.20 μg／mL，定量限分別為2.0，1.9，3.8，1.6，1.4，38.2 μg／mL。

精密度試驗(yàn)：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下0.5 mg／mL（按乙醇計(jì)）的混合對(duì)照品溶液適量，按2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6 次，記錄峰面積。結(jié)果，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 峰面積的RSD 分別為0.53%，0.50%，3.25%，0.85%，1.71%，3.82%（n ＝6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為150301）適量，共9 份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n ＝9）Tab.2 Results of the recovery test（n ＝9）

2.4 樣品中殘留溶劑測(cè)定

取3 批樣品各適量，分別按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3 次，記錄峰面積，并計(jì)算樣品中的溶劑殘留，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

3.1 進(jìn)樣方式與溶劑選擇

DMF 的沸點(diǎn)較高（149 ～156 ℃），不易充分汽化。2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0861 中指出，對(duì)于沸點(diǎn)過(guò)高的溶劑，因測(cè)定的靈敏度不如直接進(jìn)樣，故一般不用頂空進(jìn)樣方式。有文獻(xiàn)報(bào)道用1，3－二甲基咪唑啉酮作為溶劑[5－6]，采用頂空進(jìn)樣方式測(cè)定DMF 殘留量，但該溶劑費(fèi)用昂貴，檢驗(yàn)成本較高，若直接進(jìn)樣主成分熱分解產(chǎn)物易對(duì)色譜系統(tǒng)造成污染。

離子液體無(wú)蒸氣壓、不揮發(fā)，不會(huì)抑制待測(cè)殘留溶劑的頂空逸出，有利于待測(cè)成分的頂空富集，且離子液體空白基線平穩(wěn)，不存在以二甲基亞砜為溶劑時(shí)的寬大色譜峰及其對(duì)色譜系統(tǒng)的污染。本研究中采用離子液體作為溶劑，頂空進(jìn)樣，提高了檢測(cè)能力，DMF 檢測(cè)限較低，其他溶劑峰均有較低檢測(cè)限，且各色譜峰分離效果良好。

3.2 頂空平衡溫度及時(shí)間的選擇

頂空平衡溫度及時(shí)間影響頂空分析時(shí)的檢測(cè)靈敏度，故致試驗(yàn)中對(duì)頂空平衡時(shí)間和溫度進(jìn)行了考察。取相同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液若干份，在80 ℃下分別平衡10，20，30，40，60 min，結(jié)果30 min 后頂空瓶?jī)?nèi)氣－液達(dá)平衡，各色譜峰峰面積不再增大。另取上述混合對(duì)照品溶液，分別在40，50，60，70，80，90 ℃平衡30 min，結(jié)果表明，各色譜峰峰面積隨溫度升高而逐漸增大，80 ℃后趨于穩(wěn)定。故本研究中選擇80 ℃、30 min 作為最佳頂空平衡調(diào)節(jié)。