蘇 建，劉永利

（河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院中藥檢驗(yàn)室·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中藥材質(zhì)量監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 052000）

麥冬為百合科植物麥冬 Ophiopogon japonicus（Thunb.）Ker－Gawl. 的干燥塊根，具有養(yǎng)陰生津、潤(rùn)肺清心功效[1]，分布于中國(guó)、日本、越南、印度等地。作為常用大宗類(lèi)藥材，麥冬的質(zhì)量越發(fā)受到關(guān)注，其安全性不僅與藥物療效密切聯(lián)系，更與患者生命安全息息相關(guān)。影響中藥安全性的外源性污染物主要是金屬及有害元素與農(nóng)藥殘留，前者會(huì)引起不同的中毒現(xiàn)象，后者的蓄積會(huì)引起心腦血管疾病、肝病等。本研究中通過(guò)參考金屬及有害元素的測(cè)定方法[2－8]和農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法[9－14]，采用電感耦合等離子體－質(zhì)譜（ICP－MS）法測(cè)定麥冬藥材中的金屬及有害元素，采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GCMS／MS）法檢測(cè)篩查麥冬藥材中的30 種禁用農(nóng)藥，為藥材的安全利用和質(zhì)量控制提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 金屬及有害元素測(cè)定

1.1 儀器與試藥

儀器：Agilent 7700X 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；MAXs5 型微波消解儀（美國(guó)CEM公司）；Milli－Q Integral 10 System 型超純水儀（美國(guó)Millipore 公司）。

試藥：金屬元素標(biāo)準(zhǔn)溶液及綠茶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（相關(guān)信息見(jiàn)表1）；硝酸（優(yōu)級(jí)純，德國(guó)Merck 公司，純度為65%）；n－丙基乙二胺（PSA），C18柱，硅膠，石墨化炭黑，均為安捷倫公司提供并預(yù)填裝；12 批麥冬藥材來(lái)自安國(guó)藥材市場(chǎng)和產(chǎn)地收集，經(jīng)河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究室段吉平主任藥師均為正品；水為超純水。

表1 各金屬及有害元素與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來(lái)源表Tab.1 Sources of metals elements，harmful elements and reference materials

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 試驗(yàn)條件

射頻功率：1 300 W；氬氣流速：15.0 L／min；輔助氣流速：0.10 L／min；霧化氣流速：0.9 L／min；采樣深度：7.0 mm；采樣錐孔徑：1.0 mm；霧室溫度：2 ℃。

1.2.2 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別取鈧（Sc）、鎳（Ni）、鋅（Zn）、砷（As）、硒（Se）、鍶（Sr）、鎘（Cd）、錫（Sn）、碲（Te）、鋇（Ba）、鉛（Pb）元素的單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，分別置50 mL 容量瓶中，用2% 硝酸溶液定容，制成各元素質(zhì)量濃度均為1 μg／mL 的單一標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精密取上述單一標(biāo)準(zhǔn)貯備液0，50，250，500，1 000，2 000 μL，分別置50 mL容量瓶中，用2%硝酸溶液定容，即得11 種元素的質(zhì)量濃度分別為0，1，5，10，20，40 ng／mL 的系列單一標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取硼（B）、鋁（Al）、鐵（Fe）、銅（Cu）單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，置50 mL 容量瓶中，用2%硝酸溶液定容，制成各元素質(zhì)量濃度均為10 μg ／ mL 的單一標(biāo)準(zhǔn)貯備液；精密量取上述單一標(biāo)準(zhǔn)貯備液0，50，250，500，1 000 μL，分別置50 mL 容量瓶中，用2%硝酸溶液定容，即得4 種元素的質(zhì)量濃度分別為0，10，50，100，200 ng／mL 的系列單一標(biāo)準(zhǔn)溶液。取汞（Hg）單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，置50 mL 容量瓶中，用2%硝酸溶液定容，制成汞質(zhì)量濃度為1 μg ／ mL 的標(biāo)準(zhǔn)貯備液；量取貯備液0，20，100，200，400 μL，分別置50 mL 容量瓶中，用2%硝酸溶液定容，即得Hg 質(zhì)量濃度分別為0，0.4，2，4，8 ng／mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

供試品溶液：取麥冬藥材約0.5 g，精密稱定，置50 mL 消解罐中，加入硝酸6 mL，室溫預(yù)消解30 min，置微波消解儀內(nèi)，按一定消解程序消解。消解完畢后，使消解罐自然冷卻至室溫，將消解液轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，用水清洗消解罐3 次，將清洗液合并于容量瓶中，用水定容，搖勻，即得。

空白溶液：按供試品溶液制備方法，不稱取樣品，同法制備。

內(nèi)標(biāo)溶液：取銦（In）標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，置50 mL 容量瓶中，用水定容，制成In 質(zhì)量濃度為1 μg／mL，即得。

1.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取1.2.2 項(xiàng)下系列單一標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以儀器信號(hào)強(qiáng)度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見(jiàn)表2。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取藥材樣品適量，每份0.5 g，共9 份，按1.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按1.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄儀器信號(hào)強(qiáng)度，并計(jì)算含量。詳見(jiàn)表2。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量藥材樣品適量，每份0.5 g，共9 份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的單一對(duì)照品溶液，按1.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按1.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 16 種金屬及有害元素含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果Tab.2 Results of methodological investigation of 16 metal elements and harmful elements

方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)：采用綠茶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為參考，按1.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果（mg／kg，n ＝2）Tab.3 Determination results of reference materials（mg／kg，n ＝2）

1.2.4 樣品中金屬及有害元素含量測(cè)定

取藥材樣品適量，分別按1.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按1.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件平行進(jìn)樣測(cè)定3 次，記錄峰面積，并計(jì)算樣品含量。結(jié)果12 批藥材樣品中鋁含量較高(41.98 ～423.74 mg／kg)，鐵含量為67.76 ～321.73 mg／kg。詳見(jiàn)表4。

表4 樣品中金屬及有害元素測(cè)定結(jié)果（mg／kg，n ＝2）Tab.4 Determination results of metal elements and harmful elements in the samples（mg／kg，n ＝2）

2 30 種禁限用農(nóng)藥殘留測(cè)定

2.1 儀器與試藥

儀器：GC ／ MS－TQ8040 型氣相色譜－三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（日本Shimadzu 公司）；AE240 型電子天 平（瑞 士Mettler－Toledo 公 司，精 度 為0.1 mg）；Milli－Q Integral 10 System 型超純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

試藥：30 種農(nóng)藥對(duì)照品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所，批號(hào)為2016－10－10）。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 試驗(yàn)條件

色譜條件：色譜柱為HP－5MS 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度為240 ℃；進(jìn)樣方式為不分流；載氣為高純度氦氣，恒壓模式；流速為1.3 mL／min；進(jìn)樣量為1 μL；程序升溫(初始溫度為70 ℃，保持2 min），以25 ℃／ min 的速率升 至150 ℃，以3 ℃／ min 的速率升至200 ℃，以8 ℃／min 的速率升至280 ℃，保持10 min）；傳輸接口溫度為280 ℃。

質(zhì)譜條件：離子源為電子轟擊源（EI 源）；監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；離子源溫度為230 ℃；質(zhì)譜傳輸接口溫度為280 ℃；碰撞氣體為氬氣；溶劑延遲時(shí)間為1.5 min。30 種農(nóng)藥組分監(jiān)測(cè)離子及電壓見(jiàn)表5。

表5 30 種農(nóng)藥組分離子及電壓監(jiān)測(cè)結(jié)果Tab.5 Monitoring of ions and voltages of 30 pesticide components

2.2.2 溶液制備

分別取30 種農(nóng)藥對(duì)照品適量，加乙腈制成質(zhì)量濃度為5 ～50 μg／mL 的單一對(duì)照品溶液，置－18 ℃冰箱中保存。取空白藥材樣品，按供試品溶液制備方法制備空白基質(zhì)溶液。取藥材樣品粉末2 g，精密稱定，加1%乙酸15 mL，浸泡30 min，勻漿，加乙腈15 mL，渦旋，充分混勻，加入無(wú)水硫酸鎂與無(wú)水乙酸鈉的混合粉末（4 ∶1，m／ m）7.5 g，渦旋，充分混勻，再置振蕩器上劇烈振搖（350 次／分）3 min，于冰浴中冷卻10 min，4 000 r／min離心5 min；取上清液9 mL，置已預(yù)先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管[無(wú)水硫酸鎂900 mg，N－丙基乙二胺（PSA）300 mg，C18300 mg，硅膠300 mg，石墨化炭黑90 mg]中，渦旋，充分混勻，再置振蕩器上劇烈振搖（350 次／分）5 min，4 000 r／min 離心5 min，精密吸取上清液5 mL，氮?dú)獯抵?.4 mL，乙腈定容至1 mL，混勻，即得供試品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2.2 項(xiàng)下單一對(duì)照品溶液各適量，制成系列混合對(duì)照品溶液，按2.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以各農(nóng)藥質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，其回歸方程與線性關(guān)系見(jiàn)表6。

檢測(cè)限考察：取2.2.2 項(xiàng)下空白基質(zhì)溶液適量，按2.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定11 次，記錄儀器響應(yīng)值，并計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差對(duì)應(yīng)的各待測(cè)元素質(zhì)量濃度作為檢測(cè)限。結(jié)果見(jiàn)表6。

加樣回收試驗(yàn)：取空白基質(zhì)藥材樣品適量，每份2 g，共9 份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的單一對(duì)照品溶液，按2.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 30 種農(nóng)藥回歸方程及線性范圍與回收率Tab.6 Regression equation linear range and recovery of 30 pesticides

精密度試驗(yàn)：采用加樣回收試驗(yàn)中9 份樣品計(jì)算，結(jié)果的RSD 均小于6.22%（n ＝9），表明儀器精密度良好。

2.2.4 樣品中農(nóng)藥殘留量測(cè)定

取12 批藥材樣品各適量，分別按2.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.2.1 項(xiàng)下試驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3 次，記錄峰面積，并計(jì)算樣品含量。結(jié)果12批藥材樣品均未檢出農(nóng)藥殘留，可初步認(rèn)為麥冬農(nóng)藥殘留安全風(fēng)險(xiǎn)較低。

3 討論

金屬及有害元素測(cè)定方法主要有原子吸收分光光度法、原子熒光法、電感耦合等離子體－發(fā)射光譜（ICP－OES）法、ICP－MS 法等，農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法有氣相色譜（GC）法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC－MS／MS）法、GC－MS／MS 法等。其中ICP－MS 法、GC－MS／MS 法均具有靈敏度高、專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)。本試驗(yàn)中采用ICP－MS 法同時(shí)測(cè)定了麥冬中金屬及有害元素的含量，采用GC－MS／MS 法同時(shí)測(cè)定多種農(nóng)藥殘留，方法靈敏、可靠，高速、低耗，可為市場(chǎng)監(jiān)管和質(zhì)量評(píng)估提供技術(shù)支持。

金屬及有害元素測(cè)定藥材樣品經(jīng)過(guò)加硝酸微波消解后，樣品中所有無(wú)機(jī)、有機(jī)元素均能同時(shí)被測(cè)定。微波消解方法耗費(fèi)時(shí)間短、試劑用量少，是一種既能節(jié)約試劑，還能縮短提取時(shí)間的快速樣品處理方法。農(nóng)藥殘留測(cè)定樣品采用QuEChERS 方法進(jìn)行提取，采用勻漿、渦旋處理，簡(jiǎn)便快捷，提取效率高，藥材樣品溶液經(jīng)處理后，去除了大部分干擾成分，便于測(cè)定。

藥材所含的微量元素是中藥的基本組成部分，是中藥藥效量化的物質(zhì)基礎(chǔ)[15－16]；金屬及有害元素是一種主要的外源性污染物。因此，研究麥冬中金屬及有害元素的含量，既可為深入探討麥冬的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定依據(jù)，又能考察麥冬藥材的金屬及有害元素污染情況。結(jié)果表明，麥冬中金屬元素鋁、鐵含量較高，長(zhǎng)期服用存在蓄積中毒的風(fēng)險(xiǎn)，其他金屬及有害元素均基本滿足我國(guó)和國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限定要求。

本試驗(yàn)中所測(cè)藥材樣品中均未檢出禁、限用農(nóng)藥殘留，表明麥冬在種植過(guò)程中無(wú)序使用農(nóng)藥現(xiàn)象較少，安全風(fēng)險(xiǎn)較低。麥冬中金屬及有害元素和農(nóng)藥殘留測(cè)定方法的建立，對(duì)中藥現(xiàn)代化背景下控制中藥材質(zhì)量，尤其是控制中藥材飲片中外源性污染物的量有著重要意義。