李曉麗,溫 健,沈?qū)氂?楊正書,孫文松

(遼寧省經(jīng)濟(jì)作物研究所,遼寧 遼陽 111000)

玉竹Polygonatumordoratum(Mill.)Druce 為百合科Liliaceae 黃精屬Polygonatum多年生草本植物,以根莖入藥,具有養(yǎng)陰潤燥、生津止渴等功效[1]。隨著玉竹食用、藥用產(chǎn)品不斷開發(fā),銷量與日俱增,種植規(guī)模逐漸擴(kuò)大,遼寧撫順清原、新賓,丹東寬甸等地大面積種植。近年來,高溫多雨季節(jié),排水不好,連作地塊根腐病發(fā)生嚴(yán)重,為害根及根莖,使根莖腐爛,防治困難。據(jù)報(bào)道,在湖南、湖北等地玉竹根腐病發(fā)生嚴(yán)重[2～3]。畢武等系統(tǒng)研究了湖南地區(qū)玉竹根腐病的病原菌及其生物學(xué)特性[4]。曹亮等對湖南生產(chǎn)區(qū)玉竹根腐病防治進(jìn)行了藥劑篩選[5]。本課題組己分離鑒定了遼寧地區(qū)玉竹根腐病的病原菌,但針對該地區(qū)玉竹根腐病的防治還缺乏高效低毒的藥劑,因此,本試驗(yàn)通過室內(nèi)病原菌抑菌試驗(yàn),篩選防治玉竹根腐病的適宜藥劑,為玉竹根腐病田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1供試菌株來源 2019 年從撫順市清原縣采集具有玉竹根腐病典型癥狀的病株,經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為尖孢鐮孢菌(FusariumOxysporumSchl)菌株,在遼寧省經(jīng)濟(jì)作物研究所實(shí)驗(yàn)室內(nèi)低溫保存、備用。

1.1.2供試藥劑11 種 10 億芽孢/克枯草芽孢桿菌WP(保定市科綠豐生化科技有限公司)、3 億CFU/克哈茨木霉菌WP(美國拜沃股份有限公司,山東禾宜生物科技有限公司分裝)、30%戊唑.嘧菌酯SC(天津市漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司)、10%多抗霉素WP、30%苯醚甲環(huán)唑SC(青島東生藥業(yè)有限公司)、50%腐霉利WP(江西禾益化工股份有限公司)、72%霜脲.錳鋅WP(浙江禾本科技有限公司)、50%多菌靈WP(江陰市農(nóng)藥二廠有限公司)、40%丙環(huán)唑EW(江蘇劍牌農(nóng)化股份有限公司)、60%唑醚.代森聯(lián)WG、250g/l 吡唑醚菌酯EC (杭州宇龍化工有限公司) 。

1.2 方法

1.2.1殺菌劑對病原菌抑菌活性初篩 采用菌絲生長速率法,測定不同殺菌劑對玉竹根腐病菌絲生長的影響。參考藥劑使用說明,各殺菌劑僅設(shè)1 個(gè)使用濃度(表1)。將各濃度待測殺菌劑按1 :9 將藥液加入滅菌后冷卻至約45 ℃的培養(yǎng)基中混勻制成含藥平板。待培養(yǎng)基凝固后,取預(yù)先培養(yǎng)好的病原菌,在菌落邊緣打取直徑5 mm 的菌餅,菌絲面朝下置于各含藥培養(yǎng)基平板中央,每皿一塊,以加入等體積無菌水的PDA 平板為空白對照,每個(gè)處理3 次重復(fù),置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6 d,采用十字交叉法測量菌落直徑。根據(jù)抑菌率公式計(jì)算抑菌率。抑菌率(%)=[(對照菌落直徑-菌餅直徑)-(處理菌落直徑-菌餅直徑)]/(對照菌落直徑-菌餅直徑)× 100

表1 不同殺菌劑使用濃度

1.2.2殺菌劑對病原菌的EC50測定 選擇初篩中對病原菌有強(qiáng)抑制力的4 種殺菌劑進(jìn)行EC50的測定。每種殺菌劑設(shè)5 個(gè)濃度處理,無菌水為對照。采用菌絲生長速率法,每個(gè)處理3 次重復(fù)。打取直徑6 mm 菌餅置于各含藥平板中央,于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6 d,采用十字交叉法測量菌落直徑,根據(jù)抑菌率公式計(jì)算抑菌率,使用回歸曲線方程求出每種殺菌劑對玉竹病原菌菌絲生長的抑制中濃度(EC50值) 。

1.2.3數(shù)據(jù)處理 利用 Excel 2003、DPS 9.50 軟件進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑對病原菌的抑菌效果

由表2 可見,11 種殺菌劑對菌絲生長均有不同程度的抑制作用。供試的11 種殺菌劑對病菌的抑菌率較對照差異顯著,其中50%多菌靈WP、30%戊唑.嘧菌酯SC、10 億芽孢/g 枯草芽孢桿菌WP 表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌活性,抑菌率在90%以上,與40%丙環(huán)唑EW 處理無顯著差異,顯著高于其它7 個(gè)處理;其次,40%丙環(huán)唑EW 與30%苯醚甲環(huán)唑SC 抑菌率在80% 以上,它們之間無顯著差異,顯著高于其它6 個(gè)處理;再次為60%唑醚.代森聯(lián)WG、250 g/L 吡唑醚菌脂EC、72%霜脲.錳鋅WP 抑菌率在60% 以上;其它抑菌率在50%以下,抑菌率較低。

表2 不同殺菌劑對病原菌活性抑制率

2.2 不同殺菌劑對病原菌的EC50 測定

對抑菌效果較好的4 種殺菌劑進(jìn)行 EC50測定。由表3 可見,不同殺菌劑的不同濃度對病菌的菌絲生長均有抑制作用,隨著殺菌劑濃度的逐漸升高,抑菌率也逐漸升高。各供試藥劑對玉竹根腐病病原菌的EC50存在一定差異,其中,30% 戊唑·嘧菌酯 SC EC50值最小,為1.3919 mg/L,毒力最強(qiáng),抑菌效果最好;其次為40%丙環(huán)唑EW 和 50% 多菌靈WP,EC50分別為6.5140 和7.4077 mg/L,毒力較強(qiáng);再次為10 億芽孢/g 枯草芽孢桿菌WP,EC50為26.9483 mg/L,毒力相對較弱。

表3 不同殺菌劑對病原菌的毒力測定

3 討論與結(jié)論

供試的11 種殺菌劑對玉竹根腐病病原菌都有一定的抑制作用,其中,30%戊唑·嘧菌酯SC、40%丙環(huán)唑EW、50%多菌靈WP、10 億芽孢/g 枯草芽孢桿菌WP4 種藥劑抑菌效果較好,抑菌率達(dá)88%以上。EC50測定結(jié)果表明,30% 戊唑·嘧菌酯SC EC50值最小,為1.3919 mg/L,毒力最強(qiáng),抑菌效果最好;40%丙環(huán)唑EW和50%多菌靈WP 次之,EC50值分別為6.51、7.41 mg/L;10 億芽孢/g 枯草芽孢桿菌WP 毒力相對較弱,EC50值為26.95 mg/L。

試驗(yàn)中30%戊唑·嘧菌酯SC 抑菌效果最好,在對根腐病防治中未見報(bào)道,可作為防治玉竹根腐病的新藥試用。40%丙環(huán)唑EW 與50%多菌靈WP 對根腐病菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌作用,與前人的研究結(jié)果一致[6～10]。枯草芽孢桿菌不但能產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)抑制病原物的生長,而且能產(chǎn)生生長激素類物質(zhì)促進(jìn)植物生長[11],因此常用于生物防治。辛中堯等研究表明,枯草芽孢桿菌菌株對黃芪、當(dāng)歸根腐病不但有較好的防治效果,而且能提高其產(chǎn)量和品質(zhì)[12]。鐘嘉麗等研究了6 種生物制劑對人參根腐病菌的抑制效果,枯草芽孢桿菌的抑制作用最強(qiáng)[13]。高琳娜等報(bào)道,枯草芽孢桿菌防治板藍(lán)根根腐病田間防效達(dá)72.97%,且增產(chǎn)[14]。Lee 等研究表明,枯草芽孢桿菌 B-4228 對人參根腐病菌有較好抑制作用[15],本試驗(yàn)中10 億芽孢/g 枯草芽孢桿菌WP 也表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌效果對玉竹產(chǎn)量和品質(zhì)的影響有待于進(jìn)一步田間試驗(yàn)進(jìn)行研究。試驗(yàn)中30%苯醚甲環(huán)唑SC 也表現(xiàn)出較好的抑菌效果,可在生產(chǎn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。

本試驗(yàn)篩選出的4 種殺菌劑對玉竹根腐病尖孢鐮孢菌均有較好的抑制效果,但不能完全代表田間藥效的高低。此結(jié)果為田間藥效試驗(yàn)提供了基礎(chǔ),這4 種藥劑可作為玉竹根腐病田間防治藥劑的參考用藥。