陳慧 陳光輝 王萬黨 鄧宇濤

宮頸癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，流行病學(xué)調(diào)查表明其發(fā)病率和死亡率均位居女性惡性腫瘤第四位，嚴(yán)重危害我國(guó)女性生命健康［1］。宮頸癌早期無特征性臨床表現(xiàn)，易被患者忽視導(dǎo)致病情進(jìn)展，晚期宮頸癌患者治療效果不佳，常導(dǎo)致患者預(yù)后不良的發(fā)生［2］。人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）根據(jù)其致癌能力分為高危型、潛在高危性和低危型三種，高危型HPV 感染的臨床表現(xiàn)包括尖銳濕疣、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變等，是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的重要因素［3］。高遷移率族蛋白（High mobility group protein，HMG）是一種晚期炎癥介質(zhì)，在膿毒癥、感染性休克和病毒感染中表達(dá)水平升高［4］。高遷移率族蛋 白A1（High mobility group protein A1，HMGA1）和高遷移率族蛋白B1（High mobility group protein B1，HMGB1）不僅能夠通過參與細(xì)胞內(nèi)DNA 的復(fù)制轉(zhuǎn)錄過程調(diào)控細(xì)胞自噬水平，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸的發(fā)生，還能夠促進(jìn)腫瘤微血管生成，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移［5-6］。本研究通過檢測(cè)宮頸癌組織中HMGA1、HMGB1 水平探究其與高危型HPV 感染的關(guān)系，旨在為宮頸癌的篩查提供新的指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年8月至2020年8月南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院收治的200 例宮頸癌患者作為研究組，另選取同期在本院體檢的女性健康就診者50 名作為對(duì)照組。研究組患者根據(jù)HPV 感染情況分為高危組和非高危組，其中感染HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV61 等高危型HPV 者為高危組，其余患者為非高危組。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有宮頸癌患者診斷依據(jù)《2021 NCCN 子宮頸癌臨床實(shí)踐指南（第1 版）》［7］，且經(jīng)陰道鏡活檢確診為宮頸癌；②所有患者均為初診，未接受過相關(guān)治療；③患者不合并重要臟器功能損傷、自身免疫性疾病及精神神經(jīng)疾病；④患者臨床資料完整；⑤患者及家屬均簽署對(duì)研究知情同意書，研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)研究批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他感染性疾病者；②合并心、肝、腎等重要臟器損傷的患者；③合并其他惡性腫瘤的患者；④孕婦及哺乳期婦女。兩組患者年齡、BMI 指數(shù)等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

HE 免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物公司，HPV 鑒定試劑盒購自潮州凱普生物化學(xué)有限公司，HMGA1、HMGB1 一抗均購自美國(guó)Abcam 公司，含辣根過氧化物酶的山羊抗兔二抗購自北京中杉金橋生物公司，酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒購自美國(guó)Thermo Fisher 公司。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

收集患者子宮頸組織標(biāo)本石蠟包埋后切片烘烤，使用二甲苯脫蠟，再使用梯度乙醇洗脫二甲苯，滴加0.3%H2O2 室溫孵育阻斷過氧化物酶活性，采用HE 免疫組織化學(xué)法試劑盒染 色，DAB顯色于鏡下觀察，控制染色時(shí)間。使用梯度乙醇脫水后中性樹膠封片進(jìn)行觀察，按陽性細(xì)胞占比計(jì)分，＜5%記0 分、5%～25%記1 分、26%～50%記2分、51%～75%記3 分、＞75%記4 分。按著色程度計(jì)分，無染色記0 分、淺黃色記1 分、棕黃色記2分、深棕色記3 分。以二者得分相乘為最終結(jié)果，＞6 分為高表達(dá)，≤6 分為低表達(dá)［8］。

采用宮頸刷收集研究組患者陰道分泌物，采用PCR+膜雜交法檢測(cè)患者高危型HPV 感染情況，高危型HPV 包括HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 等［9］。患者入組后收集患者血清3 mL，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中HMGA1、HMGB1 水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行分析；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（）表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較；采用受試者工作特征曲線（ROC）對(duì)診斷效能進(jìn)行評(píng)價(jià)；等級(jí)資料采用秩轉(zhuǎn)換的非參數(shù)檢驗(yàn)（Kruskal-Wallis 法）；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織中HMGA1、HMGB1 表達(dá)情況

研究組宮頸組織中HMGA1、HMGB1 高表達(dá)者高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 組織中HMGA1、HMGB1 表達(dá)情況［n（%）］Table 1 Expression of HMGA1 and HMGB1 in the tissues［n（%）］

2.2 HPV 感染患者組織中HMGA1、HMGB1 表達(dá)水平

200 例宮頸癌患者中檢測(cè)出174 例患者合并HPV 感染，其中119 例患者合并高危HPV 感染，55 例患者合并非高危HPV 感染。結(jié)果表明高危組患者組織中HMGA1、HMGB1 高表達(dá)患者均高于低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 HPV 感染患者組織中HMGA1、HMGB1 表達(dá)水平［n（%）］Table 2 The expression levels of HMGA1 and HMGB1 in the tissues of patients with HPV infection［n（%）］

2.3 HPV感染患者血清中HMGA1、HMGB1表達(dá)水平

高危組患者血清中HMGA1、HMGB1 高表達(dá)患者均明顯多于低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 HPV 感染患者血清中HMGA1、HMGB1 表達(dá)水平［n（%）］Table 3 The expression of HMGA1 and HMGB1 in serum of patients with HPV infection［n（%）］

2.4 血清HMGA1、HMGB1 蛋白對(duì)宮頸癌合并高危型HPV 感染的診斷價(jià)值

血清HMGA1、HMGB1 二者聯(lián)合診斷AUC為0.956（95%CI：0.878～0.999），診斷效能明顯高于單項(xiàng)（P＜0.05）。見表4、圖1。

表4 血清HMGA1、HMGB1 蛋白對(duì)宮頸癌合并高危型HPV 感染的診斷價(jià)值Table 4 The diagnostic value of HMGA1 and HMGB1 proteins in the diagnosis of cervical cancer with high-risk HPV infection

圖1 ROC 分析Figure 1 ROC curve

2.5 組織中HMGA1、HMGB1 水平與宮頸癌患者臨床資料的關(guān)系

宮頸癌患者組織中HMGA1、HMGB1 水平與患者年齡、產(chǎn)次和腫瘤病理類型無關(guān)（P＞0.05），而與患者腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤FIGO 分期相關(guān)（P＜0.05）。見表5。

表5 組織中HMGA1、HMGB1 水平與宮頸癌患者臨床臨床資料的關(guān)系Table 5 The relationship between the levels of HMGA1 and HMGB1 in tissues and the clinical data of patients

3 討論

人類是HPV 的唯一自然宿主，而宮頸部上皮移行區(qū)是HPV 的易感部位，持續(xù)的HPV 感染，尤其是高危型HPV 感染是宮頸癌發(fā)生的根本原因［10］，目前宮頸癌組織細(xì)胞中的HPV 檢出率達(dá)96%以上［11］。近年來研究表明宮頸癌病變并非僅僅由病毒感染導(dǎo)致，而是多因素共同發(fā)揮作用的結(jié)果［12］。目前宮頸癌的治療主要以手術(shù)治療以及放化療為主，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展靶向藥物及生物免疫制劑已逐步運(yùn)用于晚期宮頸癌的治療，但治療效果個(gè)體差異較大，導(dǎo)致晚期宮頸癌患者生存率仍較低。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者組織中HMGA1、HMGB1 水平明顯高于正常人，HMGA1、HMGB1水平與宮頸癌患者臨床病理特征如患者腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤FIGO 分期相關(guān)，HMGA1、HMGB1 表達(dá)升高通常與宮頸病變成正相關(guān)，且易合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。國(guó)內(nèi)學(xué)者洪宇［13］的研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者血清中的miR-130a、HMGA1 及SCC-Ag 表達(dá)水平較高，且表達(dá)量與宮頸癌的臨床病理類型、FIGO 分期有關(guān)；學(xué)者付方方［14］認(rèn)為過表達(dá)HMGA1 可以加快細(xì)胞周期過程中G1 期向S 期轉(zhuǎn)化，促進(jìn)該過程中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的增殖和克隆形成能力，從而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞腫瘤的生長(zhǎng)；學(xué)者Cheng H 等［15］研究發(fā)現(xiàn)組織中hepsin 和HMGB1 的表達(dá)水平越高，宮頸癌的侵襲程度越高，患者預(yù)后效果越差。上述研究表明HMGA1、HMGB1 具有促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)HMGA1、HMGB1 與HPV 感染也有一定的相關(guān)性，研究發(fā)現(xiàn)HMGA1 表達(dá)水平與宮頸癌病變程度呈正相關(guān)，而高危型HPV 如HPV E6/E7 均能夠促進(jìn)HMGA1 的表達(dá)，對(duì)RNA 片段中的HPV E6/E7 進(jìn)行敲除可發(fā)現(xiàn)HMGA1 表達(dá)明顯下調(diào)［16］。在口腔癌中患者組織中能檢測(cè)到高危型HPV E6 的過表達(dá)，已被證實(shí)其通過過表達(dá)HMGB1 增加口腔癌細(xì)胞的侵襲性［17］，而在喉癌患者中也發(fā)現(xiàn)相同的作用。上述研究提示高危型HPV 感染能夠促進(jìn)HMGA1、HMGB1 的表達(dá)，以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，HMGA1、HMGB1 在宮頸癌患者，尤其是合并高危HPV 感染的宮頸癌患者組織中表達(dá)明顯增高，且與患者臨床病理資料相關(guān)，還可作為宮頸癌合并高危HPV 感染的早期診斷指標(biāo)發(fā)揮作用。本研究的不足之處在于研究對(duì)象數(shù)量較少，且并未對(duì)HMGA1、HMGB1 在宮頸癌合并高危型HPV 感染中的作用和機(jī)制做出闡述，需要在后續(xù)研究中加以補(bǔ)足。