王菲，張嬌，李玉澤，羅定強(qiáng)，宋小妹*（1.陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，西安 710065；.陜西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 71046）

麻布七又名高烏頭，為毛茛科烏頭屬（AconitumL.）植物高烏頭Aconitum sinomontanumNakai的根。因其根大多分支，并且有的從主根頭部直接分支，且下部須根較多，延長(zhǎng)相互交織，結(jié)如網(wǎng)狀，中空，形如麻袋，故名“麻布七”，又因其有治療跌打損傷、骨折的功效，故又名“碎骨還陽(yáng)”。其藥性味苦、辛，性溫；有毒。具有祛風(fēng)除濕、理氣止痛及活血消腫的功效。臨床常用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、胃痛、胸腹脹滿、急慢性菌痢、急慢性腸炎、瘰疬、瘡癤等癥[1]。目前從麻布七中分離了28 個(gè)化合物，其中生物堿27 個(gè)（二萜類生物堿26 個(gè)[2-4]），主要化學(xué)成分為二萜類生物堿，這類成分多具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗癲癇、抗寄生蟲和改善心血管等作用[5-7]，麻布七中高烏甲素成分的抗炎鎮(zhèn)痛作用也較明顯[8-9]。為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用本植物，本實(shí)驗(yàn)對(duì)麻布七的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到5 個(gè)化合物（見(jiàn)圖1），其中化合物1～4 為首次從該植物中分離得到。

圖1 化合物1～5 的結(jié)構(gòu)Fig 1 Structures of compounds 1～5

1 材料

核磁共振儀（型號(hào)：Burker AVANCE 400 型，瑞士Burker 公司）；三用紫外線分析儀（型號(hào)：ZF-1，上海金鵬分析儀器有限公司）；電子分析天平（型號(hào)：OB204，萬(wàn)分之一，瑞士METTLER TOLEDO 公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠（美國(guó)GE 公司）；數(shù)控超聲波清洗器（型號(hào)：KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司）；半制備液相色譜儀（型號(hào)：島津LC-6AD，檢測(cè)器SPD-20A，日本Shimadzu 公司）；柱色譜硅膠（100～200 目）、薄層色譜用硅膠G（青島海浪硅膠干燥劑有限公司）；半制備色譜柱（型號(hào)：YMC-Pack R&D ODS-A，5 μm，10 mm×250 mm）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號(hào)：EYELAN OSB-2100）、水浴鍋（型號(hào)：HH-2）（常州國(guó)華電器有限公司）；色譜甲醇（天津市科密歐公司）；娃哈哈純凈水；分析甲醇、二乙胺、丙酮、三氯甲烷、石油醚（30～60℃）（天津科密歐公司）；顯色劑為碘化鉍鉀溶液（源葉生物）。

麻布七藥材于2016年7月采自陜西省太白山，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)王繼濤教授鑒定為毛茛科烏頭屬植物高烏頭Aconitum sinomontanumNakai的干燥根。存放于陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥標(biāo)本室（標(biāo)本號(hào)：20160727）。

2 提取與分離

稱取麻布七藥材5.0 kg，粉碎，10 倍量80%乙醇80℃回流提取3 次，每次1.5 h，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮得浸膏。將浸膏分散于鹽酸水溶液，用稀鹽酸調(diào)pH 至1，石油醚萃取酸水液，萃取后水相用氨水調(diào)pH 至10，用三氯甲烷萃取堿水相得到總生物堿（256 g）。

取總生物堿，經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮-二乙胺（50∶1∶0.1～1∶1∶0.1）梯度洗脫，得到4 個(gè)部分（Fr.1～Fr.4）。Fr.1 經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮-二乙胺（50∶1∶0.1～1∶1∶0.1）洗脫，得到Fr.1-1 和Fr.1-2 組分，將Fr.1-2 組分采用丙酮進(jìn)行重結(jié)晶得到化合物2（20 mg），F(xiàn)r.1-1 組分經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離得到化合物5（20 mg）。Fr.2 經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮-二乙胺（40∶1∶0.1～1∶1∶0.1）洗脫得到Fr.2-1 和Fr.2-2 組分，將Fr.2-1 組分純化得到化合物3（15 mg），F(xiàn)r.2-2 組分經(jīng)半制備高效液相（75%甲醇-水）分離得到化合物4（10 mg）。Fr.3經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮-二乙胺（30∶1∶0.1～1∶1∶0.1）洗脫得到化合物1（15 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)定型白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)陽(yáng)性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類。分子量為495 [M]＋；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）中δH1.07（3H，t，J＝7.2 Hz），2.75（1H，m），2.98（1H，m）顯示該化合物含有一個(gè)N-CH2CH3基團(tuán)；δH2.00（3H，s）推測(cè)含有-OCOCH3；δH3.34（6H，s），3.33（3H，s）顯示該化合物含有3個(gè)-OCH3；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）譜圖顯示26 個(gè)碳信號(hào)，其中δC172.6，22.8 推測(cè)為乙酰基信號(hào)，δC90.2，88.1，82.2，78.3，77.5，75.9，72.9 為7 個(gè)連氧碳信號(hào)，通過(guò)與文獻(xiàn)[10]中化合物delcosine 相比，發(fā)現(xiàn)多出兩個(gè)碳信號(hào)，分別為δC172.6 和22.8，可歸屬為一個(gè)乙?；盘?hào)。結(jié)合上述信息，化合物1 比delcosine 結(jié)構(gòu)只多出一個(gè)乙?；?3C-NMR（100 MHz，CDCl3）δC：72.9（C-1），27.7（C-2），29.6（C-3），37.8（C-4），45.4（C-5），90.2（C-6），88.1（C-7），78.3（C-8），45.5（C-9），39.6（C-10），49.0（C-11），29.5（C-12），44.2（C-13），75.9（C-14），34.7（C-15），82.2（C-16），66.5（C-17），77.5（C-18），57.3（C-19），13.9（N-CH2-CH3），50.6（N-CH2-CH3），57.6（6-OCH3），56.7（16-OCH3），59.3（18-OCH3），171.4（14-OCOCH3），22.8（14-OCOCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故化合物1 鑒定為acetyldelcosine。

化合物2：無(wú)色晶體（甲醇），碘化鉍鉀反應(yīng)陽(yáng)性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類。HR-EI-MS 顯示m/z495.2328 [M]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δH1.03（3H，t，J＝7.1 Hz），2.90（1H，m），2.81（1H，m）推測(cè)該化合物含有一個(gè)-N-CH2CH3基團(tuán)；δH3.25（3H，s），3.29（3H，s），3.35（3H，s），3.46（3H，s）推測(cè)該化合物含有4 個(gè)-OCH3，δH1.99（3H，s）可能歸屬為一個(gè)乙?；|(zhì)子信號(hào)；δH4.02（1H，s）和2.84（1H，s）推測(cè)可能為6 位和17 位的氫質(zhì)子信號(hào)；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）顯示26 個(gè)碳共振信號(hào)，δC91.3，89.9，84.6，84.4，82.7 和78.9 為6 個(gè)連氧碳信號(hào)；δC172.0 和22.2 歸屬為一個(gè)乙?；盘?hào)；δC51.8 和14.5 可歸屬為N-CH2CH3信號(hào)。結(jié)合上述信息推斷該化合物為烏頭堿型C19類二萜生物堿。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δC：85.4（C-1），28.0（C-2），32.3（C-3），82.7（C-4），56.0（C-5），91.3（C-6），89.9（C-7），78.9（C-8），45.0（C-9），47.1（C-10），52.2（C-11），29.7（C-12），39.4（C-13），84.4（C-14），34.8（C-15），84.6（C-16），65.6（C-17），56.7（C-19），14.5（N-CH2-CH3），51.8（N-CH2-CH3），58.0（1-OCH3），59.1（6-OCH3），56.5（14-OCH3），56.6（16-OCH3），171.2（4-OCOCH3），22.2（4-OCOCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故化合物2 鑒定為kirinenine A。

化合物3：白色無(wú)定形粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)陽(yáng)性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類，UV 254 nm 外有吸收。HR-EI-MS 顯示m/z357.2274 [M]＋；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）譜中：δH1.00（3H，t，J＝7.1 Hz），2.60（1H，m），2.69（1H，m）推測(cè)該化合物具有一個(gè)-NCH2CH3；δH0.82（3H，s）推測(cè)該化合物含有一個(gè)叔甲基；δH5.18（2H，brd，J＝1.5 Hz）顯示該化合物含有一個(gè)-C＝CH2基團(tuán)；δH1.14（1H，dd，J＝4.3 Hz）和1.85（1H，dd，J＝6 Hz）可分別歸屬為C-14上的兩個(gè)H 質(zhì)子信號(hào)；2.45（1H，d，J＝6 Hz）可歸屬為C-13 上的H 質(zhì)子信號(hào)。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）顯示22 個(gè)碳共振信號(hào)，δC157.8和109.7 分別為-C＝CH2信號(hào)，δC48.5 和14.4為-NCH2CH3信號(hào)，綜上所述該化合物為napelline型C20二萜類生物堿；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δC：68.0（C-1），30.1（C-2），24.7（C-3），38.0（C-4），32.7（C-5），24.2（C-6），46.9（C-7），50.7（C-8），46.1（C-9），52.1（C-10），28.0（C-11），76.6（C-12），49.0（C-13），30.6（C-14），77.8（C-15），157.8（C-16），109.7（C-17），19.2（C-18），93.2（C-19），66.2（C-20），14.4（N-CH2-CH3），48.6（N-CH2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故化合物3 鑒定為dehydronapelline。

化合物4：白色無(wú)定形粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)陽(yáng)性（紅棕色），表明該化合物可能為生物堿類，UV 254 nm 外有吸收。分子量為359；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）：δH1.02（3H，t，J＝7.1 Hz），δH2.30（1H，m）和2.68（1H，m）顯示該化合物具有一個(gè)-NCH2CH3；δH0.67（3H，s）推測(cè)該化合物含有一個(gè)叔甲基；δH5.01（1H，s），δH5.21（1H，s）推測(cè)該化合物含有一個(gè)-C＝CH2基團(tuán)。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）顯示22 個(gè)碳共振信號(hào)，δC71.1，73.4 和78.2 可歸屬為3 個(gè)連氧碳信號(hào)；δC154.8 和109.5 可歸屬為-C＝CH2信號(hào)；δC50.9 和13.9 可歸屬為-NCH2CH3信號(hào)。綜上所述推測(cè)該化合物為C20類二萜生物堿；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δC：71.1（C-1），31.5（C-2），38.9（C-3），33.9（C-4），51.2（C-5），23.3（C-6），47.0（C-7），43.9（C-8），54.4（C-9），52.6（C-10），73.4（C-11），42.5（C-12），24.8（C-13），27.7（C-14），78.2（C-15），154.8（C-16），109.5（C-17），26.2（C-18），57.3（C-19），67.9（C-20），13.9（N-CH2-CH3），50.9（N-CH2-CH3），以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故化合物4 鑒定為11-α-hydorxy-lepenine。

化合物5：白色無(wú)定型粉末。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δH：0.71（3H，s，H-18），1.01（3H，s，H-19），0.94（3H，d，J＝6.4 Hz，H-21），0.88（3H，d，J＝7.7 Hz），0.85（3H，d，J＝7.7 Hz）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δC：38.7（C-1），33.2（C-2），72.6（C-3），43.6（C-4），142.4（C-5），122.6（C-6），33.4（C-7），32.5（C-8），51.9（C-9），37.8（C-10），22.3（C-11），41.3（C-12），43.2（C-13），58.3（C-14），25.5（C-15），30.6（C-16），57.6（C-17），12.5（C-18），20.0（C-19），37.6（C-20），19.5（C-21），35.3（C-22），27.4（C-23），47.5（C-24），30.9（C-25），19.6（C-26），20.3（C-27），24.3（C-28），12.4（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故化合物5 鑒定為β-谷甾醇。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從麻布七中共分離得到4 個(gè)生物堿。近年來(lái)，麻布七的藥理活性主要圍繞高烏甲素及N-去乙?；邽跫姿剡M(jìn)行研究；另有研究發(fā)現(xiàn)delcosine 和lepenine 為麻布七治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的有效成分，為麻布七治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等炎癥提供科學(xué)依據(jù)[16]。而關(guān)于本研究中4 個(gè)生物堿的活性及其作用機(jī)制未見(jiàn)有報(bào)道，有待進(jìn)一步研究。