李一鳴 (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院同位素室，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

肺癌是一種致死率較高的常見惡性腫瘤，其中，非小細胞肺癌(NSCLC)約占全部肺癌發(fā)病率的80%，嚴重影響患者的生命健康〔1，2〕。隨著生活環(huán)境的改變及吸煙人數(shù)的不斷增加，全球范圍內(nèi)肺癌的發(fā)病率與日俱增，死亡率也居高不下。目前，肺癌的臨床治療仍以手術(shù)干預(yù)為主，輔助放療或化療，但手術(shù)治療對存在遠處轉(zhuǎn)移或較大范圍轉(zhuǎn)移患者的作用有限〔3〕。對于存在遠隔轉(zhuǎn)移或局部進展的中晚期患者來說，化療能有效提高患者生存時間，早期消滅腫瘤遠處轉(zhuǎn)移灶，提高手術(shù)切除率，改進局部腫瘤控制情況〔4〕。2015 年中國原發(fā)性肺癌臨床診療流程提出，檢測相關(guān)血清腫瘤標志物是擬診肺癌患者的推薦檢查之一〔5〕。檢測血液中腫瘤標志物具有創(chuàng)傷小、取材方便及較好的重復(fù)性等優(yōu)點，因此血清腫瘤標志物的檢測越來越受到人們的重視〔6，7〕。研究表明，血清腫瘤標志物在NSCLC的預(yù)后判斷和療效監(jiān)測中也具有重要意義。 本研究擬通過比較NSCLC臨床患者化療干預(yù)前后血清糖類抗原(CA)125水平變化及動物模型中血清CA125水平變化對化療療效的影響，評價CA125在NSCLC化療效果評估中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1臨床病例 收集2019年10月至2020年9月于齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院NSCLC患者60例，經(jīng)病理或細胞學(xué)檢查確診，均無手術(shù)指征或患者簽署拒絕手術(shù)治療。納入標準：患者入院前均為初診病例，且未行放療、化療、內(nèi)分泌治療等干預(yù)治療，確診后均接受至少1個療程吉西他濱聯(lián)合順鉑化療治療。排除標準：合并其他腫瘤患者；合并遠處轉(zhuǎn)移患者；合并臟器功能不全患者；合并急性感染患者；妊娠或哺乳患者；排除對受試藥物過敏患者。平均年齡(55.12±5.20)歲，Ⅰ期1例，Ⅱ期4例，Ⅲ期35例，Ⅳ期20例；治療前血清CA125水平正常18例，血清CA125陽性42例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，研究對象均知情并簽署知情同意書。

1.1.2實驗動物 6～8 w齡健康雄性SPF級(無特殊病原體動物)昆明種小鼠40只，體重(20±5)g，購于中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心(長生公司)。所有實驗動物均進行1 w適應(yīng)性培養(yǎng)。飼養(yǎng)環(huán)境(23±2)℃，濕度40%～60%，12 h光照和黑暗交替飼養(yǎng)，通風(fēng)良好，環(huán)境安靜，實驗動物自由飲食、飲水。飼料由動物實驗中心提供。本研究關(guān)于實驗小鼠的相關(guān)操作均符合醫(yī)院動物倫理委員會要求。

1.2方法

1.2.1化療方案 患者均接受吉西他濱聯(lián)合順鉑化療。注射用鹽酸吉西他濱〔齊魯制藥(海南)有限公司，國藥準字：H20113286〕+ 0.9% 氯化鈉注射液(華仁藥業(yè)股份有限公司，國藥準字：H20023682)100 ml，分別于第1天及第8天按照 1 000 mg/m2靜脈滴注 30 min，順鉑注射液(江蘇豪森藥業(yè)集團有限公司，國藥準字：H20040813，規(guī)格6 ml∶30 mg)于第1～3天按照25 mg/m2靜脈滴注，以21 d為1個療程，對癥給予止吐、水化等治療干預(yù)。

1.2.2血清CA125檢測 患者均于化療前后抽取清晨空腹靜脈血3 ml，3 500 r/min離心5 min，分離血清，采用化學(xué)發(fā)光儀檢測血清CA125水平。正常指標：血清CA125<35 IU/ml。

1.2.3動物分組及模型制備 取出液氮中保存的NSCLC細胞A549，置于水浴鍋中快速融化，生理鹽水離心清洗3次，接種于2只實驗小鼠腹腔，0.5 ml/只。于第9日抽取腹水進行腹腔傳代，至第五代腹水細胞，稀釋5×107個/ml，接種于剩余實驗小鼠右后肢外側(cè)北部近中線處，0.2 ml/只，共接種40只。根據(jù)實驗小鼠接種后48 h血清CA125表達水平將其分為CA125正常組和CA125陽性組，兩組均給予吉西他濱聯(lián)合順鉑化療干預(yù)，經(jīng)尾靜脈聯(lián)合注射吉西他濱(150 mg/kg)及順鉑(10 mg/kg)?；熀笮∈笞杂娠嬍?，每組隨機抽取3只，剪尾取血約0.05 ml后處死，剝離原位腫瘤，腫瘤稱重，剩余小鼠用于生存記數(shù)。

1.3觀察指標

1.3.1化療療效 采用實體瘤療效評價標準(RECIST)〔8〕：以全部病灶消失，無新病灶出現(xiàn)，腫瘤標志物降至正常，并至少維持4 w為完全緩解(CR)；以腫瘤最長徑之和縮小≥30% 以上，并至少維持4 w為部分緩解(PR)；以腫瘤最長徑之和縮小未PR，或增大未達進展為穩(wěn)定(SD)；以最大徑增大≥20%，或出現(xiàn)新病灶為進展(PD)。以CR+PR+SD為非進展。

1.3.2實驗小鼠自主活動情況 自主活動情況采用組織活動測定儀檢測，每間隔2 d觀察兩組實驗小鼠自主活動次數(shù)并記錄。

1.3.3腫瘤生長情況 裸鼠成瘤后，每7 d采用游標卡尺測量腫瘤長徑(a)和短徑(b)，根據(jù)公式V=ab2/2計算移植瘤體積。根據(jù)公式瘤重抑瘤率=(1-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重)× 100%計算各組抑瘤率。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0 軟件進行χ2檢驗、t檢驗、單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1血清CA125水平與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系 NSCLC患者血清CA125水平與患者性別、年齡、TNM臨床分期無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表1。

表1 血清CA125水平與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.2NSCLC患者化療前后血清CA125水平變化 進展組化療后血清CA125水平明顯增加(P<0.05)，非進展組化療后血清CA125水平則無明顯改變(P>0.05)，且化療后進展組血清CA125水平明顯高于非進展組(P<0.05)，見表2。

表2 NSCLC患者化療前后血清CA125水平

2.3血清CA125水平與NSCLC患者化療療效的關(guān)系 CA125正常NSCLC患者化療后進展4例，非進展14例，化療有效率為77.78%；CA125陽性NSCLC患者化療后進展20例，非進展22例，化療有效率為52.38%，明顯低于CA125正常組(χ2=4.382,P=0.023)。

2.4兩組小鼠化療前后自主活動情況 CA125正常組化療后自主活動次數(shù)有所增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，CA125陽性組化療后自主活動次數(shù)則明顯減少(P<0.05)，且陽性組明顯低于正常組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組小鼠化療前后自主活動情況

2.5兩組小鼠化療后腫瘤轉(zhuǎn)移情況 化療干預(yù)后，CA125正常組未出現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移及腦轉(zhuǎn)移，肝轉(zhuǎn)移1例(5.00%)，心包轉(zhuǎn)移1例(5.00%)；CA125陽性組骨轉(zhuǎn)移1例(5.00%)，腦轉(zhuǎn)移2例(10.00%)，肝轉(zhuǎn)移2例(10.00%)，心包轉(zhuǎn)移3例(15.00%)；與CA125正常組遠處轉(zhuǎn)移率(10.00%)比較，CA125陽性組遠處轉(zhuǎn)移率(40.00%)明顯增高(P<0.05)。

2.6兩組小鼠化療后腫瘤體積變化 化療干預(yù)后，CA125正常組腫瘤體積明顯減小(P<0.05)，CA125陽性組實體瘤體積明顯增大(P<0.05)，CA125陽性組實體瘤體積明顯大于CA125正常組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組小鼠化療后腫瘤體積變化

2.7兩組小鼠化療后抑瘤率比較 化療干預(yù)后，CA125正常組腫瘤明顯小于CA125陽性組(P<0.05)，CA125正常組抑瘤率明顯優(yōu)于CA125陽性組(P<0.05)。見表5。

表5 兩組小鼠化療后抑瘤率比較

2.8兩組小鼠化療后生存時間 CA125陽性組最早出現(xiàn)死亡，且最早全部死亡，CA125正常組中位生存期為(48±5.24)個月，CA125陽性組中位生存期為(16±3.24)個月，CA125正常組生存期明顯優(yōu)于CA125陽性組(P<0.05)。

3 討 論

據(jù)統(tǒng)計在中國每年約有60萬人死于肺癌，從2008年開始肺癌取代肝癌成為惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的首要病因以來，中國每年死于肺癌的人數(shù)仍在不斷遞增〔9～11〕。肺癌可分為小細胞肺癌和NSCLC〔12〕。盡管過去幾十年里，肺癌的早期診治手段進展良多，但肺癌患者5年生存率仍不及20%，嚴重威脅患者的生命安全〔13〕。傳統(tǒng)治療多以手術(shù)治療和化學(xué)治療為主，但大部分晚期患者不能實行手術(shù)治療或拒絕手術(shù)治療，因此，以化療或內(nèi)科治療為主的綜合治療成為晚期NSCLC患者的主要治療手段。

化療是控制NSCLC局部病灶的有效手段之一，在NSCLC患者的臨床治療中得以廣泛應(yīng)用，在局部晚期NSCLC患者中更占有重要地位〔14〕。吉西他濱聯(lián)合順鉑化療是目前臨床上常用的化療方案之一，1998年美國食品藥物管理局(FDA)首次批準吉西他濱聯(lián)合順鉑化療為治療晚期NSCLC的一線方案以來，不斷有臨床研究證實，此方案可有效延長患者中位生存時間，提高生活質(zhì)量〔15，16〕。目前臨床上對于化療療效的監(jiān)測主要依據(jù)影像學(xué)變化進行評估，但經(jīng)化療干預(yù)后，NSCLC腫瘤組織和細胞活性無法被影像學(xué)正確判斷，部分早期NSCLC患者病灶在化療干預(yù)后無法被完全評價，加上影像學(xué)檢查對設(shè)備要求高，患者經(jīng)濟負擔重，尋找簡潔易行、經(jīng)濟高效的化療療效評估手段十分重要〔17〕。隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的不斷發(fā)展，血清腫瘤標志物在腫瘤的普查、診斷、判斷預(yù)后和轉(zhuǎn)歸、評價療效和隨診等方面占有越來越重要的位置。血清腫瘤標志物主要指腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移的過程中由腫瘤細胞產(chǎn)生、腫瘤與宿主相互作用后產(chǎn)生的一類化學(xué)物質(zhì)，或是宿主細胞因腫瘤細胞信號刺激過量產(chǎn)生的正常細胞組分，一般情況下僅在早期胚胎組織中存在，在正常人組織中幾乎不存在或者含量極低，但在腫瘤組織中含量通常會異常增高，其含量的改變可在一定程度上反映了腫瘤的性質(zhì)、腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，主要用于監(jiān)測腫瘤對治療的反應(yīng)〔18，19〕。腫瘤標志物根據(jù)不同的化學(xué)特性可分為癌胚蛋白、糖類抗原、酶類標志物、激素類、癌基因等，臨床上常用的肺癌腫瘤標志物包括癌胚抗原(CEA)、CA125、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鱗狀細胞癌相關(guān)抗原(SCC-Ag)等，在肺癌的臨床診斷、個性化方案制定、評估療效及預(yù)后判斷中具有指導(dǎo)作用〔20～22〕。

CA125是一種糖蛋白，主要是作為卵巢癌的腫瘤標志物，在卵巢癌患者中明顯升高，近來發(fā)現(xiàn)其在肺癌細胞也存在異常高表達，是目前應(yīng)用最廣泛的腫瘤標志物之一〔23，24〕。研究顯示，NSCLC患者血清中CA125陽性率較高，敏感性可高達60%，特異性高達67%，在肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的患者中，CEA 水平也有明顯上升，并與 CYFRA21-1 的升高相一致，可作為NSCLC患者診斷和判斷預(yù)后的指標〔25〕。目前臨床上采用不同腫瘤標志物聯(lián)合檢測用于預(yù)測NSCLC患者的預(yù)后〔26，27〕。本研究結(jié)果提示血清CA125水平檢測對于評估NSCLC患者的化療效果具有積極意義，血清CA125陽性的NSCLC患者化療預(yù)后一般較差。本結(jié)果提示血清CA125檢測與化療后NSCLC小鼠實體腫瘤體積改變、腫瘤遠處轉(zhuǎn)移及生存時間也具有一定關(guān)系。

綜上，血清腫瘤標志物CA125檢測可作為評估NSCLC化療效果的敏感指標，其陽性表達與腫瘤化療后的轉(zhuǎn)移及患者生存時間明顯相關(guān)。