韓貞珍 （遼寧省葫蘆島市動物疫病預(yù)防控制中心 125000）

隨著現(xiàn)代診斷技術(shù)的發(fā)展，免疫動物或感染動物的血清型中特有的免疫抗體或感染抗體，可以通過血清學(xué)進(jìn)行檢測，識別出抗體的種類和血清中的抗體量。

血清學(xué)鑒定最有效廣泛使用的試驗包括：凝集反應(yīng) （包括玻片凝集、試管凝集、乳膠凝集）補(bǔ)體結(jié)合試驗、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗。影響血清學(xué)試驗數(shù)據(jù)的因素主要有以下幾個方面：電解質(zhì)、溫度、酸堿度、振蕩、時間、雜質(zhì)和異物。

1 電解質(zhì)

在血清學(xué)反應(yīng)試樣中，玻片凝集是直接凝集，定量的血清和等量的抗原反應(yīng)，不需要電解質(zhì)。但試管凝集是間接凝集試驗需要有電解質(zhì)參與，當(dāng)抗原與抗體發(fā)生結(jié)合后，由親水膠體變?yōu)槭杷z體的過程中，須有電解質(zhì)參與才能進(jìn)一步使抗原抗體復(fù)合物表面失去電荷，水化層破壞，復(fù)合物相互靠攏聚集形成大塊的凝集或沉淀，若無電解質(zhì)參加，則不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，在禽流感抗體檢測試驗中常用0.85%氯化鈉 （pH7.4，121℃高壓滅菌15min，4℃保存?zhèn)溆茫┳鳛榭乖涂贵w的稀釋液或反應(yīng)液。但電解質(zhì)的濃度不宜過高，否則會出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。

2 溫度

抗原與抗體的結(jié)合除本身特有的特異性外，再結(jié)合反應(yīng)過程受溫度影響，溫度對結(jié)合的效果至關(guān)重要。但在一定溫度范圍內(nèi)，溫度越高，抗原、抗體分子運動速度越快，這可以增加其碰撞機(jī)會，加速抗原抗體結(jié)合和反應(yīng)現(xiàn)象的出現(xiàn)，如凝集和沉淀反應(yīng)通常在37℃恒溫箱 （即將試驗材料加蓋密封膜，起到保濕作用），以促進(jìn)反應(yīng)現(xiàn)象的出現(xiàn)，若用56℃水浴則反應(yīng)更快。但并不是所有的抗原抗體反應(yīng)都是溫度越高反應(yīng)越快，效果越好。有的抗原抗體結(jié)合需長時間在低溫下才能使反應(yīng)完成的比較充分、徹底，如有的補(bǔ)體結(jié)合試驗，口蹄疫液相阻斷-ELISA試驗，在0～4℃冰箱結(jié)合效果更好。

3 酸堿度

任何微生物的生存都有自己的生存環(huán)境，環(huán)境的pH直接影響微生物的生存和死亡。在血清學(xué)反應(yīng)中，適宜的pH能使血清中的抗體與診斷液中的病毒 （細(xì)菌）抗原有機(jī)的結(jié)合。因此，血清學(xué)試驗要求在一定的pH下進(jìn)行，常用的pH為6～8，過高或過低均可使已結(jié)合的抗原抗體復(fù)合物重新解離。若pH降至抗原或抗體的等電點時會發(fā)生非特異性酸凝集，造成假象。

4 振蕩

抗原和抗體在適宜的溫度、酸堿度條件下發(fā)生反應(yīng)。為使抗原抗體結(jié)合的效果更好，增加抗原抗體的結(jié)合速度，采用人工輔助的方法機(jī)械振蕩，適當(dāng)?shù)臋C(jī)械振蕩能增加分子或顆粒間的相互碰撞，加速抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，但強(qiáng)烈的振蕩可使抗原抗體復(fù)合物解離。

5 雜質(zhì)和異物

試驗中的待檢血清中如有與反應(yīng)無關(guān)的雜質(zhì)、異物 （如蛋白質(zhì)、類脂質(zhì)、多糖等物質(zhì)）存在時會抑制反應(yīng)的進(jìn)行或引起非特異性反應(yīng)，故在每次試驗都應(yīng)設(shè)立陽性和陰性對照。以便于發(fā)現(xiàn)檢測血清學(xué)試驗血清的質(zhì)量問題。

6 時間

試驗時間有反應(yīng)時間和判定時間，發(fā)應(yīng)時間受電解質(zhì)、溫度、酸堿度、雜質(zhì)和異物的影響。試驗判定時間影響判定結(jié)果。實驗過程中觀察時間的不同可能會看到不同結(jié)果，時間因素主要由反應(yīng)速度來體現(xiàn)，反應(yīng)速度取決于抗原抗體親和力、反應(yīng)類型、反應(yīng)介質(zhì)、反應(yīng)溫度等因素。試驗的觀察時間影響結(jié)果判定。在試驗中應(yīng)按照試驗說明書要求和步驟操作，按規(guī)定時間進(jìn)行判斷。