車(chē)瑞波，張清飛，趙 瑜*

(1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128)

褐黃血蜱(Haemaphysalisflava)廣泛分布于我國(guó)河南、湖南、上海、浙江、廣西等16個(gè)省、市、自治區(qū)[1-5]，寄生于刺猬、黃牛[1]等多種動(dòng)物體表。該蜱可攜帶新布尼亞病毒[6]、立克次體[7]、包柔螺旋體[8]、弓形蟲(chóng)[9]等多種病原，并有咬人、致病的報(bào)道[10]，具有較大的傳病風(fēng)險(xiǎn)。但是，迄今為止，尚無(wú)褐黃血蜱生活史的詳細(xì)研究報(bào)告，極其不利于建立實(shí)驗(yàn)種群、開(kāi)展試驗(yàn)研究和防控實(shí)踐[11]。本文在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)褐黃血蜱產(chǎn)卵和卵孵化規(guī)律進(jìn)行觀察。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 褐黃血蜱 試驗(yàn)蜱采自于野生刺猬體表，經(jīng)鑒定后確定為褐黃血蜱。

1.1.2 主要儀器 昆蟲(chóng)培養(yǎng)箱(LHS-100CL)，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；體視顯微鏡(SMZ1270)，日本尼康公司產(chǎn)品；測(cè)微尺，日本奧林巴斯公司產(chǎn)品；6或24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，依科賽生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 溫度對(duì)褐黃血蜱產(chǎn)卵的影響 挑選飽血程度不同的雌蜱80只，隨機(jī)分成4組，分別放于4塊細(xì)胞培養(yǎng)板(每蜱一孔)；4板分別在26、28、30、32℃下培養(yǎng)。每天8:00～10:00收集蜱卵，計(jì)量各蜱產(chǎn)卵數(shù)量或重量。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2 溫度對(duì)褐黃血蜱卵孵化的影響 取體重200 mg～280 mg的雌蜱13頭，收集各蜱第3天所產(chǎn)卵塊，并大致分為4份；將各蜱的4份卵分別放至不同的EP管中，分別于26、28、30、32℃孵化，每天觀察孵化情況。雌蜱培養(yǎng)，蜱卵孵化的相對(duì)濕度均為80%。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理分析 采用Microsoft Excel 2010和Graph Pad Prism 6.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

2 結(jié)果

2.1 褐黃血蜱卵的特征

新鮮褐黃血蜱卵呈卵圓形、暗黃色；大小為(535.6±4.4) μm×(361.5±3.3) μm，重量為(0.064±0.004) mg。

2.2 褐黃血蜱的產(chǎn)卵過(guò)程

2.2.1 褐黃血蜱的產(chǎn)卵過(guò)程特點(diǎn) 觀察發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)卵的最低雌蜱體重是68 mg；體重100 mg以下的雌蜱產(chǎn)卵少而不規(guī)律。100 mg以上雌蜱在4種溫度下的產(chǎn)卵過(guò)程相似，即產(chǎn)卵前期和產(chǎn)卵期，而產(chǎn)卵期又分上升期和下降期，詳見(jiàn)圖1。

圖1 4種溫度下蜱產(chǎn)卵重量隨產(chǎn)卵時(shí)間的變化情況

2.2.2 褐黃血蜱產(chǎn)卵過(guò)程的時(shí)長(zhǎng) 在26、28、30、32℃下，體重在0.10～0.16、0.16～0.22、0.22～0.28、0.28 mg以上的雌蜱產(chǎn)卵前期和產(chǎn)卵期見(jiàn)表1。

由表1可知，在26、28、30℃下，褐黃血蜱產(chǎn)卵前期6 d～8 d；產(chǎn)卵期8 d～15 d(平均時(shí)長(zhǎng)分別為13.25、13.74、13.14 d)，其中上升期3 d～4 d，下降期7 d～12 d。在32℃下，褐黃血蜱產(chǎn)卵前期8 d～10 d；產(chǎn)卵期8 d～12 d(平均時(shí)長(zhǎng)10.75 d)，其中上升期2 d～4 d，下降期4 d～10 d。在26、28、30℃下，褐黃血蜱的產(chǎn)卵上升期都是2 d～4 d，幾乎不受體重、溫度影響(P>0.05)；產(chǎn)卵下降期6 d～12 d，受體重影響較大，即隨體重增加而延長(zhǎng)(P<0.05)。與在26、28、30℃下的情況相比，在32℃下培養(yǎng)的蜱產(chǎn)卵前期延長(zhǎng)，而產(chǎn)卵期較短，暗示該溫度已接近褐黃血蜱的高溫極限(P<0.01)。

表1 不同溫度下褐黃血蜱的產(chǎn)卵過(guò)程

2.3 溫度對(duì)褐黃血蜱產(chǎn)卵總量的影響

體重100 mg以上者，產(chǎn)卵量隨體重增加而增多。在26、28、30℃下培養(yǎng)時(shí)，相同體重雌蜱的產(chǎn)卵量相近，且多于培養(yǎng)在32℃下的雌蜱產(chǎn)卵量(圖2)。無(wú)論何種體重雌蜱，在32℃下產(chǎn)卵量均較少。

圖2 不同溫度和不同體重對(duì)蜱產(chǎn)卵量的影響

2.4 褐黃血蜱體重與產(chǎn)卵量的關(guān)系

在4種溫度下，雌蜱體重-產(chǎn)卵量散點(diǎn)圖見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn)，在26、28、30℃下雌蜱體重-產(chǎn)卵量呈線性分布，在32℃下，雌蜱體重-產(chǎn)卵量分布散亂。

圖3 不同溫度下體重與總產(chǎn)卵量的關(guān)系

回歸分析顯示，在26、28、30℃下雌蜱體重-產(chǎn)卵量呈線性正相關(guān)，正相關(guān)關(guān)系良好(P<0.01)。褐黃血蜱吸血后每消耗1 mg體重可產(chǎn)卵8枚～9枚。在32℃下，雌蜱體重-產(chǎn)卵量相關(guān)性較差(P>0.05)。

2.5 褐黃血蜱卵的孵化

在26、28、30、32℃孵化溫度下，褐黃血蜱卵孵化時(shí)間、孵化率見(jiàn)表2。

由表2可知，在26℃時(shí)，褐黃血蜱卵孵化時(shí)間最長(zhǎng)，為27.2 d±0.75 d，隨著孵化溫度的升高，褐黃血蜱孵化時(shí)間呈減少趨勢(shì)(P<0.05)，在32℃下，褐黃血蜱卵孵化時(shí)間最短，為24.4 d±0.84 d；在32℃下，褐黃血蜱卵孵化率最低，為58.89 d±14.30 d(P<0.05)，隨著孵化溫度的降低，褐黃血蜱孵化率呈升高趨勢(shì)(P<0.05)，在28℃和26℃孵化率最高(P<0.05)，而在28℃和26℃褐黃血蜱孵化率差異不顯著(P>0.05)。

表2 不同溫度下褐黃血蜱卵孵化情況

3 討論

蜱的一生包括卵、幼蜱、若蜱和成蜱4個(gè)階段。卵是一個(gè)生命周期的開(kāi)始，由吸血雌蜱生產(chǎn)。雌蜱并非飽血后立即產(chǎn)卵，而是經(jīng)過(guò)一段時(shí)間(即產(chǎn)卵前期)后才開(kāi)始產(chǎn)卵。產(chǎn)卵期間(即產(chǎn)卵期)有一個(gè)先增多、后漸減的過(guò)程。

根據(jù)殷宏等[12]研究結(jié)果，本研究使用了26、28、30、32℃ 4個(gè)溫度對(duì)褐黃血蜱產(chǎn)卵情況進(jìn)行了觀察。在設(shè)定溫度下，褐黃血蜱的產(chǎn)卵過(guò)程十分相似，產(chǎn)卵上升期短促，產(chǎn)卵下降期慢長(zhǎng)，走勢(shì)十分典型。在26、28、30℃下，褐黃血蜱的產(chǎn)卵上升期都是2 d～4 d，幾乎不受體重、溫度影響；產(chǎn)卵下降期6 d～12 d，受體重影響較大，即隨體重增加而延長(zhǎng)。在28℃下，本種與本屬其他種類(lèi)的情況相近[13]。但在32℃下，褐黃血蜱產(chǎn)卵前期延長(zhǎng)，產(chǎn)卵期縮短、產(chǎn)卵量下降，表明該溫度已接近該蜱的高溫極限，不利于該蜱的繁殖。限于蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)工作量，過(guò)高和過(guò)低溫度下褐黃血蜱的產(chǎn)卵情況的觀察有待后繼試驗(yàn)。本研究再次證明了雌蜱產(chǎn)卵量與其吸血量關(guān)系密切，二者的關(guān)系存在線性關(guān)系，與程天印等[14]在微小牛蜱的觀察情況相似，表明雌蜱吸血量越多，其產(chǎn)卵數(shù)量越多。

孫亞麗[15]對(duì)褐黃血蜱生態(tài)學(xué)進(jìn)行研究時(shí)將其寄生于大白兔，待飽血脫離后將該蜱放到28℃±1℃、濕度88%的生化培養(yǎng)箱中進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)褐黃血蜱產(chǎn)卵前期12 d、產(chǎn)卵期23 d，比本研究時(shí)間長(zhǎng)。這可能與孫亞麗使用的培養(yǎng)濕度偏高、宿主不是褐黃血蜱最適宿主有關(guān)。從本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期褐黃血蜱科研實(shí)踐結(jié)果來(lái)看，刺猬是褐黃血蜱的最宜宿主，為此本研究所使用的褐黃血蜱宿主為刺猬。Asim I等[16]也認(rèn)為，褐黃血蜱偏好干燥，且并非十分偏好家兔。一定的濕度對(duì)蜱發(fā)育也很重要，相對(duì)濕度太低容易導(dǎo)致蜱失水而死亡；相對(duì)濕度太高不利于硬蜱體內(nèi)水分蒸發(fā)，導(dǎo)致血餐濃縮受阻。在參照Cardoso A等[17]研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)將蜱培養(yǎng)的相對(duì)濕度控制在80%。

蜱卵的孵化受溫度和濕度等多種因素的影響[18-19]。本研究重點(diǎn)觀察了26、28、30、32℃ 4種溫度下褐黃血蜱卵的孵化期和孵化率。孵化結(jié)果表明，28℃為褐黃血蜱卵孵化的最適溫度，而32℃及其以上不適合褐黃血蜱卵的孵化，該結(jié)果與長(zhǎng)角血蜱卵孵化規(guī)律相似[20]。蜱卵在濕度較低同時(shí)溫度較高的情況下，卵殼外的蠟質(zhì)極易干燥，此時(shí)會(huì)造成卵內(nèi)水分蒸發(fā)，胚胎死亡，而相對(duì)濕度太高似乎對(duì)孵化影響不明顯[21]。本研究將蜱卵放置到相對(duì)濕度為80%的條件下進(jìn)行孵化，但遺憾的是沒(méi)有足夠的蜱卵和充分的條件觀察蜱卵在其他濕度條件下的孵化情況。另外，本研究發(fā)現(xiàn)孵化時(shí)卵塊的分散聚集狀態(tài)也會(huì)影響孵化率。在分散狀態(tài)下，蜱卵極易失水干癟不能正常孵化，從而降低孵化率，因此蜱卵孵化時(shí)應(yīng)保持蜱卵的聚集狀態(tài)。