周夢月，邢冉冉，王 楠，葛毅強，陳 穎,*

（1.中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100123；2.中國農業(yè)大學食品科學與營養(yǎng)工程學院，北京 100083；3.中國農村技術開發(fā)中心，北京 100045）

香辛料是對花、花蕾、種子、芽、葉、莖、塊根和根莖等器官，或從這些器官取得的原料而制成的有刺激性香辛味、可賦予食物風味并增進食欲和幫助消化的物質的統(tǒng)稱[1]。大多數(shù)香辛料是藥食同源植物，用于食品烹調時，可以呈現(xiàn)出各種辛、香、辣味等特性，能夠賦予食物以風味，起到開胃、調香、增色等作用，因此被廣泛地運用在食品工業(yè)、家庭和酒店的菜肴烹調中[2]。最新研究表明，香辛料還具有抗氧化[3]、抗糖尿病[4]、抗癌[5]、抗病毒[6]、抗胃潰瘍[7]以及提供營養(yǎng)素[8]等特殊生理功效。隨著全球貿易的發(fā)展，食用香辛料的市場需求還會繼續(xù)增加。但是由于我國目前對食用香辛料還沒有統(tǒng)一的產品質量標準，這給食用香辛料的摻假創(chuàng)造了機會。由于不同食用香辛料經濟價值不同，因此其價格也存在較大差異。在經濟利益的驅動下，一些不法商人利用價廉的材料全部或部分替代價格較高的食用香辛料產品[9]，如2017年“天津獨流鎮(zhèn)調料造假”事件的發(fā)生擾亂了市場秩序[10]。為了規(guī)范市售食用香辛料的商品情況，合理制定食用香辛料的質量標準，迫切需要一種準確快速的食用香辛料真?zhèn)舞b別方法。

基于DNA的分子檢測方法對物種判別的基礎是遺傳物質，可以克服表型不能完全或真實地反映食用香辛料變異情況的缺點，從而保證檢測結果的確定性和重現(xiàn)性[11]。近年來，序列特異擴增區(qū)域-聚合酶鏈式反應（sequence characterized amplified region-polymerase chain reaction，SCAR-PCR）和DNA條形碼技術成為檢測食品摻假的理想方法，已被廣泛用于香辛料的物種鑒別[12]。Gul等[13]使用隨機引物擴增出區(qū)分胡椒和番木瓜種子的特異性RAPD標記片段，并轉化為SCAR標記，最終成功鑒別胡椒及其常見摻假物（番木瓜種子）。ITS2基因是5.8S和28S基因之間的轉錄間隔區(qū)，其兩端區(qū)域高度保守易于通用引物的設計，且該區(qū)域易擴增，是唯一被廣泛使用的核基因[14]。Chen Shilin等[15]利用通用引物對992 種藥用植物（雙子葉植物、單子葉植物、裸子植物、蕨類植物）進行PCR擴增，結果表明，PCR擴增成功率達到89.6%，可成功擴增大部分藥用植物的ITS2基因序列。Zhang Mengting等[16]以ITS2和psbA-trnH基因序列為分子標記，利用DNA條形碼技術成功鑒別了16 種具有代表性的食用香辛料及其常見摻雜物，但部分白胡椒、丁香和肉豆蔻因DNA質量濃度低（＜20 ng/μL）導致PCR擴增失敗，未能進行下一步研究。由此可見，DNA純度和質量濃度是基于DNA分子檢測方法成功的重要因素。食用香辛料來自不同科屬植物的不同部位，有些含有大量的多糖和多酚類化合物，這些化合物的存在會抑制DNA的提取[17]。多酚經長時間放置被氧化，可以不可逆結合蛋白質和核酸形成高分子質量的復合物，導致所提DNA質量差[18]。而多糖會阻礙聚合酶、連接酶和限制性內切酶的活性，若DNA提取過程中未完全去除會導致后續(xù)研究無法進行[19]。目前關于食用香辛料DNA提取方法的研究多針對單一物種[20-23]，缺少對大多數(shù)食用香辛料通用的提取方法。

本研究針對常見的食用香辛料，采用改良十六烷基三甲基溴化銨（cetyltrimethylammonium bromide，CTAB）法、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）-CTAB法和4 種市售DNA提取試劑盒對其基因組DNA進行提取，并利用ITS2序列引物對其進行PCR擴增，通過比較DNA提取效率和所提DNA的質量及PCR擴增成功率，以篩選出最適合食用香辛料DNA提取的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

選用常見的19 種食用香辛料作為實驗材料（圖1）。其中，砂仁、草果、豆蔻、干姜、高良姜、山柰、小茴香、白芷、肉桂、肉豆蔻、花椒、陳皮、丁香、八角、甘草購于北京同仁堂開發(fā)區(qū)店，孜然、芫荽子、月桂葉、白胡椒購于電子商務平臺。所有樣品均根據(jù)中國植物志進行形態(tài)學鑒定。市售粉狀食用香辛料，孜然粉、肉桂粉、花椒粉、八角粉、白胡椒粉和辣椒粉購于線上京東超市。

圖1 食用香辛料圖片F(xiàn)ig. 1 Pictures of edible spices tested in this study

DNA提取試劑盒：TIANGEN植物基因組DNA提取試劑盒、TIANGEN DNAsecure新型植物基因組DNA提取試劑盒 天根生化科技（北京）有限公司；DNeasy plant kit 德國QIAGEN公司；Nucleospin?Food kit 德國Machereye-Nagel公司。為了便于區(qū)分，以上4 種DNA提取試劑盒分別用公司名稱代替，即TIANGEN-I試劑盒、TIANGEN-II試劑盒、QIAGEN試劑盒和MN試劑盒。

CTAB、Tris-HCl、EDTA、NaCl、NaCOOH、KCOOH、異丙醇、無水乙醇 國藥集團（上海）化學試劑有限公司；SDS 美國Amresco公司；聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrrolidone，PVP） 北京索萊寶科技有限公司；DNA抽提試劑 北京拜爾迪生物技術有限公司；2×SuperTaqPCR MasterMix、6×上樣緩沖液北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司；DL2000 DNA Marker寶生物技術（大連）有限公司；瓊脂糖 北京擎科新業(yè)生物技術有限公司。

TissueLyser II高通量組織研磨儀 德國QIAGEN公司；BT323S電子天平 賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；Thermo Heraeus Pico 17微量離心機、Nano Drop ONE超微量分光光度計 美國Thermo Fisher Scientific公司；電泳儀、Versa Doc凝膠成像系統(tǒng)美國Bio-Rad公司；微量移液器 德國Eppendorf公司；Veriti 96-Well Thermal Cycler梯度PCR儀 美國Applied Biosystems公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

取食用香辛料樣品，塊狀和片狀的食用香辛料用70%乙醇溶液擦拭，顆粒狀和粉狀食用香辛料放入70%乙醇溶液中，混合均勻后棄上清液。隨后將清洗后的食用香辛料晾干并放入組織研磨器中，在頻率30 Hz研磨90 s。將粉碎后的食用香辛料放入研缽中，加入液氮充分研磨3～5 次。根據(jù)文獻報道，為了防止多酚氧化影響DNA的質量，CTAB法和SDS-CTAB法在研磨時加入2%的PVP，使多酚與PVP絡合[24]。

1.2.2 DNA提取

使用4 種商業(yè)化試劑盒以及改良CTAB法和SDSCTAB法對塊狀、片狀及顆粒狀食用香辛料樣品進行基因組DNA提取。篩選出最優(yōu)DNA提取方法用于粉狀食用香辛料中基因組DNA的提取，以驗證該方法在市售香辛料粉中的適用性。每個樣品設置3 個重復，且每個DNA提取方法設置一個空白對照。

1.2.2.1 TIANGEN-I試劑盒

TIANGEN-I試劑盒采用以硅基質為材料的離心柱，適用于從多種植物的不同組織中快速提取基因組DNA，特別適用于多酚、多糖含量高的植物組織和植物干粉。分別稱取30 mg樣品進行DNA提取，DNA裂解時間由20 min延長至60 min；由于食用香辛料中多酚較多，苯酚-氯仿-異戊醇（25∶24∶1，V/V）代替氯仿進行等體積抽提2 次，最終使用60 μL雙蒸水洗脫DNA，洗脫后的溶液再加入離心柱中重復洗脫步驟，其余按照說明書步驟操作。

1.2.2.2 TIANGEN-II試劑盒

TIANGEN-II試劑盒是離心柱型試劑盒，適用于各種植物組織。分別稱取20 mg樣品按照試劑盒說明書進行DNA提取。其中DNA裂解條件改為65 ℃水浴60 min，且最終使用60 μL雙蒸水重復洗脫2 次。

1.2.2.3 QIAGEN試劑盒

QIAGEN試劑盒通過基于硅膠膜的離心柱形式，從植物細胞、組織或真菌細胞樣本中分離總DNA。分別稱取20 mg樣品按照試劑盒說明書操作，其中DNA裂解時間延長為60 min，最終使用60 μL雙蒸水重復洗脫DNA 2 次。

1.2.2.4 MN試劑盒

MN試劑盒是一種硅膠柱吸附式試劑盒，能提取復雜基質（加工食品、大豆、巧克力，谷物、肉類、動物飼料等）中的DNA。分別稱取30 mg樣品進行DNA提取，DNA裂解時間由30 min延長為60 min，最終使用雙蒸水重復洗脫2 次，其余按照說明書步驟進行。

1.2.2.5 改良CTAB法

分別稱取30 mg樣品參照余亞東[25]的方法進行DNA提取，部分步驟進行改進。其中樣品經CTAB提取液裂解60 min后，使用DNA抽提試劑苯酚-氯仿-異戊醇（25∶24∶1，V/V）代替氯仿-異戊醇（24∶1，V/V）將DNA抽提至上層水相中，加入異丙醇和3 mol/L NaCl溶液后置于-20 ℃中冰浴，冰浴時間由60 min延長至過夜。12 000 r/min離心5 min，棄上清液，并使用70%乙醇溶液和無水乙醇分別洗滌沉淀，最后使用60 μL雙蒸水溶解DNA。

1.2.2.6 SDS-CTAB法

稱取30 mg樣品，參考趙玲云等[26]的方法進行DNA提取，并針對食用香辛料部分改進。基于預實驗省略緩沖液I洗滌和RNase的加入，樣品在2% SDS溶液中65 ℃裂解60 min后，加入5 mol/L KCOOH（pH 6.0），并置于-20 ℃中冰浴60 min。離心取上清液后加入CTAB緩沖液，65 ℃裂解60 min后改用等體積的DNA抽提試劑苯酚-氯仿-異戊醇（25∶24∶1，V/V）抽提DNA。隨后加入異丙醇和NaCl溶液過夜沉淀DNA，離心棄上清液，并用70%乙醇溶液洗滌2 次，最后使用60 μL雙蒸水溶解DNA。

1.2.3 DNA質量檢測

1.2.3.1 DNA質量濃度和純度測定

取1 μL提取的DNA用Nano Drop ONE測定其質量濃度、A260nm/A280nm和A260nm/A230nm的比值，以評估提取DNA的質量和雜質去除情況。

1.2.3.2 DNA完整度檢測

選取3 個重復中DNA質量濃度最高的樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，評價不同提取方法所得DNA的完整度。取5 μL DNA原液與1 μL 6×上樣緩沖液混勻，以1%的瓊脂糖凝膠進行電泳，電壓90 V，電泳時間40 min。電泳結束后放于EB染液中染色10 min，水洗2 min，最后放入凝膠成像系統(tǒng)中成像。

1.2.3.3 PCR擴增

將DNA稀釋至10 ng/μL，用ITS2序列引物[27]進行PCR擴增以評價所提DNA是否滿足后續(xù)研究。引物序列為MS2F：5’-GAGTCTTTGAACGCAAGTTG-3’和MS2R：5’-TCCTCCGCTTATTGATATG-3’。PCR體系為：2×PCR reaction mix 12.5 μL，正反向引物各0.1 mmol/L，DNA 30 ng，加水補充至25 μL。PCR程序：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，33 個循環(huán)，最后72 ℃延伸7 min。PCR結束后，取5 μL PCR產物，在2%的瓊脂糖凝膠中電泳45 min，電壓90 V。隨后用Versa Doc凝膠成像系統(tǒng)檢測PCR擴增情況。

1.3 數(shù)據(jù)分析

2 結果與分析

2.1 DNA完整度分析

食用香辛料來自植物的不同部位，其組織中含有不同含量和種類的次生代謝產物，這些物質的存在會影響DNA的提取質量。本研究選取適用于富含多酚和多糖的植物DNA提取試劑盒、復雜基質的食品DNA提取試劑盒及針對次生代謝產物改良的CTAB法和SDS-CTAB法提取食用香辛料基因組DNA。

采用瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的DNA完整性。條帶緊湊、分子質量大的表明提取方法效果較好，高分子質量條帶呈分散狀，低分子質量區(qū)域較亮，表明降解較為嚴重[28]。結果表明，不同DNA提取方法對DNA完整性影響不同，都觀察到一定程度的降解。6 種方法提取的7號（孜然）、9號（芫荽子）、12號（月桂葉）、14號（青花椒）和18號（甘草）樣品DNA在2 kb以上區(qū)域有明顯條帶，但存在拖尾現(xiàn)象。2號（草果）、11號（肉桂）、13號（肉豆蔻）和17號（八角）樣品的DNA均無明顯條帶，主要是由于食用香辛料在干燥及存放過程中，DNA暴露在高溫、物理或化學處理下，導致DNA的降解[29]。總體來看，TIANGEN-II試劑盒和改良CTAB法所提DNA完整性最好。而QIAGEN試劑盒法所提DNA電泳條帶亮度較弱，表明該方法提取的DNA產率較低。

圖2 6 種方法提取食用香辛料基因組DNA的電泳圖Fig. 2 Electrophoresis of genomic DNA from edible spices obtained by six extraction methods

2.2 DNA質量濃度分析

由于6 種方法所用食用香辛料的量不同，因此將質量濃度換算為20 mg樣品所提DNA的質量濃度進行比較。結果表明，不同食用香辛料種類和提取方法在統(tǒng)計學上存在顯著差異，證明DNA質量濃度取決于提取方法和樣品種類（表1）。比較不同的DNA提取方法，發(fā)現(xiàn)改良CTAB法、SDS-CTAB法所提DNA質量濃度顯著高于MN試劑盒法、TIANGEN-I試劑盒法和QIAGEN試劑盒法（P＜0.05）。在4 種商業(yè)試劑盒中，TIANGEN-II試劑盒和MN試劑盒所提DNA質量濃度顯著高于TIANGEN-I和QIAGEN試劑盒（P＜0.05）。研究發(fā)現(xiàn)，DNA質量濃度受食用香辛料種類的影響。皮類食用香辛料，如11號（肉桂），提取DNA質量濃度為2.44～62.36 ng/μL，其中改良CTAB法提取的DNA質量濃度最高，其次依次為SDS-CTAB法、TIANGEN-II試劑盒法、QIAGEN試劑盒法、MN試劑盒法和TIANGEN-I試劑盒法。主要是由于木質素合成途徑中存在的蛋白質、多糖和酚類化合物會強烈抑制DNA的提取，使得從木材中提取基因組DNA對困難[30]，導致樹皮/木質組織的DNA產量較低（＜50 ng/μL）[31]。根莖類食用香辛料，如4號（干姜）、5號（高良姜）、6號（山柰）、10號（白芷）和18號（甘草），所提DNA平均質量濃度低于85 ng/μL，這是由于這類樣品大多質地堅硬且組織中含有較多的纖維和儲藏物質[32]，導致同等質量的樣品中DNA含量少、較難提取。部分果實類食用香辛料，如1號（砂仁）和2號（草果），其質地堅硬（圖1），在相同的前處理情況下仍有塊狀物質存留，表明細胞壁未完全破除，導致所提DNA質量濃度低。因此，在根、莖、皮類等質地堅硬的食用香辛料DNA提取中，應充分研磨，且適當增加樣品量和裂解時間，以獲得高質量濃度、高質量的DNA。13號（肉豆蔻）經6 種提取方法提取后得到的DNA質量濃度低，平均為8.54 ng/μL。這是由于13號（肉豆蔻）含油率較高[33]，脂質的存在阻礙了遺傳物質的提取。另外，其平均DNA質量濃度低于其他食用香辛料的DNA質量濃度，證明脂質對DNA提取的影響比堅硬的組織更大，這也與Tear等[34]研究一致。

表1 6 種方法提取的19 種食用香辛料DNA的質量濃度Table 1 Concentrations of DNA from 19 edible spices extracted by six methods

2.3 DNA純度分析

多糖和多酚的存在會干擾DNA進一步分析[35]，本研究采用A260nm/A280nm和A260nm/A230nm比值對提取的DNA進行質量評價。所有方法提取DNA的A260nm/A280nm比值在（0.70±0.03）～（2.05±0.01）之間（表2），TIANGENII試劑盒所提DNA的A260nm/A280nm比值最高，與改良CTAB法、SDS-CTAB法和TIANGEN-I試劑盒法無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但顯著高于MN試劑盒法和QIAGEN試劑盒法（P＜0.05）。利用TIANGEN-II試劑盒提取到的19 種食用香辛料DNA，其中63%的樣品優(yōu)于其他方法，且26.3%的樣品DNA的A260nm/A280nm比值高于1.8，證明DNA提取過程中蛋白質去除良好。MN試劑盒法提取的4號（干姜）和6號（山柰）樣品DNA的A260nm/A280nm比值分別為1.12±0.02和0.99±0.02，DNA中存在蛋白質污染，表明MN試劑盒不適用于兩者中蛋白質的去除。本研究采用A260nm/A230nm比值評估各方法對碳水化合物的去除情況，6 種方法提取DNA的A260nm/A230nm比值低于2.0（P＜0.05），表明DNA中可能存在多糖、小分子鹽類及色素等物質。6 種DNA提取方法中TIAGEN-I碳水化合物去除情況最好，且52.6%的樣品所提DNA優(yōu)于或同于其他方法?？傮w而言，6 種方法所提DNA的A260nm/A230nm比值無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 6 種方法提取的19 種食用香辛料DNA的純度Table 2 DNA purity from 19 edible spices extracted by six methods

2.4 PCR擴增結果分析

本研究將6 種方法提取的食用香辛料DNA進行PCR擴增以評估DNA的擴增成功率，進而比較不同方法去除PCR抑制劑的能力，以選出最佳DNA提取方法。結果顯示，6 種方法提取的DNA在PCR擴增效率上有明顯差異（圖3），表明不同方法去除干擾PCR抑制劑的能力不同?？傮w上，4 種商業(yè)試劑盒法提取DNA的PCR擴增成功率均大于80%，高于改良CTAB法（75.2%）和SDSCTAB法（77.2%）。TIANGEN-I試劑盒法和QIAGEN試劑盒法提取的DNA擴增成功率最高為100%，但QIAGEN試劑盒法提取的2號（草果）、11號（肉桂）和14號（花椒）樣品DNA只能觀察到微弱的電泳條帶，這表明QIAGEN試劑盒法所提DNA中仍存在少量PCR抑制劑。食用香辛料種類不同導致PCR擴增結果產生差異。3號（豆蔻）、7號（孜然）、8號（小茴香）、9號（芫荽子）和18號（甘草）樣品利用6 種方法所提DNA的PCR擴增產物均具有明亮、單一的電泳條帶，表明樣品DNA擴增效率高。而TIANGEN-I試劑盒法、TIANGEN-II試劑盒法、改良CTAB法和SDS-CTAB法所提12號（月桂葉）樣品的DNA質量濃度及純度高，但只能觀察到微弱的電泳條帶，表明研究所用引物在月桂葉DNA中擴增效率低。對于11號（肉桂）樣品，PCR擴增產物電泳條帶弱，這是由于DNA質量濃度低導致的。

圖3 6 種方法提取的19 種食用香辛料DNA PCR擴增產物電泳圖Fig. 3 Electrophoresis of PCR products of DNA from 19 edible spices extracted by six methods

在實際工作中，選擇一種快速、準確的DNA提取方法對食用香辛料的檢測具有重要意義。SDS-CTAB法和改良CTAB法耗時長，分別需要14 h和10 h，且PCR擴增成功率最低。4 種試劑盒法均用時較短（≤2 h），其中TIANGEN-I和QIAGEN試劑盒法的PCR擴增成功率最高，但QIAGEN試劑盒法所提DNA的質量濃度最低，并存在一定的PCR抑制劑。因此，經過綜合比較，本研究推薦使用TIANGEN-I試劑盒法作為食用香辛料中基因組DNA提取的優(yōu)選方法。

2.5 市售香辛料粉中提取DNA的質量濃度及質量分析

使用DNA提取效果最好的TIANGEN-I試劑盒對7 份常見的市售食用香辛料粉進行DNA提取，并根據(jù)DNA質量濃度、純度及PCR擴增效率評估該方法對香辛料粉的適用性。為使結果更加直觀，將質量濃度換算為20 mg香辛料粉所提DNA的質量濃度進行比較。

表3TIANGEN-I試劑盒法提取市售香辛料粉DNA的質量濃度和純度Table 3 DNA concentrations and purity from commercial spice powder extracted by TIANGEN plant genomic DNA kit

結果表明，所有樣品DNA質量濃度在3.36～139.20 ng/μL之間（表3），其中，S-1（孜然粉）、S-2（肉桂粉）、S-3（花椒粉）、S-4（八角粉）和S-5（白胡椒粉）的DNA質量濃度顯著高于完整的食用香辛料所提DNA的質量濃度（P＜0.05），這是因為粉狀食用香辛料細胞壁破碎更加完全。因此，在食用香辛料DNA提取過程中充分研磨可以提高DNA提取的效率。與片狀肉桂（11）類似，因肉桂粉（S-2）中蛋白質、多糖和多酚物質的存在會抑制DNA提取，導致其DNA質量濃度較低（3.36 ng/μL）。市售香辛料粉DNA的A260nm/A280nm比值在1.18～1.80之間，與其對應的完整食用香辛料所提DNA的A260nm/A280nm比值無統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。同樣，粉狀食用香辛料細胞壁破碎完全，細胞中的碳水化合物釋放出來，使其在DNA裂解和純化過程中被充分去除。研究利用PCR擴增成功率判斷該方法所提DNA中抑制劑去除情況，以評估是否適用于后續(xù)研究。S-1（孜然粉）、S-3（花椒粉）、S-4（八角粉）、S-5（白胡椒粉）、S-6（辣椒粉）和S-7（辣椒粉）的PCR產物條帶明亮（圖4），證明DNA質量良好，適合后續(xù)的研究。當使用30 mg肉桂粉，裂解時間為60 min時，所得DNA質量濃度為5.07 ng/μL，但PCR擴增后顯示無電泳條帶。將樣品量增加至50 mg，裂解時間延長至120 min后，提取到的DNA質量濃度提高至（13.20±0.19）ng/μL，且PCR擴增成功（圖4）。因此，在提取皮類或者堅硬的食用香辛料時需要適當增加樣品量，延長DNA裂解時間。

圖4 市售食用香辛料粉PCR擴增結果Fig. 4 Electrophoresis of PCR amplification products of DNA from commercial spice powder

綜上所述，利用TIANGEN-I試劑盒可以成功提取7 份常見的市售食用香辛料粉中的基因組DNA。其中，對于皮類食用香辛料，如肉桂粉樣品（S-2），可以通過增加樣本量和延長裂解時間，以提取得到符合實驗要求的基因組DNA。

3 結 論

食用香辛料中因含有多糖、多酚和色素等化合物，導致DNA提取相對困難。本研究通過DNA的完整性、DNA純度和PCR擴增成功率，比較4 種商業(yè)DNA提取試劑盒、改良CTAB法和SDS-CTAB法用于食用香辛料的DNA提取。結果表明，QIAGEN試劑盒法能夠去除大部分PCR抑制劑，但提取的DNA質量濃度較低且質量較差；改良CTAB法和SDS-CTAB法提取的食用香辛料DNA質量濃度高，但由于采用異丙醇和高質量濃度鹽沉淀DNA，會導致PCR抑制劑及其他有機化合物與DNA同時沉淀，影響PCR擴增，從而造成PCR擴增成功率低；TIANGEN-I試劑盒法去除次生代謝物和PCR抑制劑的能力最強，對塊狀、片狀、顆粒狀和粉狀香辛料均能提取得到質量濃度及純度良好的DNA，且所得DNA的PCR擴增成功率高，適合含多糖、多酚以及其他次生代謝物含量較高的食用香辛料DNA提取。

此外，由于食用香辛料種類不同，其細胞破壞難易程度及組織中存在的物質不同，需要根據(jù)實際情況對DNA提取步驟進行優(yōu)化。對于根莖類、皮類等堅硬的食用香辛料，由于細胞破壞困難導致其DNA質量濃度低，因此在DNA提取時需要研磨充分，適當增加樣品量、裂解液以及延長裂解時間，以得到較好的DNA提取效果。