周洋，楊得坡,2，錢純果，何翠淇，鐘鏡堂，徐新軍,2，趙志敏,2*

1(中山大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州，510006)2(廣東省現(xiàn)代中藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心，廣東 廣州，510006)3(廣東呀依山珍稀藥材種植有限公司，廣東 河源，517428)

砂仁為姜科植物陽(yáng)春砂(AmomumvillosumLour.)、綠殼砂(AmomumvillosumLour.varxanthioidesT.L.Wu et Senjen)或海南砂(AmomumlongiligularT.L.Wu)的干燥成熟果實(shí)。藥理學(xué)研究證實(shí)，砂仁具有多種生物學(xué)活性，如：抗炎、抑菌、調(diào)節(jié)菌群、降血糖和抗氧化等[1]。其中陽(yáng)春砂仁是砂仁的主要來源，為藥食同源藥材，需求量大。陽(yáng)春砂為多年生草本植物，需每周期更新種植，以提升砂仁產(chǎn)量和品質(zhì)，因此產(chǎn)生大量的陽(yáng)春砂植株，這些植株大多被隨意丟棄或焚燒，對(duì)環(huán)境造成一定污染。造成這種現(xiàn)象的原因是目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于陽(yáng)春砂的研究多集中于種子團(tuán)及其中的揮發(fā)油，對(duì)其他部位和其他成分的研究較少，陽(yáng)春砂未能得到充分開發(fā)利用。尤小梅等[2]比較了陽(yáng)春砂仁根和葉水提物的抗氧化活性，水提物對(duì)羥自由基清除率最高可達(dá)100%，活性大小依次為：根>葉>茶多酚。多糖是水提物中的一類重要物質(zhì)，關(guān)于陽(yáng)春砂根莖多糖(Amomumvillosrmrhizome polysaccharide，AVRP)的研究未見報(bào)道。

多糖是由10個(gè)以上單糖通過糖苷鍵連接而成的聚合物，具有廣泛的生物活性，如：抗氧化[3]、免疫調(diào)節(jié)[4]、抗腫瘤[5]和降血糖活性[6]等。天然多糖因具有良好的生物活性和無毒性、良好的生物降解性和生物相容性等特點(diǎn)，成為目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。關(guān)于陽(yáng)春砂多糖的研究較少，且多聚焦于陽(yáng)春砂仁粗多糖的提取方法和生物活性[7-9]，關(guān)于陽(yáng)春砂除果實(shí)外其他部位多糖的研究未見報(bào)道。

本研究通過對(duì)AVRP進(jìn)行分離純化、結(jié)構(gòu)特征及抗氧化活性的研究，旨在為充分利用陽(yáng)春砂打下基礎(chǔ)，為AVRP的開發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)材料：新鮮陽(yáng)春砂根莖(經(jīng)鑒定為陽(yáng)春砂)，廣州市從化區(qū)藥材基地；

實(shí)驗(yàn)試劑：?jiǎn)翁菢?biāo)準(zhǔn)品和三氟乙酸，美國(guó)Sigma-Aldrich公司；DEAE-52和Sephadex G-100填料，索萊寶公司；濃硫酸，廣州市梓興化玻儀器有限公司；氫氧化鈉，廣州化學(xué)試劑廠；苯酚，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

EYELA N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本東京理化器械株式會(huì)社；T6紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；Spectrum Two傅里葉變換紅外(Fourier transform infrared,FT-IR)光譜儀，美國(guó)Perkin-Elmer公司；SHIMADZU LC-20A高效液相色譜儀(配ELSD-LT 2蒸發(fā)光檢測(cè)器)，日本島津公司；FLUOstar Omega全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀，德國(guó)BMG Labtech公司。

1.3 AVRP的提取

稱取200 g粉碎后的陽(yáng)春砂根莖粉末，加入4 L 95%(體積分?jǐn)?shù))乙醇，80 ℃回流提取3 h，重復(fù)操作3次，將粉末烘干，得陽(yáng)春砂根莖脫脂粉末。200 g陽(yáng)春砂根莖脫脂粉末加4 L水，95 ℃提取3 h，重復(fù)3次，將水提液于60 ℃下減壓濃縮，得濃縮液。向濃縮液中加入4倍體積的無水乙醇，于4 ℃靜置12 h，離心收集沉淀。將沉淀復(fù)溶于去離子水中，得多糖溶液，向溶液中加入4倍體積的Sevage試劑(氯仿-正丁醇體積比4∶1)，劇烈振蕩后離心，取上清液，重復(fù)操作，直至溶液中無變性蛋白質(zhì)，凍干后得AVRP。

1.4 AVRP的分離純化

稱取AVRP 100 mg，配制成質(zhì)量濃度為20 mg/mL的溶液，經(jīng)DEAE-52纖維素離子交換柱分離，依次用濃度為0、0.1、0.3、0.5、1.0 mol/L NaCl溶液進(jìn)行洗脫，洗脫流速為1 mL/min，10 min/管，使用全自動(dòng)餾分收集器收集，苯酚-硫酸法進(jìn)行監(jiān)測(cè)，得到0和0.1 mol/L NaCl洗脫下的2個(gè)組分，收集含量更多的0.1 mol/L NaCl溶液洗脫下來的組分，60 ℃減壓濃縮，用截留分子質(zhì)量為3 500 Da的透析袋透析，冷凍干燥得AVRPD-1。

取AVRPD-1粉末20 mg，配制成5 mg/mL的溶液，經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex G-100柱分離，去離子水洗脫，洗脫流速為3 mL/10 min，洗脫時(shí)間為10 min/管，使用全自動(dòng)餾分收集器收集，苯酚-硫酸法測(cè)多糖含量，合并同一組份，經(jīng)濃縮、冷凍干燥后得到AVRP-1。

1.5 AVRP-1的組分測(cè)定

1.5.1 總糖含量測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[10]測(cè)定AVRP-1的總糖含量，葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。精確稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品25.0 mg，定容至500 mL，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。分別取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mL，加去離子水補(bǔ)足至1.0 mL，即得不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入0.5 mL 60 g/L的苯酚溶液，混勻后緩慢滴加2.5 mL濃硫酸，室溫下靜置30 min，于490 nm處檢測(cè)吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。配制質(zhì)量濃度為0.04 mg/mL的AVRP-1溶液，測(cè)定方法同上，重復(fù)3次，根據(jù)回歸方程求得總糖含量。

1.5.2 蛋白質(zhì)含量測(cè)定

蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用Bradford法[11]，牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)為標(biāo)準(zhǔn)品。精確稱取50.3 mg考馬斯亮藍(lán)G250，溶于25 mL 90%(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶液中，加入85%(體積分?jǐn)?shù))磷酸溶液55 mL，定容至500 mL，濾紙過濾后存于棕色試劑瓶中，得考馬斯亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確稱量10.0 mg BSA溶于100 mL容量瓶中，去離子水定容，得BSA標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取0.01、0.02、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 mL BSA標(biāo)準(zhǔn)溶液于試管中，以去離子水補(bǔ)足至1.0 mL，分別加入考馬斯亮藍(lán)溶液1.0 mL，充分混勻，于595 nm處測(cè)定其吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，BSA濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。配制質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL的AVRP-1溶液，測(cè)定方法同上，重復(fù)3次，根據(jù)回歸方程求得蛋白質(zhì)含量。

1.5.3 糖醛酸含量測(cè)定

糖醛酸含量測(cè)定采用m-間羥基聯(lián)苯法[12]，半乳糖醛酸(galacturonic acid，GalA)為標(biāo)準(zhǔn)品。精確稱取1.191 8 g四硼酸鈉，濃硫酸定容至250 mL，得0.012 5 mol/L四硼酸鈉溶液；精確稱取10.0 mg GalA，去離子水定容至100 mL，得0.1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)GalA溶液；精確稱取75.0 mg間羥基聯(lián)苯，用質(zhì)量濃度5 g/L NaOH溶液定容至50 mL，得1.5 mg/mL間羥基聯(lián)苯溶液。分別取標(biāo)準(zhǔn)GalA溶液0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL于試管中，加去離子水補(bǔ)足至1.0 mL，冰浴中冷卻數(shù)分鐘后，每個(gè)試管中加入四硼酸鈉溶液6.0 mL，輕輕振搖，沸水浴中加熱5 min后立即放入冰水浴中冷卻到室溫，加入1.0 mL間羥基聯(lián)苯，振搖混勻后于520 nm處測(cè)吸光度。以吸光度值為縱坐標(biāo)，GalA濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程。配制質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的AVRP-1溶液，測(cè)定方法同上，重復(fù)3次，根據(jù)回歸方程求得糖醛酸含量。

1.6 AVRP-1純度鑒定及相對(duì)分子質(zhì)量(Mw)測(cè)定

利用高效凝膠滲透色譜法(high-performance gel permeation chromatography，HPGPC)測(cè)定樣品純度及Mw。取已知Mw的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品(5、12、25、50、150、410 kDa)配制成2.0 mg/mL的溶液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后進(jìn)樣，進(jìn)樣量20 μL，洗脫時(shí)間30 min。色譜條件：色譜柱型號(hào)為PolySep-GFC-P4000，流動(dòng)相為水，流速為1.0 mL/min，柱溫35 ℃，檢測(cè)器為ELSD-LT Ⅱ型號(hào)的蒸發(fā)光檢測(cè)器(SHIMADZU)，檢測(cè)器溫度為60 ℃，Gain值為10。以標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖Mw的對(duì)數(shù)lgMw為縱坐標(biāo)，保留時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到回歸方程。取AVRP-1配制成2.0 mg/mL的溶液，相同條件下進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間。根據(jù)樣品峰形鑒定AVRP-1的純度，標(biāo)準(zhǔn)曲線求得Mw。

1.7 AVRP-1單糖組成分析

參照文獻(xiàn)方法[13]，采用HPLC法測(cè)定AVRP-1的單糖組成。

混合標(biāo)準(zhǔn)單糖的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolinone，PMP)衍生化：分別取0.05 mL 2.0 mmol/L單糖標(biāo)準(zhǔn)品：甘露糖(mannose，Man)、鼠李糖(rhamnose，Rha)、葡萄糖醛酸(glucuronic acid，GlcA)、GalA、葡萄糖(glucose，Glc)、半乳糖(galactose，Gal)、木糖(xylose，Xyl)、阿拉伯糖(arabinose，Ara)和巖藻糖(fucose，F(xiàn)uc)溶液于反應(yīng)管中混合，加入0.5 mol/L PMP甲醇溶液和0.3 mol/L NaOH溶液各0.45 mL，混勻后70 ℃反應(yīng)30 min，冷卻后加入0.46 mL 0.3 mol/L的HCl溶液中和，然后加入1.0 mL氯仿溶液，振搖，離心，棄氯仿層，重復(fù)3次去除過量的PMP，水層過0.45 μm濾膜后于HPLC檢測(cè)。HPLC條件：SHIMADZU高效液相色譜儀，Agilent ZORBAX XDB-C18柱，波長(zhǎng)250 nm，進(jìn)樣量20 μL，流速1 mL/min，流動(dòng)相為0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.7，A)-乙腈(B)。洗脫梯度為：0～40 min 16% B等度洗脫；40～41 min 16% B降至14% B；41～54 min 14% B等度洗脫;54～55 min 14% B升至16% B;55～70 min 16% B(均為體積分?jǐn)?shù))等度洗脫。

AVRP-1的衍生化：稱取AVRP-1樣品5.0 mg于耐壓管中，加入3 mol/L TFA溶液2.0 mL，120 ℃水解6 h，冷卻后加入甲醇減壓濃縮至干，重復(fù)3次除去多余的TFA，加入0.8 mL去離子水溶解。取0.1 mL完全水解的AVRP-1于反應(yīng)管中，加入0.5 mol/L PMP甲醇溶液和0.3 mol/L NaOH溶液各0.1 mL，混勻后70 ℃水浴反應(yīng)30 min，冷卻后加入0.105 mL 0.3 mol/L HCl溶液中和，加入0.2 mL去離子水稀釋，然后加入0.6 mL氯仿溶液，振搖，離心，棄氯仿層，重復(fù)3次除去過量的PMP，水層過0.45 μm濾膜后于HPLC檢測(cè)。

1.8 FT-IR分析

取AVRP-1干燥粉末，使用傅里葉紅外光譜儀在4 000～450 cm-1處進(jìn)行測(cè)定。

1.9 AVRP-1抗氧化活性測(cè)定

1.9.1 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參照文獻(xiàn)方法[14]，測(cè)定AVRP-1的DPPH自由基清除活性。吸取50 μL 0.1 mmol/L DPPH乙醇溶液于96孔板中，加入50 μL不同質(zhì)量濃度(1.0～5.0 mg/mL)的AVRP-1溶液，該組設(shè)置為樣品測(cè)定組；以無水乙醇代替DPPH乙醇溶液作樣品對(duì)照組；以去離子水代替AVRP-1溶液作空白對(duì)照組；以維生素C代替AVRP-1溶液作陽(yáng)性對(duì)照組。以上各組混合均勻后，避光反應(yīng)30 min，于517 nm處測(cè)定吸光值。清除率計(jì)算如公式(1)所示：

(1)

式中：A0為空白對(duì)照組吸光度值；A1為樣品測(cè)定組吸光度值；A2為樣品對(duì)照組吸光度值。

1.9.2 羥自由基清除能力測(cè)定

參照文獻(xiàn)方法[14]，測(cè)定AVRP-1的羥自由基清除活性。于96孔板的檢測(cè)孔中依次加入8 μL 18 mmol/L FeSO4溶液，8 μL 18 mmol/L水楊酸溶液，52 μL不同質(zhì)量濃度(1.0～5.0 mg/mL)的AVRP-1溶液，該組設(shè)置為樣品測(cè)定組；檢測(cè)孔中加入8 μL 18 mmol/L水楊酸溶液，60 μL去離子水，該組設(shè)置為空白組；檢測(cè)孔中加入8 μL 18 mmol/L FeSO4溶液，8 μL 18 mmol/L水楊酸溶液，52 μL去離子水，該組設(shè)置為對(duì)照組；檢測(cè)孔中加入8 μL去離子水，8 μL 18 mmol/L水楊酸溶液，52 μL AVRP-1溶液，該組設(shè)置為樣品對(duì)照組；以維生素C代替AVRP-1溶液作為陽(yáng)性對(duì)照組。以上組別均加入32 μL 0.1%(體積分?jǐn)?shù))H2O2啟動(dòng)反應(yīng)，靜置30 min，于510 nm處測(cè)定吸光值。清除率計(jì)算如公式(2)所示：

(2)

式中：A0為空白組吸光度值；A1為對(duì)照組吸光度值；A2為樣品對(duì)照組吸光度值；A3為樣品測(cè)定組吸光度值。

1.10 數(shù)據(jù)分析

采用GraphPad Prism?version 7.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，所有結(jié)果均表示為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)。

2 結(jié)果與分析

2.1 AVRP的分離純化

DEAE-52纖維素柱為陰離子交換柱，使用不同濃度的NaCl溶液作為洗脫液可根據(jù)所帶電荷量強(qiáng)弱程度將樣品分成不同的組分。DEAE-52柱層析洗脫圖如圖1所示。經(jīng)過0、0.1、0.3、0.5、1.0 mol/L NaCl溶液洗脫，得到2個(gè)多糖組分，0和0.1 mol/L NaCl洗脫組分分別命名為AVRPD-0和AVRPD-1，收率分別為5.3%和13.8%。

圖1 AVRP的DEAE-52洗脫曲線Fig.1 Elution curve of AVRP on DEAE-52 cellulose column

凝膠色譜柱是利用分子篩的原理，根據(jù)分子質(zhì)量大小對(duì)樣品進(jìn)行分離，分子質(zhì)量大的樣品先流出色譜柱，分子質(zhì)量小的后流出。選擇含量更高的AVRPD-1進(jìn)一步分離純化。如圖2所示，AVRPD-1經(jīng)Sephadex G-100純化后，得到單峰，命名為AVRP-1，凍干后得白色粉末，收率為54.7%。

圖2 AVRP-1的Sephadex G-100洗脫曲線Fig.2 Elution curve of AVRP-1 on Sephadex G-100 column

2.2 AVRP-1的組分測(cè)定

如表1所示，AVRP-1的總糖含量為90.34%，蛋白質(zhì)含量為0.64%，糖醛酸含量為43.59%，說明經(jīng)過Sevage試劑除蛋白和DEAE-52、Sephadex G-100柱層析進(jìn)行分離純化后，多糖較純。AVRP-1中糖醛酸含量較高，說明AVRP-1是酸性多糖。

表1 AVRP-1的化學(xué)組成Table 1 Chemical composition of AVRP-1 n=3)

2.3 AVRP-1純度鑒定及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定

多糖的理化特性和生物活性常與分子質(zhì)量聯(lián)系起來，如有文獻(xiàn)報(bào)道表明，多糖分子質(zhì)量越大，其免疫調(diào)節(jié)活性或抗腫瘤活性越強(qiáng)[15]，但也有些研究者得出相反的結(jié)論[16]。這一現(xiàn)象說明影響多糖藥效的因素是多方面的，如單糖組成、糖苷鍵類型、三螺旋結(jié)構(gòu)等，分子質(zhì)量是其中的主要因素之一。影響多糖分子質(zhì)量的因素包括產(chǎn)地、采收時(shí)間、提取方法和干燥方法等[17-19]。傳統(tǒng)的熱水提取法會(huì)導(dǎo)致多糖分子在高溫和長(zhǎng)時(shí)間提取環(huán)境下聚合，得到分子質(zhì)量較大的多糖，超聲輔助提取、酶輔助提取等提取方法會(huì)降解多糖，得到分子質(zhì)量較小的多糖[18]。

如圖3所示，AVRP-1只有單一的洗脫峰，且峰型對(duì)稱，可以證明AVRP-1為純化多糖。以葡聚糖對(duì)照品求得Mw標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為y=0.749 4x+10.332，R2=0.997 1，式中y為葡聚糖Mw的對(duì)數(shù)，x為保留時(shí)間。經(jīng)計(jì)算，AVRP-1的Mw為3 372.01 kDa，分子質(zhì)量較大。

圖3 AVRP-1的HPGPC色譜圖Fig.3 HPGPC chromatogram of AVRP-1

2.4 AVRP-1的單糖組成分析

單糖組成在多糖的生物活性和多糖鑒別等方面起著重要的作用?；旌蠁翁菢?biāo)準(zhǔn)品和AVRP-1的HPLC譜圖分別見圖4-A和圖4-B。通過比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)單糖的出峰時(shí)間可以確定單糖種類，根據(jù)各峰面積比確定單糖的摩爾比。AVRP-1由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖這7種單糖組成，摩爾比為4.14∶4.98∶ 5.10∶ 23.77∶ 17.30∶ 28.51∶16.19。

1-Man;2-Rha;3-GlcA;4-GalA;5-Glc;6-Gal;7-Xyl;8-Ara;9-FucA-混合標(biāo)準(zhǔn)單糖；B-AVRP-1圖4 混合標(biāo)準(zhǔn)單糖和AVRP-1的HPLC圖Fig.4 The HPLC spectra of mixed standard monosaccharide and AVRP-1

2.5 FT-IR分析

圖5 AVRP-1的紅外光譜圖Fig.5 The FT-IR spectrum of AVRP-1

2.6 抗氧化能力測(cè)定

AVRP-1和維生素C對(duì)DPPH自由基的清除活性如圖6-A所示，當(dāng)多糖質(zhì)量濃度從1.0增加到5.0 mg/mL時(shí)，清除能力逐漸增強(qiáng)，但隨著多糖質(zhì)量濃度增加，增長(zhǎng)趨勢(shì)逐漸減小。AVRP-1對(duì)DPPH自由基的半數(shù)有效濃度(half-maximal effective concentration，EC50)為4.50 mg/mL。

AVRP-1和維生素C對(duì)羥自由基的清除活性如圖6-B所示，當(dāng)多糖質(zhì)量濃度從1.0增加到5.0 mg/mL時(shí)，清除能力逐漸增強(qiáng)，但隨著多糖質(zhì)量濃度增加，增長(zhǎng)趨勢(shì)逐漸減小，之后趨于平穩(wěn)。AVRP-1對(duì)羥自由基的EC50為2.47 mg/mL。AVRP-1對(duì)羥自由基的清除能力強(qiáng)于對(duì)DPPH自由基的清除能力。

從抗氧化能力測(cè)定結(jié)果來看，AVRP-1的抗氧化能力一般，遠(yuǎn)小于維生素C，對(duì)羥自由基的清除活性大于對(duì)DPPH自由基的清除活性?？寡趸钚詮?qiáng)弱通常是多種因素綜合作用的結(jié)果，影響多糖抗氧化活性的因素包括：糖醛酸含量、硫酸根含量、分子質(zhì)量大小、單糖組成和構(gòu)象等。有大量文獻(xiàn)[25]報(bào)道表明，多糖的抗氧化作用與其供氫能力有關(guān)，糖醛酸基團(tuán)的存在會(huì)激發(fā)多糖中端基碳的氫原子，糖醛酸含量越高，抗氧化能力越強(qiáng)。AVRP-1中糖醛酸含量較高，推測(cè)AVRP-1的抗氧化活性主要來源于糖醛酸。多糖的分子質(zhì)量越小，抗氧化活性越強(qiáng)，可能是由于大分子質(zhì)量多糖穿過細(xì)胞膜的滲透能力弱，且有研究顯示在相同重量基礎(chǔ)上小分子質(zhì)量多糖有更多還原羥基末端與自由基反應(yīng)，因此抗氧化活性提高[26]。比如當(dāng)多糖采用不同提取方法提取后，微波輔助提取法和超聲輔助提取法會(huì)導(dǎo)致多糖降解，分子質(zhì)量減小，抗氧化活性明顯升高[27]。AVRP-1的分子質(zhì)量較大，推測(cè)這是限制AVRP-1發(fā)揮抗氧化活性的主要因素之一。此外，多糖抗氧化活性還受到單糖組成影響。ZHANG等[26]基于Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，DPPH自由基清除活性與Ara和Gal含量相關(guān)(P<0.05)，亞鐵離子還原能力與Gal含量相關(guān)(P<0.05)；基于多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，多糖的金屬螯合能力隨著Xyl和Gal的含量升高而升高。

A-DPPH自由基；B-羥自由基圖6 AVRP-1抗氧化活性Fig.6 Antioxidant activity of AVRP-1

3 結(jié)論

本研究成功從陽(yáng)春砂根莖中分離純化了一種主要的多糖組分AVRP-1，并對(duì)其結(jié)構(gòu)和抗氧化活性進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，AVRP-1的總糖含量為90.34%，蛋白質(zhì)含量為0.64%，糖醛酸含量為43.59%；HPGPC結(jié)果顯示AVRP-1是純化多糖，分子質(zhì)量為3 372.01 kDa；由Man、Rha、GlcA、GalA、Glc、Gal和Ara這7種單糖組成，摩爾比為4.14∶4.98∶5.10∶23.77∶17.30∶28.51∶16.19。AVRP-1具有抗氧化活性，對(duì)DPPH自由基和羥自由基的EC50分別為4.50和2.47 mg/mL。本研究可為AVRP的結(jié)構(gòu)及其活性研究提供技術(shù)支持，為進(jìn)一步開發(fā)利用陽(yáng)春砂提供理論依據(jù)。