夏佳慧，張 靜，姚 紅

（上海市虹口區(qū)疾病預(yù)防控制中心 上海 200082）

諾如病毒為脊椎動物病毒嵌環(huán)樣病毒科的一個屬——諾如病毒屬。諾如病毒的基因組為單股正鏈RNA,致病力極強，感染劑量低，10～100個病毒顆粒即可導(dǎo)致發(fā)病[1]。諾如病毒屬病毒引起急性胃腸道感染，具有發(fā)病急、傳播速度快、涉及范圍廣的特點。人群普遍易感，學(xué)齡前兒童、中青年、老年人等各年齡組均可發(fā)病[2-3]。2020年12月虹口區(qū)某養(yǎng)老機構(gòu)發(fā)生多名老年人員發(fā)生嘔吐、腹瀉等急性胃腸炎癥狀。疾控人員趕赴養(yǎng)老機構(gòu)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和處置工作，并采集人員肛拭樣本及可疑環(huán)境污染樣本送往疾控中心實驗室進(jìn)行實時熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測病毒核酸。

1.資料與方法

1.1. 一般資料

選取2020年12月虹口區(qū)某養(yǎng)老機構(gòu)人員肛拭樣本92份；可疑環(huán)境污染樣本14份。

1.2 方法

1.2.1試劑與儀器 試劑：諾如病毒Ⅰ型/Ⅱ型核酸檢測試劑盒購自上海伯杰醫(yī)療科技有限公司；RNA核酸提取試劑盒為Roche MagNA Pure LC 2.0核酸提取儀配套商品化試劑盒；核酸提取儀器：Roche MagNA Pure LC 2.0；PCR擴展儀：宏石SLAN-96P。

1.2.2檢測依據(jù) 諾如病毒《感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)》WS271-2007。

1.2.3樣本預(yù)處理 顛倒混勻并取500μL樣本于1.5 mL離心管中，8 000 rpm/min 10 min離心，取上清液備用。

1.2.4樣本總RNA提取 將準(zhǔn)備好的上清液置于RNA抽提儀器中進(jìn)行總RNA提取。

1.2.5 RT-PCR檢測 取qRT—PCR反應(yīng)液12μL、qRT—PCR酶混合液4μL、引物探針NVGI/NVGII 4μL,配制成20μL反應(yīng)體系。加入已抽提的RNA 5μL，終體積為25μL。擴增程序為：逆轉(zhuǎn)錄50℃、10 min；預(yù)變性95℃ 5 min；95℃ 10 sec，55℃ 40 sec，循環(huán)末端采集熒光信號，40個循環(huán)。

1.3 評價指標(biāo)

陰性Ct值＞38或未檢出；陽性擴增曲線呈S型且Ct值≤35。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用頻數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 環(huán)境樣本結(jié)果

檢測環(huán)境樣本共14份，諾如病毒核酸均為陰性。

2.2 人員肛拭樣本結(jié)果

檢測人員肛拭樣本共92份，陽性樣本數(shù)59份，陽性率64.13%，均為諾如病毒GⅡ型。

2.3 養(yǎng)老機構(gòu)工作人員樣本情況

共計34份，年齡覆蓋37～67歲，陽性樣本數(shù)15份，陽性率44.12%。老年人群樣本共計58份樣本，年齡71～99歲，陽性樣本數(shù)44份，陽性率75.86%。兩種人群諾如病毒檢測陽性率比較差異顯著（χ2=9.38，P＜0.01），見表1。

表1 養(yǎng)老機構(gòu)工作人員與老年人群諾如病毒檢測陽性率比較

2.4 不同年齡分組進(jìn)行檢測陽性率比較

不同年齡分組進(jìn)行檢測陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同年齡組諾如病毒檢測陽性率比較（例）

2.5 不同性別諾如病毒檢測陽性率比較

肛拭92份樣本中男性陽性8例、陽性率40.00%；女性樣本陽性51例，陽性率70.83%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同性別諾如病毒檢測陽性率比較

2.6 對養(yǎng)老機構(gòu)工作人員陽性患者進(jìn)行跟蹤檢測，病程7 d時，檢測陽性人數(shù)由原來的15人下降到5人，7 d持續(xù)陽性率33.33%；病程18 d時，陽性人數(shù)降至為0，18 d持續(xù)陽性率0%。對工作人員就不同年齡組在各病程時期檢測陽性率進(jìn)行統(tǒng)計，見圖1。

圖1 工作人員各年齡組跟蹤檢測統(tǒng)計

2.7 對老年人群陽性患者進(jìn)行跟蹤檢測，病程14 d時，檢測陽性人數(shù)由原來的44人下降至22人，14 d持續(xù)陽性率50.00%；病程28 d時，陽性人數(shù)降至為9人，28 d持續(xù)陽性率20.45%；病程＞40 d時，陽性人數(shù)1人，＞40 d持續(xù)陽性率2.27%。對老年人群就不同年齡組在各病程時期檢測陽性率進(jìn)行統(tǒng)計，見圖2。

圖2 老年人群各年齡組跟蹤檢測統(tǒng)計

3.討論

此次事件中環(huán)境樣本諾如病毒RT-PCR檢測均為陰性，但是人員之間傳播范圍較廣，推斷這是一起由生活密切接觸傳播而引起的一起諾如病毒聚集性疫情。

根據(jù)樣本檢測結(jié)果反饋，男女不同性別對病毒感染存在統(tǒng)計學(xué)差異，考慮到養(yǎng)老機構(gòu)中男、女老年人群數(shù)量相差較大，機構(gòu)中工作人員尤其是護(hù)理人員絕大多數(shù)是女性，因此可能會引起在統(tǒng)計數(shù)據(jù)上的一定偏差。

通過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)養(yǎng)老機構(gòu)中工作人員與老年人群在病毒檢測陽性率上存在顯著差異。因為都是在一定活動范圍內(nèi)的密切接觸人群所以推導(dǎo)導(dǎo)致這一差異的原因可能是年齡差異問題。隨即劃分不同年齡組進(jìn)行統(tǒng)計，確定具有統(tǒng)計學(xué)意義。70歲以上老年人群感染病毒人數(shù)明顯增加。

對工作人員和老年人群劃分不同年齡組對其病程長短進(jìn)行跟蹤檢測觀察其病毒消除時間。年齡在37～67歲的工作人員從發(fā)病到病程7 d，病毒檢測陽性率由原來的44.12%下降到病程7 d持續(xù)陽性率33.33%，病程18 d時檢測陽性率為0。其中30～40歲、41～50歲組在病程7 d時病毒檢測陽性率已為0。51～60歲組和61～67歲組對應(yīng)病程7 d持續(xù)陽性率14.29%和33.33%。病程18 d時，4組不同年齡組均為檢測陽性率0。

71～99歲的老年人群在從發(fā)病到病程14 d，病毒檢測陽性率由原來的75.86%下降到病程14 d持續(xù)陽性率50.00%，病程28持續(xù)陽性率為20.45%，病程＞40 d持續(xù)陽性率為2.27%。分別觀察老年人群不同年齡組在病毒消除時間上的差異，發(fā)現(xiàn)70歲以上年齡組較其他年齡組病程時間長，病毒消除時間長。超過14 d病程的患者占相當(dāng)大的比例。還有1例患者病程時間逾40 d仍可檢出病毒陽性。

綜上所述，老年人群因為機體自身免疫力下降，抵抗能力衰退更易被病毒感染而且病程時間較長，病毒消除時間較長。諾如病毒一旦感染在機體免疫力低下的情況下產(chǎn)生一系列嘔吐、腹瀉癥狀，有一定基礎(chǔ)疾病的老年人群中感染率高，并偶爾發(fā)展為重癥，甚至危及生命，極大損害身體健康[4]。隨著老齡化社會的到來，養(yǎng)老機構(gòu)隊伍日益龐大，隨之而來的就是應(yīng)加大對機構(gòu)環(huán)境衛(wèi)生、護(hù)理人員健康意識、消毒知識的宣教和監(jiān)督[5]。針對不同年齡層次人群感染前及感染后的防控可采用不同措施，除通用性措施如飯前便后用肥皂和清水洗手、生吃的水果蔬菜食用前洗凈、食物煮熟等以外，以老年人群為主的養(yǎng)老機構(gòu)當(dāng)出現(xiàn)群體感染時應(yīng)盡可能隔離治療、患病期至康復(fù)后3 d內(nèi)不要為他人準(zhǔn)備食物或照料他人、盡量減少去人員密集場所活動；患病人員的衣物需進(jìn)行必要的消毒處理。本文以期通過本次諾如病毒感染情況分析能夠?qū)︷B(yǎng)老機構(gòu)在疾病防控意識上提高警惕并為防控提供有益探索。