王 林，段雯婷，樊清清，王 維

陜西省西安市第一醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.心血管內(nèi)科；3.藥劑科，陜西西安 710002；4.陜西省西安市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710003

B族鏈球菌(GBS)，又稱無乳鏈球菌，是一種常見的革蘭陽性球菌，在直腸和陰道中正常寄居，屬條件致病菌，一般健康人群感染GBS并不致病[1-2]。GBS是導(dǎo)致圍生期孕婦和新生兒普遍感染的致病菌，除可引起孕婦產(chǎn)褥感染、胎膜早破、胎兒早產(chǎn)、流產(chǎn)外，孕婦在分娩中也可能將此菌傳遞給新生兒，導(dǎo)致新生兒肺炎、腦膜炎、敗血癥，甚至死亡[3-4]。因此，早期篩查GBS并有針對性地運(yùn)用抗菌藥物對圍生期孕婦和新生兒至關(guān)重要[5]。本研究選取2018年1月至2020年8月于西安市第一醫(yī)院就診的874例圍生期孕婦作為研究對象，對GBS感染的菌株篩查方法、血清型、耐藥性及孕婦臨床結(jié)局進(jìn)行分析，為更準(zhǔn)確、快速鑒定GBS及合理運(yùn)用抗菌藥物提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取西安市第一醫(yī)院2018年1月至2020年8月產(chǎn)科門診及住院收治的35～37周孕婦874例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有孕婦1周內(nèi)未使用抗菌藥物[6]；患者及其家屬對本研究均知情同意。孕婦年齡22～41歲，平均(26.9±2.2)歲。用無菌拭子于生殖道低位1/3處，沿陰道壁輕輕旋轉(zhuǎn)取孕婦生殖道拭子標(biāo)本，于肛門括約肌以上2～5 cm處沿腸壁輕輕旋轉(zhuǎn)取直腸拭子標(biāo)本，得到標(biāo)本后立即送檢。

1.2儀器與試劑 實(shí)驗(yàn)儀器包括抗州安杰思科技有限公司AFD9600熒光定量PCR儀，德國布魯克MALDI-TOF基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，法國梅里埃VITEK2-Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀，CO2培養(yǎng)箱。試劑材料包括GBS PCR檢測試劑盒[博爾誠(北京)科技有限公司]，GBS篩查培養(yǎng)基(鄭州安圖生物工程股份有限公司)，GBS血清分型試劑(丹麥國立血清研究所)，VITEK2 配套藥敏卡GP67[最低抑菌濃度(MIC)法，法國梅里埃公司]。

1.3方法

1.3.1GBS鑒定 (1)顯色培養(yǎng)加鑒定法。將生殖道和直腸分泌物標(biāo)本分別接種于GBS顯色平板，并分區(qū)畫線，35 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，挑取淺粉色至紅色可疑菌落采用MALDI-TOF基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀及VITEK2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀進(jìn)行分析鑒定。如果24 h未見典型菌落，可延長培養(yǎng)時(shí)間至48 h。(2)熒光定量PCR法。用生理鹽水將生殖道和直腸分泌物標(biāo)本洗脫混勻，根據(jù)試劑盒說明書提取細(xì)菌DNA，制作PCR檢測模板。

1.3.2血清型鑒定 采用乳膠凝集法，按照試劑說明書對 GBS菌株進(jìn)行血清型鑒定，30 s內(nèi)記錄結(jié)果。

1.3.3藥敏試驗(yàn) 將陽性菌落稀釋至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，采用上機(jī)MIC法，經(jīng)VITEK2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀對青霉素、左氧氟沙星、替加環(huán)素、頭孢曲松、四環(huán)素、氨芐西林、萬古霉素、紅霉素、利奈唑胺、克林霉素、頭孢吡肟進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1顯色培養(yǎng)加鑒定法和熒光定量PCR法陽性檢出率比較 顯色培養(yǎng)加鑒定法耗時(shí)24 h，陽性檢出率為6.41%(56/874)；熒光定量PCR法耗時(shí)4 h，陽性檢出率為8.92%(78/874)。兩者陽性檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.048)。

2.2孕婦臨床結(jié)局分析 874例孕婦中有33例發(fā)生胎兒窘迫、孕婦敗血癥、新生兒敗血癥、早產(chǎn)、胎膜早破等異常情況，其中28例經(jīng)熒光定量PCR法檢測GBS為陽性,19例經(jīng)顯色培養(yǎng)法檢測GBS為陽性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014)。

2.3孕婦定植GBS菌株的血清型分布 78株孕婦定植的GBS共檢出4種血清型，分別為Ⅲ型(40株，51.28%)、Ⅰb型(16株，20.51%)、Ⅰa型 (13株，16.67%)、Ⅴ型(9株，11.54%)。

2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果 33株陽性分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，GBS對萬古霉素、利奈唑胺、替加環(huán)素、頭孢吡肟、頭孢曲松、氨芐西林、青霉素、四環(huán)素敏感性較高，對克林霉素、左氧氟沙星、紅霉素敏感性較低。見表1。

表1 GBS陽性分離株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果(%)

2.5GBS耐藥性與血清型的相關(guān)性 克林霉素、左氧氟沙星耐藥性與血清型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，血清型Ⅲ、Ⅰb、Ⅴ型耐藥性較高。見表2。

表2 GBS耐藥性與血清分型的相關(guān)性

3 討 論

GBS寄生于健康人下消化道與泌尿生殖道中，為條件致病菌，現(xiàn)已證實(shí)GBS是造成圍生期母嬰感染的主要致病菌之一[7-8]。美國疾病預(yù)防控制中心(CDC)制定的圍生期GBS防治指南指出，在妊娠末期進(jìn)行GBS篩查，對陽性患者采取積極預(yù)防和治療措施可有效降低GBS感染[9-10]。

GBS篩查方式包括顯色培養(yǎng)法、熒光定量PCR法、免疫法等。顯色培養(yǎng)法是診斷GBS的常規(guī)方法，但需24～48 h，耗時(shí)較長，同時(shí)易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。GBS篩查培養(yǎng)基加入了顯色底物，經(jīng)24 h培養(yǎng)，若長出淺粉色至紅色菌落，說明有GBS生長，容易辨別。熒光定量PCR法檢測GBS靈敏度高，特異度強(qiáng)，重復(fù)性好，耗時(shí)短，操作方便，但對實(shí)驗(yàn)人員和設(shè)備要求較高。本研究對874例35～37周孕婦直腸-生殖道拭子標(biāo)本分別應(yīng)用GBS顯色培養(yǎng)加鑒定法(MALDI-TOF基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀及VITEK2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀)和熒光定量PCR法檢測GBS。結(jié)果顯示，顯色培養(yǎng)加鑒定法耗時(shí)24 h，陽性檢出率為6.41%，而熒光定量PCR法僅耗時(shí)4 h，陽性檢出率為8.92%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，熒光定量PCR法優(yōu)勢明顯,此結(jié)果與國內(nèi)其他研究結(jié)果一致[11-12]。對此次接受檢查的孕婦進(jìn)行追蹤統(tǒng)計(jì)顯示，33例發(fā)生異常情況的孕婦，28例經(jīng)熒光定量PCR法檢測GBS為陽性，19例經(jīng)顯色培養(yǎng)加鑒定法檢測GBS為陽性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明熒光定量PCR法GBS檢出陽性符合率高于顯色培養(yǎng)及鑒定法。

本研究結(jié)果顯示，孕婦所定植的GBS共檢出4種血清型，分別為Ⅲ型(51.5%)、Ⅰb型(21.2%)、Ⅰa型 (15.2%)、Ⅴ型(12.12%)，比例與其他文獻(xiàn)報(bào)道的GBS血清分型有差異[13]，提示GBS分布存在地域差異。針對GBS感染的孕婦，臨床上多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)使用青霉素、氨芐西林等進(jìn)行預(yù)防治療，對青霉素過敏的患者，則使用克林霉素、紅霉素治療。近年來隨著抗菌藥物的大量使用，耐藥株逐漸增多[14-15]。本研究藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，GBS對萬古霉素、利奈唑胺、替加環(huán)素、頭孢吡肟、頭孢曲松、氨芐西林、青霉素、四環(huán)素敏感性較高，分別為100.00%、100.00%、100.00%、100.00%、100.00%、100.00%、100.00%、82.05%，對克林霉素、左氧氟沙星、紅霉素敏感性較低，分別為50.00%、50.00%、0.00%，此結(jié)果與其他地區(qū)GBS藥敏結(jié)果報(bào)道略有不同[16-17]，提示感染的GBS菌株在不同地區(qū)存在差異性。因此，對于圍生期孕婦GBS感染者，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果及時(shí)調(diào)整治療方案，以提高治愈率。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，GBS耐藥性與其血清分型、含有耐藥基因等因素密切相關(guān)[18]，本研究結(jié)果顯示，Ⅲ、Ⅰb、Ⅴ型3種血清型耐藥性較廣泛，與Ⅰa型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，可能是GBS產(chǎn)生耐藥性的主要原因。

綜上所述，圍生期孕婦感染GBS的風(fēng)險(xiǎn)較高，臨床應(yīng)重視圍生期孕婦GBS篩查，本研究樣本量有限，不同地區(qū)GBS的血清型、耐藥性均可能存在差異，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身情況選擇最優(yōu)的檢測方法。臨床應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果合理選用抗菌藥物，以提高治療的安全性和有效性，改善孕婦妊娠結(jié)局。