余澍 何亞芬

食品添加劑在食品加工生產(chǎn)中發(fā)揮著一定的作用，為了維護消費者權(quán)益，規(guī)范食品加工市場，需要運用液相色譜法對食品添加劑進行檢測，如何提高該方法的檢測準(zhǔn)確性也就成為行業(yè)重點關(guān)注的問題?；诖?，本文簡單闡述了食品添加劑檢測中液相色譜法的應(yīng)用，并從檢驗前、檢驗中、檢驗后三個方面提出了提高液相色譜法檢測食品添加劑準(zhǔn)確性的有效策略。

一、食品添加劑檢測中液相色譜法的應(yīng)用

1.食品防腐劑檢測。為了延長食物的保質(zhì)期，食品加工廠可能會添加食品防腐劑，而食品防腐劑的主要成分是化學(xué)合成酯類，如果食品防腐劑食用超量，會抑制骨骼生長，并且危害人體肝臟、腎臟健康，因此加強食品防腐劑的檢驗工作非常重要，而液相色譜法作為檢驗食品防腐劑成熟手段之一，檢測便捷且限度較低。

2.食品甜味劑檢測。食品甜味劑包括合成甜味劑與天然甜味劑，由于天然甜味劑成本較高，因此在食品加工過程中通常選用化學(xué)合成甜味劑，而化學(xué)合成甜味劑食用超量會影響智力發(fā)育，破壞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，引起腹瀉、腹脹，甚至?xí)T發(fā)各類癌癥。運用液相色譜法可以檢測出多種合成甜味劑及其劑量，而且可以多次驗證測驗結(jié)果，因此在食品甜味劑檢測中的應(yīng)用較為廣泛。

3.食品合成色素檢測。色素可以調(diào)節(jié)食品的顏色，激發(fā)人們的食欲，在食品加工產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用較為普遍?；瘜W(xué)合成色素的著色效果好、成本低，但毒性較大，若食品中添加過量的化學(xué)合成色素，將嚴(yán)重?fù)p害人體機能，而液相色譜法在食品合成色素檢測中占據(jù)著非常重要的地位。

二、提高液相色譜法檢測食品添加劑準(zhǔn)確性的有效策略

液相色譜作為各類食品添加劑檢測的首選方法，為了維持市場秩序、維護消費者的合法權(quán)益，需要進一步提高液相色譜法檢測的精準(zhǔn)性。

1.加強檢驗前的準(zhǔn)備。（1）過濾脫氣流動相。運用液相色譜法開展食品添加劑檢測工作之前，應(yīng)對流動相進行過濾脫氣處理，因為流動相中通常存在不同直徑標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)小顆粒，但色譜柱內(nèi)腔極小，若細(xì)小顆粒直徑超出色譜柱內(nèi)腔直徑，則會導(dǎo)致細(xì)小顆粒堵塞色譜柱。在檢測前需將流動相中直徑大于0.45μm的顆粒進行過濾，并對流動相進行脫氣處理，防止液相色譜系統(tǒng)氣泡溢出而對輸送泵的工作造成阻礙。除此之外，同樣需要過濾樣品溶液，去除直徑大于0.45μm的顆粒，防止其堵塞色譜柱、毛細(xì)管，并清除全部雜質(zhì)顆粒。過濾微小顆粒后，應(yīng)檢查HPLC檢測儀的性能，確保儀器的穩(wěn)定性及靈敏度，為檢測工作順利推進奠定基礎(chǔ)。在過濾脫氣過程中存在低沸點溶劑，運用煮沸法、抽氣法進行處理時，應(yīng)注意各類溶劑揮發(fā)時引發(fā)的混合變化。處理溶劑樣品時通常采用超聲脫氣手段，可以規(guī)避溶劑揮發(fā)混合的問題，但需要嚴(yán)格控制超聲脫氣處理時間，需在30min左右完成超聲脫氣過程，在此過程中溶劑瓶不可碰觸超聲槽側(cè)壁及底部，避免樣品溶劑瓶在脫氣過程中破碎損壞。

（2）檢查并調(diào)整柱壓。在液相色譜法檢測之前，應(yīng)檢查HPLC檢測器的柱壓狀態(tài)，防止在檢測過程中出現(xiàn)異常情況，導(dǎo)致食品添加劑檢測結(jié)果不精準(zhǔn)。結(jié)合以往食品添加劑檢測的經(jīng)驗，HPLC檢測儀的狀態(tài)異常多表現(xiàn)為柱壓過高，檢測前應(yīng)拆卸HPLC檢測儀保護柱，觀察柱壓狀態(tài)，若柱壓下降，則證明保護柱發(fā)生故障；若柱壓未發(fā)生變化，則應(yīng)詳細(xì)檢測。將HPLC檢測儀內(nèi)的色譜柱拆卸，觀察柱壓變化，若柱壓仍處于過高狀態(tài)，則可判定柱壓過高由管路阻塞引起，此時應(yīng)徹底清洗管路，完成清洗后再次檢查柱壓狀態(tài)。清洗管路時需反向連接色譜柱進出口，運用10倍柱體積流動相清洗色譜柱。若柱壓仍未下降，則更換色譜柱入口篩板；若此時柱壓下降，則表明有樣品溶劑大直徑顆粒堵塞入口篩板。若經(jīng)上述處理后柱壓仍未下降，則表明儀器損壞，需進行維修。為了防止HPLC檢測儀柱壓過高，可在保護柱、進樣器之間設(shè)置過濾器，防止大直徑顆粒進入儀器設(shè)備，同時應(yīng)及時排出輸液管路氣泡，防止氣泡對檢測的精準(zhǔn)性與穩(wěn)定性造成影響，導(dǎo)致圖譜基線穩(wěn)定性降低，出現(xiàn)假峰現(xiàn)象，給檢測分析人員提供錯誤信號，繼而得出錯誤判斷。由此可見，及時處理氣泡可以在一定程度上提升檢測的精準(zhǔn)性。

（3）控制環(huán)境及樣品。為了保障食品添加劑檢測的精準(zhǔn)性，應(yīng)嚴(yán)格控制檢測環(huán)境。適宜的溫濕度是保障HPLC檢測儀性能穩(wěn)定、運行正常的必要條件，需將室溫控制在20℃-30℃，日溫變化2℃-3℃，若溫度超出適宜范圍，HPLC檢測儀開機分析時則會影響色譜分離效果。夏季檢測時的溫度不可超出30℃界限，否則將產(chǎn)生氣泡，干擾HPLC檢測儀的正常工作，室內(nèi)相對濕度也不可高于60%。在液相色譜儀分析中，流動相內(nèi)甲醇、乙腈等成分將會揮發(fā)，對檢測儀器造成腐蝕，因此在檢測前應(yīng)做好通風(fēng)工作，及時排出有害氣體，維護儀器性能。同時，為保障HPLC輸液泵的精度，應(yīng)為其輸送穩(wěn)定電壓，以提高儀器的穩(wěn)定性。在檢測前，應(yīng)按照檢測標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，若未展開樣品處理工作或處理不達(dá)標(biāo)，則會導(dǎo)致樣品內(nèi)存在雜質(zhì)組分，無法實現(xiàn)成分徹底分離，導(dǎo)致食品添加劑檢測結(jié)果偏高；若未分離出樣品內(nèi)提純待測成分，則會導(dǎo)致最終食品添加劑檢測結(jié)果偏低。由此可見，樣品內(nèi)存在雜質(zhì)或處理不徹底，均可影響檢測的精準(zhǔn)性，因此需在檢測準(zhǔn)備階段嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)進行樣品處理，控制樣品處理的時間、溫度、試劑劑量等。

2.規(guī)范檢驗分析過程。（1）定性分析。為了全面提高食品添加劑檢測的精準(zhǔn)性，應(yīng)在定性測試前進行標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣，加標(biāo)同類樣品展開定性分析，將特定濃度的標(biāo)樣添加到不含待測組分的同類樣品中，比較保留時間，確保檢測靈敏度。若不含待測組分樣品與檢測樣品保留時間類似，則在待測樣品中添加同體積標(biāo)液，以此完成定性。若加標(biāo)待測樣品并未出現(xiàn)叉峰現(xiàn)象，則需依據(jù)液相色譜法檢測結(jié)果，與現(xiàn)有條件進行混合計算，結(jié)果類似則證明檢測樣品中存在待測成分，結(jié)果差異較大則證明檢測樣品中不存在待測成分。若加標(biāo)待測樣品出現(xiàn)叉峰現(xiàn)象，則證明檢測樣品中無待檢測成分。如果檢測多組分添加劑，應(yīng)控制好測定比重，例如檢測山梨酸、苯甲酸、合成著色劑、糖精鈉時，應(yīng)進行混標(biāo)及單標(biāo)測試，確定柱分離效果及保留時間，這樣可以規(guī)避檢測對象出錯問題，避免假陽性。

（2）定量分析。在待測樣品中添加同體積的標(biāo)樣可以獲得對應(yīng)響應(yīng)值，此時可繪制出標(biāo)樣含量及響應(yīng)值校準(zhǔn)曲線，可根據(jù)校準(zhǔn)曲線尋找出樣品中待測成分響應(yīng)值組分含量。若在檢測分析過程中發(fā)現(xiàn)樣品中待測成分濃度低于檢測低限，此時無法成功濃縮且無法成功檢出，可適當(dāng)添加樣品量，提高待測成分濃度，將待測成分濃縮后進行檢測；若樣品中待測成分濃度高出校準(zhǔn)曲線檢測上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋樣品，當(dāng)待測成分濃度處于校準(zhǔn)曲線檢測范圍內(nèi)時方可進行檢測工作。例如在檢測山梨酸、糖精鈉、苯甲酸時，待測成分中可能出現(xiàn)其他類型成分相似的峰，即苯甲酸檢測中可能出現(xiàn)與安賽蜜相似的峰，而糖精鈉可能在檢測時出現(xiàn)脫氫乙酸的峰，因分離效果不佳，出現(xiàn)叉峰、饅頭峰等現(xiàn)象，繼而干擾檢測的精準(zhǔn)性，此時可根據(jù)食品標(biāo)簽信息進行添加劑的確定，完成定性分析。為進一步檢測出待測成分含量，可以降低樣品中待測成分的濃度，起到降低流動相極性的效果，徹底分離雜質(zhì)峰，完成定量檢測。若通過食品標(biāo)簽信息無法判斷添加劑，則需要運用加標(biāo)手段展開定性分析，后續(xù)展開定量分析工作。若在檢測過程中發(fā)現(xiàn)樣品中存在禁止添加的成分，此時需加標(biāo)樣品，依次進行定性、定量分析，當(dāng)待測峰與雜質(zhì)峰分離后判斷檢測結(jié)果，最大化地保障檢測質(zhì)量。

3.注意檢驗后的處理工作。流動相中存在無機鹽成分，若未及時清理，則會嚴(yán)重?fù)p壞色譜柱。因此，完成食品添加劑檢測工作后，為了保障后續(xù)檢測的精準(zhǔn)性，應(yīng)徹底清洗HPLC色譜柱，主要是運用甲醇純水溶液、80%乙腈恢復(fù)柱壓，并完成清洗工作。通常情況下，保護柱、過濾頭、單向閥、泵密封墊等儀器部件易堵塞，應(yīng)重點清理，每月至少2次；純水過濾后添加10%乙腈與甲醇溶劑，避免儀器內(nèi)滋生細(xì)菌，起到延長純水使用時間的效果。

綜上所述，液相色譜法在食品防腐劑、食品甜味劑、食品合成色素檢測中發(fā)揮著重要作用，為了提高檢測的準(zhǔn)確性，要注重檢驗前的準(zhǔn)備工作，包括過濾脫氣流動相、檢查并調(diào)整柱壓、控制周圍環(huán)境及樣品處理工作，同時應(yīng)從定性、定量兩個方面規(guī)范檢驗分析過程，加強對檢驗過程的控制，檢測完畢后還要進行設(shè)備清理工作，為下一次檢測奠定基礎(chǔ)。

作者簡介：余澍（1989-），男，江西德興人，漢族，本科，助理工程師，研究方向為質(zhì)量安全與檢測。