黃飛 陳俊林 瞿梅 顧德林 徐費(fèi)凡 馬娟

控制耐多藥結(jié)核病是各國(guó)政府重點(diǎn)關(guān)注的衛(wèi)生工作，近幾年WHO更是將單耐利福平(RFP)肺結(jié)核納入耐多藥結(jié)核病范疇[1]。如肺結(jié)核患者痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)對(duì)RFP耐藥，則同時(shí)對(duì)異煙肼耐藥可能性明顯增加[2]，導(dǎo)致療效明顯降低、預(yù)后不良。如果能早期快速精準(zhǔn)診斷耐RFP肺結(jié)核并即時(shí)調(diào)整治療方案，可避免無(wú)效用藥，同時(shí)在一定程度上避免低頻率、低耐藥MTB逐步演變成高頻率、耐多藥MTB，因此尋找到能快速精準(zhǔn)檢測(cè)RFP耐藥MTB的藥敏技術(shù)非常重要。目前診斷RFP耐藥的金標(biāo)準(zhǔn)仍然為羅氏培養(yǎng)(L-J)及比例法藥敏技術(shù)、但需耗時(shí)2個(gè)月左右，不能滿足臨床需要； BACTEC MGIT960是能和比例法藥敏結(jié)果相媲美的自動(dòng)化快速表型藥敏檢測(cè)技術(shù)[3-4]，但設(shè)備及試劑價(jià)格昂貴，無(wú)法推廣應(yīng)用。隨著科技進(jìn)步，一些新的能快速檢測(cè)RFP耐藥MTB的技術(shù)已在臨床得到應(yīng)用，如篩查RFP耐藥的分子藥敏技術(shù)XpertMTB/RIF，雖然檢測(cè)結(jié)果和表型藥敏技術(shù)之間存在一定差異[5]，但檢測(cè)快速、僅需要幾小時(shí)就能自動(dòng)篩查出標(biāo)本中微量的MTB以及其rpoB基因是否發(fā)生突變[6-7]；微量MIC技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展較為迅速的微量液體表型藥敏技術(shù)，目前應(yīng)用效果和比例法藥敏技術(shù)相比仍然有一些不足[8-9]，但檢測(cè)速度快、成本低，應(yīng)用前景非常好。為評(píng)估XpertMTB/RIF和微量MIC在快速精準(zhǔn)檢測(cè)RFP耐藥MTB的臨床價(jià)值，本課題組將肺結(jié)核患者的涂陽(yáng)痰標(biāo)本作為檢測(cè)對(duì)象，以比例法藥敏作為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，分別觀察Xpert MTB/RIF與微量MIC檢測(cè)效能，對(duì)產(chǎn)生異質(zhì)性耐藥的可能原因進(jìn)行分析，結(jié)果如下。

資料與方法

一、一般資料

1 標(biāo)本來(lái)源

MTB標(biāo)準(zhǔn)株(H37Rv ATCC27294)購(gòu)自國(guó)家菌種保藏中心，收集2016年8月～2020年2月在南通市第六人民醫(yī)院就診的466例肺結(jié)核患者的涂陽(yáng)痰標(biāo)本，其中男256例，女210例，年齡18～83歲，平均50歲。對(duì)每例肺結(jié)核患者均詳細(xì)記錄用藥史。痰抗酸桿菌菌量分級(jí)：按照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[10]，以1+、2+、3+、4+記錄，其中94例標(biāo)本1+、110例標(biāo)本2+、136例標(biāo)本3+、126例標(biāo)本4+。

2 主要試劑和儀器

iddlebrook 7H9培養(yǎng)基干粉、OADC營(yíng)養(yǎng)添加劑購(gòu)自美國(guó)BD(Becton Dickinson)公司；RFP購(gòu)自美國(guó)Fluka公司；GNP-92700隔水式培養(yǎng)箱購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；GeneXpert儀器及Xpert MTB/RIF檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Cepheid公司；對(duì)硝基苯甲酸(PNB)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；24孔變色硅膠微孔板，由上海積彩醫(yī)療器械有限公司提供；微孔板檢測(cè)儀購(gòu)自東樂(lè)自然基因生命科學(xué)公司；羅氏培養(yǎng)基及及7H9培養(yǎng)基由本實(shí)驗(yàn)室自配。

二、方法

1 標(biāo)本處理

取干酪樣或膿樣晨痰1mL于試管內(nèi)，加入4mL 4%NaOH并進(jìn)行振蕩使痰液充分消化，移入37 ℃水浴箱，15min后用1mmol/L的磷酸鹽緩沖液中和，以3000r/min轉(zhuǎn)速(1750g離心力)離心30min后移入37 ℃水浴電熱恒箱內(nèi)。

2 L-J培養(yǎng)、菌型鑒定及比例法藥敏試驗(yàn)

按照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[10]中的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序進(jìn)行操作。質(zhì)量控制：每次藥敏試驗(yàn)均采用H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株作為陽(yáng)性參照。

3 XpertMTB/RIF核酸擴(kuò)增檢測(cè)

按檢測(cè)說(shuō)明書(shū)操作，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果判斷，2h內(nèi)判斷標(biāo)本內(nèi)是否存在MTB以及是否存在rpoB基因突變。結(jié)果報(bào)告為：MTB檢出或未檢出，檢出菌量為高、中、低、極低；MTB檢出報(bào)告同步顯示rpoB基因突變的結(jié)果：△CT≥3.5，有基因突變；△Ct<3.5，無(wú)基因突變(Ct是指探針循環(huán)域值，△Ct指探針早期Ct值與晚期Ct值之差)，基因檢測(cè)探針?lè)謩e以probe A、probeB、probeC、probeD、probeE命名。

4 微量MIC檢測(cè)涂陽(yáng)標(biāo)本中MTB對(duì)RFP藥物敏感性

微量MIC檢測(cè)工具，采用的是24孔變色硅膠微孔板作為MTB培養(yǎng)載體，參考文獻(xiàn)方法[11]，RFP藥敏的耐藥界值設(shè)定為1μg/mL。用二甲基甲酰胺溶解配制成10mg/mL，再用7H9培養(yǎng)基分別稀釋成所需濃度(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μg/mL)；PNB用液體培養(yǎng)基稀釋，終濃度為800μg/mL。24孔微孔板中設(shè)定陽(yáng)性對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔、測(cè)試孔、PNB含藥孔。陽(yáng)性對(duì)照孔加不含藥培養(yǎng)基0.4mL、接種0.4mL標(biāo)本沉淀懸濁液；測(cè)試孔中分別加入不同終濃度0.4mL含RFP培養(yǎng)基，再接種0.4mL標(biāo)本沉淀懸濁液；陰性對(duì)照孔加不含藥培養(yǎng)基0.8mL、不接種菌，作為陰性控制；PNB含藥孔加PNB稀釋液0.4mL及標(biāo)本沉淀懸濁液0.4mL，用透明膠帶將培養(yǎng)板封好裝入密封袋，置于37 ℃溫箱培養(yǎng)。從培養(yǎng)第2天起，每天觀察微孔板底硅膠顏色是否由天藍(lán)色逐漸變黃色。若觀察期間內(nèi)對(duì)照孔底硅膠顏色改變，PNB含藥孔底硅膠顏色改變，則說(shuō)明標(biāo)本中生長(zhǎng)的細(xì)菌為非結(jié)核分枝桿菌；當(dāng)測(cè)試孔底先于對(duì)照孔或與對(duì)照孔同時(shí)發(fā)生硅膠顏色改變，說(shuō)明藥物不能抑制測(cè)試孔內(nèi)MTB繁殖，判斷該測(cè)試孔內(nèi)MTB對(duì)RFP耐藥；當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照孔底硅膠顏色改變，測(cè)試孔尚未改變，說(shuō)明測(cè)試孔MTB生長(zhǎng)被藥物抑制，判為敏感。結(jié)果判斷時(shí)間為21天，超過(guò)21天不生長(zhǎng)需重復(fù)試驗(yàn)。質(zhì)量控制：每次實(shí)驗(yàn)均以H37Rv為敏感株質(zhì)控，以牛分枝桿菌為耐藥株質(zhì)控。

5 XpertMTB/RIF、微量MIC與比例法藥敏結(jié)果不一致的MTB臨床分離菌株進(jìn)行基因擴(kuò)增和rpoB基因測(cè)序，PCR產(chǎn)物純化和測(cè)序工作委托上海生工生物工程有限公司完成，PCR引物檢測(cè)序列涵蓋rpoB基因的第507至533位密碼子的核心區(qū)域，其引物堿基設(shè)計(jì)序列為5′-GGTCGCCGCGATCAAGGAGTT-3′，5′-TCTGATCGGCTCGCTGTCGGT-3′，擴(kuò)增片段234bp。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、三種藥敏方法檢測(cè)466例痰標(biāo)本結(jié)果

L-J培養(yǎng)及比例法藥敏結(jié)果：培養(yǎng)報(bào)告為陰性34例、陽(yáng)性432例，35例鑒定為非結(jié)核分枝桿菌、397例鑒定為MTB，其中77例痰標(biāo)本中MTB對(duì)RFP耐藥。微量MIC檢測(cè)結(jié)果：培養(yǎng)報(bào)告陰性34例，陽(yáng)性432例，35例鑒定為非結(jié)核分枝桿菌，397例鑒定為MTB，其中76例痰標(biāo)本中MTB對(duì)RFP耐藥。Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果：檢測(cè)到MTB 431例，其中94例MTB檢出rpoB基因發(fā)生突變。三種藥敏方法檢出的陽(yáng)性例數(shù)、MTB檢出例數(shù)、耐藥檢出例數(shù)(%)(見(jiàn)表1)。

表1 三種藥敏方法檢出的陽(yáng)性例數(shù)、MTB檢出例數(shù)、耐藥檢出例數(shù)[n(%)]

二、微量MIC藥敏結(jié)果分布情況

397例標(biāo)本中MTB在RFP不同終濃度下藥敏結(jié)果：120株0.125μg/mL；129株0.25μg/mL；72株0.5μg/mL；10株1.0μg/mL；37株2.0μg/mL；18株4.0μg/mL；8株8.0μg/mL；3株16.0μg/mL(見(jiàn)表2)。

表2 397例標(biāo)本中MTB在RFP不同終濃度下MIC分布情況(%)

三、Xpert MTB/RIF耐藥探針

檢測(cè)到基因突變標(biāo)本94例，分別為probeA 8例、 probeB 5例、 probeC 8例、probeA+probeC 2例、probeD 33例、probE 37例、probeE +C 1例。probeA及probB檢測(cè)結(jié)果共13例，占13.8%。rpoB基因突變探針報(bào)告結(jié)果與菌量報(bào)告結(jié)果見(jiàn)表3。

四、L-J培養(yǎng)及比例法藥敏、微量MIC及Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果比較

L-J培養(yǎng)及微量MIC兩種方法菌型鑒定結(jié)果完全一致，兩種藥敏方法同時(shí)檢出耐RFP的MTB 76株，以比例法藥敏為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，微量MIC符合率為99.7%(396/397)，敏感性為100%(76/76)，特異性為99.7%(320/321)，兩種方法結(jié)果基本一致(Kappa=0.99)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.25,P>0.05)；L-J培養(yǎng)及比例法藥敏與Xpert MTB/RIF比較：12株Xpert MTB/RIF檢出rpoB基因突變而L-J培養(yǎng)陰性，12株Xpert MTB/RIF檢出rpoB基因突變而比例法藥敏報(bào)告為敏感，7株Xpert MTB/RIF檢測(cè)rpoB基因未發(fā)生突變而比例法藥敏報(bào)告為耐藥。以比例法藥敏為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF符合率為95.2(378/197)，敏感性為85.4%(70/82)，特異性為97.8%(76/76)，兩種方法結(jié)果一致性好(Kappa=0.85),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.17、P>0.05)。三種方法檢測(cè)結(jié)果一致性與異質(zhì)性比較見(jiàn)表4。比例法藥敏和微量MIC藥敏報(bào)告平均時(shí)間分別為52.5天和17.5天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.64，t>t(df)0.001、P<0.05)(見(jiàn)表5)。

表4 三種方法檢測(cè)結(jié)果一致性及異質(zhì)性比較(以L-J培養(yǎng)及比例法藥敏為診斷標(biāo)準(zhǔn))(n=397)

表5 比例法藥敏和微量MIC藥敏報(bào)告時(shí)間比較(單位：天)(n=397)

五、XpertMTB/RIF檢出rpoB基因突變與比例法藥敏異質(zhì)性結(jié)果及既往用藥史情況(見(jiàn)表6)。

表6 XpertMTB/RIF檢出rpoB基因突變與比例法藥敏異質(zhì)性結(jié)果

六、對(duì)L-J培養(yǎng)陽(yáng)性，XpertMTB/RIF檢出rpoB基因突變、微量MIC與比例法藥敏結(jié)果不一致的MTB分離菌株進(jìn)行測(cè)序。1株微量MIC與比例法藥敏結(jié)果不一致的MTB臨床分離菌株rpoB基因未發(fā)生突變；7株XpertMTB/RIF檢測(cè)rpoB基因未發(fā)生突變而比例法藥敏報(bào)告為耐藥的菌株，rpoB基因測(cè)序未見(jiàn)基因突變；12株XpertMTB/RIF檢出rpoB基因突變而比例法藥敏報(bào)告為敏感的菌株，rpoB基因測(cè)序可見(jiàn)基因突變，突變氨基酸位置：511位點(diǎn)突變7株：密碼子改變CTG→CCG、氨基酸改變Ser→Leu；516位點(diǎn)突變5株：密碼子改變GAC→GTC、氨基酸改變Asp→Gly(見(jiàn)表7)。

表7 XpertMTB/RIF檢出rpoB基因突變而比例法敏感的MTB臨床分離株基因測(cè)序結(jié)果

討 論

如能快速精準(zhǔn)檢測(cè)到肺結(jié)核患者痰標(biāo)本中RFP耐藥MTB，可及時(shí)調(diào)整治療方案，提高治愈率。L-J培養(yǎng)及比例法藥敏技術(shù)作為診斷RFP耐藥的金標(biāo)準(zhǔn)，雖然為各級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)常規(guī)開(kāi)展的檢驗(yàn)方法、但因耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)不能滿足臨床需要。目前篩查RFP耐藥最快速最靈敏的藥敏技術(shù)首推Xpert MTB/RIF，該技術(shù)采用半巢式PCR，針對(duì)MTB的rpoB基因81bp耐藥決定區(qū)設(shè)計(jì)了5個(gè)分子信標(biāo)探針，將MTB的DNA提取、PCR擴(kuò)增和熒光檢測(cè)結(jié)合在一起，能快速檢測(cè)標(biāo)本中微量MTB,并同時(shí)判斷rpoB基因是否發(fā)生突變，是目前檢測(cè)RFP耐藥MTB的最佳分子藥敏技術(shù)[13-15]。以比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果為判斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本課題組400余例涂陽(yáng)痰標(biāo)本最終檢測(cè)結(jié)果分析，Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果同比例法藥敏相比一致性較好(Kappa=0.85)，提示利用Xpert MTB/RIF快速檢測(cè)RFP耐藥MTB可靠性高、值得推廣應(yīng)用。雖然兩種方法的檢測(cè)結(jié)果大多數(shù)一致，但小部分差異性結(jié)果，即異質(zhì)性耐藥[16]，可能會(huì)影響臨床醫(yī)生的判斷并導(dǎo)致誤診誤治，給患者帶來(lái)不必要的身心損害。因此在積極利用Xpert MTB/RIF篩查RFP耐藥MTB同時(shí)，必須對(duì)出現(xiàn)異質(zhì)性耐藥的原因進(jìn)行認(rèn)真分析。通過(guò)對(duì)本課題組中所有異質(zhì)性耐藥MTB的rpoB基因測(cè)序的結(jié)果及患者的病史進(jìn)行分析，筆者認(rèn)為原因可能有以下幾方面：(一)部分肺結(jié)核患者在痰標(biāo)本送檢前可能已接受了多種一線和二線抗結(jié)核藥物的治療，導(dǎo)致痰標(biāo)本中MTB存在多種狀態(tài)：如活菌、死菌(DNA未降解)、L型MTB等[17]。而Xpert MTB/RIF是基于MTB的DNA提取、PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的基因檢測(cè)技術(shù)，對(duì)DNA未降解的各種狀態(tài)的MTB都能進(jìn)行有效檢測(cè)，這就容易導(dǎo)致Xpert MTB/RIF檢測(cè)和L-J培養(yǎng)及比例法藥敏結(jié)果不一致，如本實(shí)驗(yàn)組中利用XpertMTB/RIF檢測(cè)到12株菌株rpoB基因發(fā)生突變而L-J培養(yǎng)陰性菌株，結(jié)合其用藥史、考慮標(biāo)本中MTB為死菌；(二)標(biāo)本中敏感MTB為優(yōu)勢(shì)菌群、同時(shí)存在低頻率RFP耐藥MTB，這時(shí)如果對(duì)標(biāo)本處理不當(dāng)[18]，可導(dǎo)致耐藥菌DNA不能被有效提取及PCR擴(kuò)增。本組利用Xpert MTB/RIF檢測(cè)到1株rpoB基因無(wú)突變、但L-J培養(yǎng)陽(yáng)性，且比例法藥敏提示RFP耐藥MTB，在培養(yǎng)基上僅見(jiàn)3個(gè)菌落生長(zhǎng)，提示低頻率異質(zhì)性耐藥菌容易被漏檢；(三)因抗結(jié)核藥物誘導(dǎo)刺激使MTB外排泵基因過(guò)表達(dá)或者發(fā)生突變、如類泛素蛋白-蛋白酶體系統(tǒng)中相關(guān)的Pup、Dop、PafA、Mpa等相關(guān)外排泵基因在RFP耐藥中作用已越來(lái)越得到重視[19]，可能出現(xiàn)比例法藥敏結(jié)果提示RFP耐藥但rpoB基因未發(fā)生突變[20-21]，本實(shí)驗(yàn)中比例法藥敏結(jié)果提示6株RFP耐藥MTB但rpoB基因未發(fā)生突變，可能是MTB外排泵基因作用導(dǎo)致耐藥。(四)rpoB基因片段不同位點(diǎn)基因突變或者同一個(gè)位點(diǎn)不同氨基酸密碼子突變、可能導(dǎo)致耐藥程度不一致，即所謂低水平耐藥或者高水平耐藥[22]。Xpert MTB/RIF分子信標(biāo)探針如probeA、probeB檢測(cè)區(qū)域相對(duì)應(yīng)包含511、516位點(diǎn)基因，可能是低水平耐藥突變位點(diǎn)區(qū)域[23]，這一片段基因突變時(shí)，利用Xpert MTB/RIF和比例法藥敏試驗(yàn)檢測(cè)可能會(huì)出現(xiàn)不一致結(jié)果，對(duì)本組中12株兩種藥敏結(jié)果不一致的MTB分離菌株、通過(guò)基因測(cè)序證明rpoB基因片段不同位點(diǎn)基因發(fā)生突變導(dǎo)致耐藥水平有明顯差異。XpertMTB/RIF雖然是篩查RFP耐藥的最快速最敏感檢測(cè)技術(shù)，但結(jié)果的精準(zhǔn)性仍然值得進(jìn)一步研究[24]。

確診RFP耐藥MTB及耐藥程度的高低，仍然要依賴表型藥敏檢測(cè)技術(shù)，而找到可替代比例法藥敏或者BACTEC MGIT960的快速表型藥敏檢測(cè)技術(shù)已成為研究熱點(diǎn)，本課題組關(guān)注的液體藥敏檢測(cè)技術(shù)，如微量MIC檢測(cè)快速、還可以觀察到MTB在各藥物終濃度下藥敏結(jié)果分布情況，能幫助臨床醫(yī)師快速精準(zhǔn)選擇抗結(jié)核藥物，是最具有應(yīng)用前景表型藥敏技術(shù)。目前臨床常用的微量MIC檢測(cè)工具是以普通的微孔板作為培養(yǎng)載體的，依靠肉眼觀察微孔板內(nèi)是否出現(xiàn)白色菌體沉淀或形成特殊索狀結(jié)構(gòu)來(lái)判斷藥敏結(jié)果，但易受結(jié)核菌菌量及毒力等因素影響結(jié)果判斷，所以實(shí)際應(yīng)用效果和L-J培養(yǎng)及比例法藥敏仍然有一定差距[25]。本課題組選擇了最新研制的微量液體培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合變色硅膠觀察技術(shù)(即可視化的微量MIC)作為普通微量MIC的升級(jí)版[26-27]，在實(shí)際應(yīng)用中與L-J培養(yǎng)及比例法藥敏進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果顯示可視化的微量MIC法藥敏符合率、敏感性、及特異性大于99%，兩種檢測(cè)方法結(jié)果一致性非常好，可靠性優(yōu)于普通微量MIC?？梢暬⒘縈IC藥敏平均報(bào)告時(shí)間為17.5天，與BACTEC MGIT960藥敏報(bào)告時(shí)間相似[11]，優(yōu)于比例法藥敏平均報(bào)告時(shí)間52.5天。經(jīng)過(guò)觀察技術(shù)改進(jìn)，微量MIC完全可以成為檢測(cè)快速、成本低廉、高靈敏、高特異的表型藥敏技術(shù)，在臨床推廣應(yīng)用。在L-J培養(yǎng)及比例法藥敏報(bào)告明顯滯后的情況下，如果能保證質(zhì)控效果，可將微量MIC藥敏結(jié)果作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。本組中出現(xiàn)1株微量MIC提示，對(duì)RFP敏感而比例法藥敏結(jié)果提示耐藥MTB，經(jīng)過(guò)基因測(cè)序證明rpoB基因未發(fā)生突變，原因可能為標(biāo)本中存在低頻率、以外排泵基因突變或者過(guò)表達(dá)為主的MTB耐藥菌，在微量MIC常規(guī)藥敏結(jié)果判斷期限內(nèi)，因繁殖緩慢導(dǎo)致菌量過(guò)少不易被檢測(cè)到。

筆者認(rèn)為在堅(jiān)持L-J培養(yǎng)及比例法藥敏金標(biāo)準(zhǔn)前提下，既要充分利用好Xpert MTB/RIF和微量MIC的優(yōu)秀檢測(cè)性能，也要關(guān)注并認(rèn)真分析出現(xiàn)的小概率異質(zhì)性耐藥事件。例如對(duì)既往用藥史長(zhǎng)，效果不佳的絕大部分復(fù)治涂陽(yáng)肺結(jié)核患者，如果痰標(biāo)本中檢出probeC、probeD、probeE片段基因發(fā)生突變的MTB，即可判斷RFP高水平耐藥、需要及時(shí)調(diào)整治療方案，但對(duì)部分正在接受二線方案治療的患者，需要判斷送檢標(biāo)本中MTB是否為死菌。對(duì)初治肺結(jié)核患者、如果痰標(biāo)本中檢出probeA、probeB片段基因發(fā)生突變的MTB，可能為rpoB基因片段的低水平耐藥區(qū)域某位點(diǎn)發(fā)生基因突變，這時(shí)調(diào)整治療方案就需要謹(jǐn)慎，而同時(shí)進(jìn)行微量MIC可快速有效檢測(cè)到不同RPF濃度下MTB的MIC[28]，彌補(bǔ)Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果的不足，為制定合理方案提供依據(jù)[27]。