尕藏卓瑪 楊麗瓊 達娃卓瑪

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗研究院，西藏 拉薩 850000

小兒清熱止咳口服液原方來自我國漢代名醫(yī)張仲景的《傷寒雜病論》的麻杏石甘湯。麻杏石甘為麻黃、苦杏仁、石膏、甘草。本品現(xiàn)收載于《中國藥典》(2015年版)一部，具有清熱宣肺、平喘、利咽的功效，用于小兒外感風(fēng)熱所致的感冒，癥見發(fā)熱惡寒、咳嗽痰黃、氣促喘息、口干音啞、咽喉腫痛。該方由麻黃、炒苦杏仁、石膏、甘草、黃芩、板藍根、北豆根七味藥組成，輔料為蜂蜜、蔗糖、苯甲酸鈉[1]。已發(fā)表的文獻主要報道了該制劑中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷及總黃酮的含量[2-5]。關(guān)于小兒清熱止咳顆粒中輔料苯甲酸的質(zhì)量控制未見文獻報道。苯甲酸又稱安息香酸，適量的苯甲酸防腐劑能抑制微生物的生長和繁殖，延長藥品的保存期[6-7]。但過量的苯甲酸會對人體產(chǎn)生極大危害，對胃、皮膚和粘膜有一定的刺激性，對于敏感人群, 較多地攝入苯甲酸及其鹽會引起過敏反應(yīng), 例如哮喘、蕁麻疹、代謝性酸中毒和抽搐等癥狀[8-9]，過少起不到防腐效果。因而對小兒清熱止咳顆粒中的防腐劑苯甲酸的用量應(yīng)該嚴格控制。為保證用藥安全，本實驗對該制劑中苯甲酸的HPLC含量測定進行方法學(xué)研究，并對30家企業(yè)各2批次的苯甲酸含量進行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2030高效液相色譜儀(Labsolution工作站)，自帶檢測器，瑞士Mettler XP205型(精密度為十萬分之一)和Mettler XP504(精密度為萬分之一)電子天平。

1.2 試藥 苯甲酸，購于中國食品藥品檢定研究院，批號為(100419-201302)，純度大于99%。乙腈(色譜純，美國Fisher Scientific公司)；水(娃哈哈純凈水)。

2 色譜條件

色譜柱Inertsustain C18(5 μm, 250 mm × 4.6 mm) 柱，柱溫35℃；流動相：乙腈-0.02 mol/mL乙酸銨溶液(5∶95)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；進樣量：20 μL。

3 結(jié)果與討論

3.1 檢測波長的確定 用二極管陣列檢測器對標(biāo)準溶液在190 ～ 700 nm 范圍內(nèi)進行波長掃描，發(fā)現(xiàn)苯甲酸在223 nm處有最大吸收，如圖1所示。根據(jù)樣品特征及前處理過程中試劑的干擾情況，選擇檢測波長為240 nm。

圖1 苯甲酸的HPLC紫外吸收圖譜

3.2 對照品溶液的制備 取苯甲酸對照品適量，精密稱定，置于50 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制成濃度為1.8044 mg/mL的對照品溶液。對照圖譜如圖2所示。

圖2 苯甲酸的HPLC圖譜

3.3 供試品溶液的制備 對30家企業(yè)57批次樣品進行檢驗。精密吸取0.2 mL于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻。供試品圖譜如圖3所示。

圖3 樣品的HPLC圖譜

3.4 標(biāo)準曲線繪制 精密量取苯甲酸對照品母液6.8 mL于50 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制成245.3984 μg/mL的目標(biāo)溶液。再分別精密量取0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5 mL分別置于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下分析，以對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，其對應(yīng)的縱坐標(biāo)為峰面積進行線性回歸，苯甲酸對照品在一定范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1和圖4。

表1 線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)

圖4 苯甲酸標(biāo)準曲線圖

3.5 檢出限 取對照品溶液，稀釋至對照品色譜峰高達到3倍信噪比，得到苯甲酸的檢出限為9.816 ng/mL。

3.6 精密度 精密量取濃度為245.3984 μg/mL的苯甲酸對照品2.5 mL置于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，連續(xù)進樣6次，測得苯甲酸峰面積RSD為0.053%，表明儀器精密度很好。

3.7 重復(fù)性 精密量取供試品溶液0.2 mL共6份，分別置于10 mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，以0.45μm微孔濾膜過濾后進樣分析，RSD 為1.81%。

3.8 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，按上述方法提取后在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h在上述色譜條件下分析，測得苯甲酸峰面積RSD為0.412%，表明樣品在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 加樣回收試驗 精密量取供試品溶液0.1 mL共6份，分別置于10 mL的容量瓶中，精密加入溶液濃度為245.3984 μg/mL的苯甲酸對照品1.0 mL，以流動相稀釋至刻度。在上述色譜條件下進行分析，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率

3.10 耐用性 精密量取供試品溶液0.2 mL共兩份分別置于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻。采用不同色譜柱對同一樣品在上述色譜條件下進行分析，色譜柱①島津柱子InertSustain C18(5 μm, 250 mm × 4.6 mm)、②waters柱子XSELECT CSH C18(5 μm, 250 mm × 4.6 mm)③Agilent柱子 EcLipse XDB-C18(5 μm, 250 mm × 4.6 mm) 。不同柱子測得的結(jié)果RSD為1.48%，表明樣品耐用性良好。見表3。

表3 耐用性

3.11 樣品的測定 對于口服液體制劑，《中國藥典》2015年版一部明確規(guī)定，苯甲酸含量不得超過0.3%[10]，對以上30家企業(yè)57批次樣品的苯甲酸含量進行測定，結(jié)果顯示，大部分廠家苯甲酸含量均勻，都在合格范圍之內(nèi)，個別企業(yè)苯甲酸含量很低，幾乎為零，也有個別廠家的苯甲酸含量已超出合格范圍。見表4。

表4 苯甲酸的含量

4 結(jié)論

苯甲酸本身毒性較大，故針對兒童藥，世界上有許多國家已經(jīng)禁止使用。但本次抽樣的30家企業(yè)57批次樣品均以苯甲酸為防腐劑，從檢測結(jié)果來看，部分企業(yè)苯甲酸用量已經(jīng)超標(biāo)，這對消費者的健康而言具有較大的威脅，尤其小兒清熱止咳口服液是兒童藥，對于免疫系統(tǒng)和排毒代謝能力較弱的兒童來說，過量的防腐劑會對自身健康造成更大的危害[11]。故生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中不能只考慮產(chǎn)量、銷量，應(yīng)該把消費者的健康利益放在首位。