河南省洛陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心（471000）趙衛(wèi) 劉萌萌

沙門氏菌為乙類傳染病，菌型多達(dá)2500種，具有易繁殖、易傳播等特點(diǎn)，為相關(guān)食物中毒病原菌，患者多出現(xiàn)惡心、頭痛、腹痛、發(fā)熱等綜合癥狀，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)敗血癥，對(duì)患者健康及生活質(zhì)量構(gòu)成影響[1]。相關(guān)研究指出，及時(shí)有效治療及預(yù)防病情擴(kuò)散的關(guān)鍵在于早期沙門氏菌檢測(cè)[2]。分離培養(yǎng)是既往臨床常用檢測(cè)方法，屬于沙門氏菌檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法程序復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)。實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)法（Real-time Fluorescence Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）具有快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，近年來在沙門氏菌臨床檢測(cè)中得到極大重視。本研究選取我院從業(yè)人員健康體檢者428例，旨在分析肛拭子標(biāo)本RT-PCR檢測(cè)腸道沙門氏菌的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月～2018年11月我院從業(yè)人員健康體檢者428例，男235例，女193例，年齡23～41歲，平均年齡（32.57±4.19）歲，體質(zhì)量指數(shù)20～25kg/m2，平均體質(zhì)量指數(shù)（22.36±0.71）kg/m2。

1.2 方法 均采集肛拭子標(biāo)本，使用一次性棉拭子，插入肛門內(nèi)（約3cm），輕旋3周，取出并放入增菌液內(nèi)，增菌液環(huán)境溫度37℃。

1.2.1 RT-PCR檢測(cè) 在增菌液培養(yǎng)3～12h后，混合均勻，使用1.5ml離心管，使用移液器置入50μl增菌液，離心（10000r/min，5min）處理，取出300μl上清液，再次混合均勻，提取核酸。制備擴(kuò)增模板，加入核酸檢測(cè)試劑，置20μl反應(yīng)液、聚合酶，依據(jù)試劑盒說明書提供反應(yīng)條件實(shí)施擴(kuò)增，95℃條件下3min預(yù)變性，擴(kuò)增1個(gè)循環(huán)；95℃條件下5s、55℃條件下60sPCR，擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)；50℃條件下2minUNG處理，擴(kuò)增1個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)果顯示陽(yáng)性標(biāo)本行2次擴(kuò)增，擴(kuò)增過程中采集熒光信號(hào)，通過擴(kuò)增結(jié)果排除陰性標(biāo)本，可疑陽(yáng)性標(biāo)本行生化鑒定，依照鑒定結(jié)果行血清分型。

1.2.2 分離培養(yǎng) 在增菌液培養(yǎng)18～24h后，混合均勻，使用接種環(huán)，選擇可疑菌種TSI平板分離（24h），使用BD Phoenix-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀，生化鑒定沙門氏菌，并對(duì)相關(guān)菌株行血清凝集試驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo) 以分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，觀察RT-PCR檢測(cè)靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果 本組428例從業(yè)人員健康體檢者經(jīng)肛拭子標(biāo)本分離培養(yǎng)結(jié)果證實(shí)患有腸道沙門氏菌16例，無腸道沙門氏菌412例，采用RT-PCR檢測(cè)出腸道沙門氏菌20例，非腸道沙門氏菌408例。見附表。

附表 診斷四格表（n=428）

2.2 診斷效能 RT-PCR檢測(cè)靈敏度93.75%（15/16）、特異度98.79%（407/412）、準(zhǔn)確度98.60%（422/428）、誤診率1.21%（5/412）、漏診率6.25%（1/16）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值75.00%（15/20）、陰性預(yù)測(cè)值99.75%（407/408）。

3 討論

沙門氏菌傳染性較高，攜菌從業(yè)人員易對(duì)食物或環(huán)境構(gòu)成污染，相關(guān)法律對(duì)從業(yè)人員沙門氏菌檢測(cè)作出明確規(guī)定[3]。分離培養(yǎng)在沙門氏菌檢測(cè)中屬于標(biāo)準(zhǔn)方法，在臨床既往檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用，檢測(cè)準(zhǔn)確度較高，但檢測(cè)多需4～6d，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，無法實(shí)現(xiàn)早期治療和預(yù)防，易導(dǎo)致病情聚集發(fā)展[4]。RT-PCR檢測(cè)以便捷、快速等優(yōu)勢(shì)在臨床沙門氏菌檢測(cè)中引起關(guān)注。本研究選取RT-PCR檢測(cè)，研究結(jié)果顯示，RT-PCR檢測(cè)靈敏度93.75%（15/16）、特異度98.79%（407/412）、準(zhǔn)確度98.60%（422/428）、誤診率1.21%（5/412）、漏診率6.25%（1/16）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值75.00%（15/20）、陰性預(yù)測(cè)值99.75%（407/408）。提示PT-PCR檢測(cè)靈敏度、特異度、陰性預(yù)測(cè)值較高，且誤診率、漏診率較低，分析原因在于檢測(cè)程序自動(dòng)化，降低技術(shù)人員技能水平影響，同時(shí)避免選擇性增菌遺漏陽(yáng)性菌落，進(jìn)而提升檢測(cè)準(zhǔn)確度、降低漏診率。PT-PCR檢測(cè)通過提取核酸實(shí)施擴(kuò)增，可有效排除陰性標(biāo)本，確定可疑陽(yáng)性標(biāo)本，無需長(zhǎng)時(shí)間分離培養(yǎng)，擴(kuò)增結(jié)果顯示可疑陽(yáng)性標(biāo)本直接送檢，行生化鑒定、血清分型，以確定陽(yáng)性標(biāo)本，可縮短前期篩查、生化培養(yǎng)時(shí)間，進(jìn)而縮短檢測(cè)周期，對(duì)早期治療和預(yù)防具有積極意義。

綜上所述，RT-PCR應(yīng)用于從業(yè)人員健康體檢中，可有效檢測(cè)出腸道沙門氏菌，靈敏度、準(zhǔn)確度較高，可有效縮短檢測(cè)周期，對(duì)患者早期治療及預(yù)防腸道沙門氏菌聚集性發(fā)展具有積極意義。