周 峰，江 勛，彭婷婷

（湖南省衡陽(yáng)市市場(chǎng)監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖南 衡陽(yáng) 421001）

安神補(bǔ)腦膠囊由安神補(bǔ)腦片劑型改良而來(lái)，由鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗經(jīng)提取后加入維生素B1精制而成，臨床用于治療神經(jīng)衰弱、失眠、健忘、頭暈等癥［1－2］。安神補(bǔ)腦片執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為《國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）》WS－11154（ZD －1154）－2002。安神補(bǔ)腦膠囊可促進(jìn)大鼠腦組織核酸合成［3］，對(duì)樟柳堿模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙也有明顯改善作用［4］。目前，全國(guó)共有4 家藥品生產(chǎn)企業(yè)擁有安神補(bǔ)腦膠囊的批準(zhǔn)文號(hào)，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均為企業(yè)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（YBZ15322009，YBZ02542009，YBZ06762009，YBZ08452009）制訂。但上述標(biāo)準(zhǔn)中的薄層色譜鑒別均缺乏對(duì)處方中主藥制何首烏及淫羊藿的有效控制，不能全面體現(xiàn)安神補(bǔ)腦膠囊中復(fù)雜成分的可控性。為此，本研究中建立了以何首烏、淫羊藿為對(duì)照藥材，以及二者中特征性成分 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯 －2－ O－β－ D 葡萄糖苷、淫羊藿苷為對(duì)照品的薄層色譜法，旨在完善安神補(bǔ)腦膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240S 型電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多有限公司，精度為 0.1 mg）；DK － 615HT 型超聲清洗儀（深圳市得康洗凈電器有限公司，功率為360 W，頻率為40 kHz）；XMTD－4000 型八孔電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫(yī)療器械廠(chǎng)）；ZF－20C 型暗箱式自動(dòng)紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠(chǎng)）。

1.2 試藥

何首烏對(duì)照藥材（批號(hào)為120934－201410），淫羊藿對(duì)照藥材（批號(hào)為 121632 －201502），2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷對(duì)照品（批號(hào)為110844 －201814，純度為 91.0%），淫羊藿苷對(duì)照品（批號(hào)為 110737－201516，純度 94.2%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；薄層色譜預(yù)制硅膠G 板（德國(guó)Merck公司，批號(hào)為HX69481826）；實(shí)驗(yàn)用水為屈臣氏蒸餾水（批號(hào)為20190910C），其余試劑均為分析純。安神補(bǔ)腦膠囊樣品來(lái)源見(jiàn)表1。

表1 安神補(bǔ)腦膠囊樣品信息Tab.1 Information of Anshen Bunao Capsules

2 方法與結(jié)果

2.1 制何首烏

取樣品內(nèi)容物10 粒，研細(xì)，取1 g，精密稱(chēng)定，加70%甲醇30 mL，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液回收溶劑至干；殘?jiān)铀?0 mL 使溶解，用乙醚振搖提取2 次，每次25 mL，合并乙醚提取液，回收溶劑至干；殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對(duì)照藥材1 g，精密稱(chēng)定，加甲醇10 mL，超聲處理15 min，靜置，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。取 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取不含制何首烏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。照2015 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502 項(xiàng)下薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯 － 甲醇 － 甲酸（25 ∶1 ∶1，V ／ V ／ V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1 A。

2.2 淫羊藿

取樣品內(nèi)容物10 粒，研細(xì)，取1 g，精密稱(chēng)定，加熱水20 mL，超聲處理20 min，放冷，離心，取上清液，加乙酸乙酯提取 2 次，每次 20 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿對(duì)照藥材0.5 g，精密稱(chēng)定，溫浸30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖际谷芙?，作為?duì)照藥材溶液。取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取不含淫羊藿的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制陰性對(duì)照品溶液。照2015 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502 項(xiàng)下薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯－丁酮 － 甲酸 － 水（10 ∶1 ∶1 ∶1，V ／ V ／ V ／ V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1 B。

圖1 薄層色譜圖S.Reference solution S1. Reference material solution S2.Negative reference solution 1 － 11. Test solutionA. Polygoni Multiflori Radix Praeparata（UV lamps，365 nm） B. Epimedium brevicornuFig.1 TLC chromatograms

3 討論

參考《中國(guó)藥典（一部）》安神補(bǔ)腦液及文獻(xiàn)［5－10］，確定 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯 －2 － O － β－ D 葡萄糖苷和淫羊藿苷分別為制劑中制何首烏和淫羊藿2 味主藥的指標(biāo)性功效成分。選擇何首烏及 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷、淫羊藿及淫羊藿苷作為薄層色譜鑒別的指標(biāo)性成分，特征性強(qiáng)，有利于制劑的質(zhì)量控制。

制何首烏薄層色譜鑒別中，曾參考2015 年版《中國(guó)藥典（一部）》制何首烏藥材［11］176鑒別項(xiàng)下的方法，于紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液與對(duì)照藥材溶液均顯淡黃色熒光斑點(diǎn)，但 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯 －2－ O－ β－ D 葡萄糖苷對(duì)照品溶液無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)；參考成方制劑安神補(bǔ)腦液項(xiàng)下［11］884制何首烏的薄層色譜鑒別及文獻(xiàn)［12］，調(diào)整提取方法與展開(kāi)劑，經(jīng)優(yōu)化，制訂了制何首烏的定性鑒別方法。該方法操作簡(jiǎn)單，且可同時(shí)監(jiān)測(cè)制何首烏藥材中多種標(biāo)志性成分，專(zhuān)屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，紫外光燈（365 nm）下檢視操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性及重復(fù)性均好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，可用于安神補(bǔ)腦膠囊中制何首烏的定性鑒別。

現(xiàn)行4 個(gè)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中淫羊藿的薄層色譜鑒別方法差異大，且部分標(biāo)準(zhǔn)缺乏淫羊藿對(duì)照藥材的參考。本研究結(jié)果表明，各廠(chǎng)家的供試品色譜圖中淫羊藿苷斑點(diǎn)清晰度差距明顯，可反映不同企業(yè)樣品中淫羊藿苷的含量差異［13］，利于對(duì)不同廠(chǎng)家的產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制與橫向?qū)Ρ?。本研究中最終確定的方法能同時(shí)檢測(cè)不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的安神補(bǔ)腦膠囊，且斑點(diǎn)清晰，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，適用于不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的安神補(bǔ)腦膠囊的質(zhì)量控制。